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流式细胞术检测中性粒细胞产生活性氧方法学探讨

蔡辉 姜丽娜 李柏青

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流式细胞术检测中性粒细胞产生活性氧方法学探讨

    作者简介: 蔡辉(1976-),男,硕士研究生.
  • 基金项目:

    国家科技重大专项基金资助项目(2008ZX10003-011)

  • 中图分类号: R329.24

A methodology for detection of reactive oxygen species of neutrophils by by flow cytometry

  • CLC number: R329.24

  • 摘要: 目的:建立用流式细胞术检测人外周血中性粒细胞(polymorphonuclear cells,PMN)产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)的方法。方法:健康人外周全血或用Percoll分离的PMN,加探荧光针双氢罗丹明123(DHR123)或2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)作用15 min,再加佛波醇酯(phorbo 12-myristate 13-acetate,PMA)于37℃作用5~90 min后,用流式细胞仪检测PMN内的罗丹明123(rhodamine 123,RHO)或氧化型二氯荧光素(dichlorofluorecin,DCF)的荧光强度,以反映PMN内ROS产生的水平。结果:以DHR123为荧光探针时,PMA刺激全血或分离PMN产生ROS的时间动力学相似,在37℃作用5~60 min ROS量呈递增趋势,且在60 min左右达到峰值,60~90 min时渐下降。以DCFH-DA为荧光探针时,PMA刺激全血PMN产生ROS,在37℃作用5 min时反应生成ROS量达到峰值,随后出现明显递减趋势,而PMA刺激分离PMN产生ROS在5~30 min逐渐增高并在60~90 min达平台期。实验中还发现甲醛试剂可以降低RHO的荧光强度。结论:采用流式细胞术检测PMN产生ROS是一种简便、可靠、稳定的方法。
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出版历程
  • 收稿日期:  2010-03-05

流式细胞术检测中性粒细胞产生活性氧方法学探讨

    作者简介: 蔡辉(1976-),男,硕士研究生.
  • 蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室, 安徽蚌埠 233030
基金项目:  国家科技重大专项基金资助项目(2008ZX10003-011)

摘要: 目的:建立用流式细胞术检测人外周血中性粒细胞(polymorphonuclear cells,PMN)产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)的方法。方法:健康人外周全血或用Percoll分离的PMN,加探荧光针双氢罗丹明123(DHR123)或2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)作用15 min,再加佛波醇酯(phorbo 12-myristate 13-acetate,PMA)于37℃作用5~90 min后,用流式细胞仪检测PMN内的罗丹明123(rhodamine 123,RHO)或氧化型二氯荧光素(dichlorofluorecin,DCF)的荧光强度,以反映PMN内ROS产生的水平。结果:以DHR123为荧光探针时,PMA刺激全血或分离PMN产生ROS的时间动力学相似,在37℃作用5~60 min ROS量呈递增趋势,且在60 min左右达到峰值,60~90 min时渐下降。以DCFH-DA为荧光探针时,PMA刺激全血PMN产生ROS,在37℃作用5 min时反应生成ROS量达到峰值,随后出现明显递减趋势,而PMA刺激分离PMN产生ROS在5~30 min逐渐增高并在60~90 min达平台期。实验中还发现甲醛试剂可以降低RHO的荧光强度。结论:采用流式细胞术检测PMN产生ROS是一种简便、可靠、稳定的方法。

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