• 中国科技论文统计源期刊
  • 中国科技核心期刊
  • 中国高校优秀期刊
  • 安徽省优秀科技期刊

留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

激活转录因子-2调控小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶-20分子机制的初步研究

王文江 ,  冯琦 ,  袁杰 ,  高玉光

downloadPDF
文章导航 > 蚌埠医学院学报  > 2014,  39 > 11: (1460-1463)  
引用本文:
shu
Citation:
shu

激活转录因子-2调控小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶-20分子机制的初步研究

  • 1. 安徽省蚌埠市第一人民医院 口腔科, 233000;

  • 2. 甘肃省平凉市人民医院 口腔科, 744000;

  • 3. 滨州医学院附属医院 口腔科, 山东 滨州 256603

    • 作者简介: 王文江(1985-),男,住院医师.
    通讯作者: 高玉光, 副教授.287781375@qq.com

  • 中图分类号: R780.2

Preliminary study of the molecular mechanisms of activating transcription factor-2 regulating matrix metalloproteinase-20 in mice ameloblasts

  • 1. Department of Stomatology, The First People's Hospital of Bengbu, Bengbu Anhui 233000, China;

  • 2. Department of Stomatology, The People's Hospital of Pingliang, Pingliang Gansu 744000, China;

  • 3. Department of Stomatology, The Affiliated Hospital of Binzhou Medical College, Binzhou Shandong 256603, China

    • Corresponding author: GAO Yu-guang, 副教授.287781375@qq.com

  • CLC number: R780.2

  • 摘要: 目的:通过克隆激活转录因子-2(ATF-2)基因以及真核表达载体的构建,初步研究ATF-2对小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶-20(MMP-20)基因表达的影响。方法:根据引物设计原则设计ATF-2基因逆转录-聚合酶链反应(PCR)引物,从小鼠成釉细胞中提取总RNA逆转录所得cDNA为模板,进行PCR法扩增。得出含有Hind Ⅲ 和xhol酶切位点的ATF-2目的基因连接到pcDNA 3.1/myc-HisA真核表达载体上;用重组质粒转染小鼠MMP-20基因,观察其对MMP-20基因转录活性的影响。结果:经过PCR引物扩增得到1 463 bp基因片段,将获得的重组质粒pcDNA 3.1/myc-HisA-ATF-2双酶切分析鉴定,测序结果与Gen Bank登录基因序列完全一致;双荧光素酶结果显示ATF-2可以促进MMP-20启动子的表达(P<0.01),且在-825～+23(848 bp)启动子区段促进作用最明显。结论:成功实现了ATF-2基因克隆及真核表达载体的构建,并发现ATF-2对MMP-20启动子区域活性表达起正向调节作用。
    Abstract: Objective: To clone the activating transcription factor-2(ATF-2) gene,then construct the recombinant eukaryotic expression vector with ATF-2,and explore the effects of ATF-2 on the gene expression of matrix metalloproteinase-20(MMP-20) in mice ameloblasts.Methods: The reverse transcription PCR primers of ATF-2 were designed.The total RNA from the mice ameloblasts was extracted to obtain cDNA for PCR amplification.The ATF-2 gene containing Hind Ⅲ and xhol restriction sites was inserted into the eukaryotic expression vector(pcDNA 3.1/myc-HisA).The effects of ATF-2 on the transcriptional activity of MMP-20 was observed after transfecting the recombinant plasmid.Results: One thousand four hundred and sixty-three bp gene fragment was amplified through PCR.The recombinant eukaryotic expression vector with ATF-2(pcDNA 3.1/myc-HisA-ATF-2) was successful constructed by the verification of dual enzyme digestion and sequencing.The luciferase test showed that ATF-2 gene could promote the expression of MMP-20 promoter(P<0.01).Conclusions: The recombinant pcDNA 3.1/myc-HisA-ATF-2 expression vector is successful constructed.ATF-2 can positive regulate the promoter activity of MMP-20.
  • [1] Dynan WS,Tjian R.The promoter-specific transcription factor Sp1 binds to upstream sequences in the SV40 early promoter[J].Cell,1983,35(1):79-87.
    [2] Schuh R,Aicher W,Gaul U,et al.A conserved family of nuclear proteins containing structural elements of the finger protein encoded by Krüppel,a Drosophila segmentation gene[J].Cell,1986,47(6):1025-1032.
    [3] Han SI,Yasuda K,Kataoka K.ATF-2 interacts with beta-cell-enriched transcription factors,MafA,Pdx1,and beta2,and activates insulin gene transcription[J].Biol Chem,2011,286(12):10449-10456.
    [4] Reimold AM,Grusby MJ,Kosaras B,et al.Chondrodysplasia and neurological abnormalities in ATF-2-deficient mice[J].Nature,1996,379(6562):262-265.
    [5] Gupta S,Campbell D,Dérijard B,et al.Transcription factor ATF-2 regulation by the JNK signal transduction pathway[J].Science,1995,267(5196):389-393.
    [6] Leslie MC,Bar-Eli M.Regulation of gene expression in melanoma:new approaches for treatment[J].J Cell Biochem,2005,94(1):25-38.
    [7] Papassava P,Gorgoulis VG,Papaevangeliou D,et al.Overexpression of activating transcription factor-2 is required for tumor growth and progression in mouse skin tumors [J].Cancer Res,2004,64(23):8573-8584.
    [8] Li XY,Green MR.Intramolecular inhibition of activating transcription factor-2 function by its DNA-binding domain[J].Genes Dev,1996,10(5):517-527.
    [9] El Btaouri H,Morjani H,Greffe Y,et al.Role of JNK/ATF-2 pathway in inhibition of thrombospondin-1(TSP-1) expression and apoptosis mediated by doxorubicin and camptothecin in FTC-133 cells[J].Biochim Biophys Acta,2011,1813(5):695-703.
    [10] Zhang JY,Jiang H,Gao W,et al.The JNK/AP1 /ATF-2 pathway is involved in H2O2 -induced acetylcholinesterase expression during apoptosis[J].Cell Mol Life Sci,2008,65(9):1435-1445.
    [11] Song H,Ki SH,Kim SG,et al.Activating transcription factor 2 mediates matrix metalloproteinase-2 transcriptional activation induced by p38 in breast epithelial cells[J].Cancer Res,2006,66(21):10487-10496.
  • [1] 张玉心 , 马涛 , 陈治文 , 夏俊 . 肿瘤坏死因子-α转换酶基因金属蛋白酶区的克隆及表达. 蚌埠医学院学报, 2006, 31(1): 4-6.
    [2] 周礼华 , 陈冲 , 张朋 , 王力 , 吴学森 . 氯氰菊酯对小鼠小脑组织氧化损伤及核转录因子-E2相关因子2基因表达的影响. 蚌埠医学院学报, 2016, 41(7): 845-848,853. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.07.002
    [3] 张晓猛 , 刘超 , 夏光云 . Th1/Th2型细胞因子在小鼠肺纤维化发病中的作用. 蚌埠医学院学报, 2013, 37(8): 932-934.
    [4] 袁远英 , 方强 , 孙新 , 王雪梅 , 李柏青 , 夏惠 . 猪白细胞介素12 p35、p40亚基基因的克隆和序列分析. 蚌埠医学院学报, 2008, 33(6): 644-647.
    [5] 董春玲 , 王桂芳 , 肖奎 , 李波 , 马忠森 , 白春学 . 水通道蛋白3基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定. 蚌埠医学院学报, 2007, 32(5): 505-507.
    [6] 王淑艳 , 陈以文 , 于雪 , 刘丹彤 , 盛春瑞 , 畅洪昇 , 李丽娜 . 小鼠支气管肺泡干细胞的分离、鉴定与三维培养体系的构建. 蚌埠医学院学报, 2020, 45(1): 1-4. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2020.01.001
    [7] 陈传好 , 陈昌杰 , 赵莉 . 人神经营养素-3全长基因克隆及序列分析. 蚌埠医学院学报, 2005, 30(1): 9-11.
    [8] 邱筱婷 , 巩红校 , 朱玲 , 霍星星 . 原发性干燥综合征小鼠唾液腺组织及唾液的转录组和蛋白质组分析. 蚌埠医学院学报, 2023, 48(6): 711-716. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2023.06.002
    [9] 骆江坤 , 方强 , 齐文娟 , 王雪梅 . 人白细胞介素23 p19亚基基因的克隆和序列分析. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(6): 545-547.
    [10] 吴良霞 , 林晓亮 , 徐敏 , 张建华 . 哮喘小鼠肺组织中趋化因子干扰素-γ诱导蛋白-10、干扰素-γ诱导单核细胞因子表达及其意义. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(1): 15-17.
    [11] 孙祥瑞 , 高家荣 , 汪庆飞 , 王婷 . 补骨脂-肉豆蔻醇提物对脾虚泄泻小鼠水通道蛋白及结肠中细胞因子的影响. 蚌埠医学院学报, 2018, 43(2): 152-155,159. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2018.02.004
    [12] 钟裕恒 , 黄湘 , 王莹 , 郑国兵 , 李红艳 , 张艳芳 . RPS27a蛋白重组质粒的构建及其在肝癌细胞株的定位. 蚌埠医学院学报, 2017, 42(4): 421-424. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2017.04.001
    [13] 李薇 , 王文平 , 陈亮 , 王珍祥 . 骨桥蛋白基因质粒的构建及慢病毒包装的实验研究. 蚌埠医学院学报, 2015, 40(5): 564-568. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2015.05.002
    [14] 刘雪 , 张折折 , 罗宝灵 , 陈贵海 , 梁冰 . 胚胎期炎症暴露对中老年海马脑源性神经营养因子基因表达和认知功能的影响. 蚌埠医学院学报, 2023, 48(1): 83-86, 94. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2023.01.016
    [15] 李秀义 , 高冬梅 , 温和 . 存活蛋白重组腺病毒载体感染的树突细胞对体外淋巴瘤细胞生长的影响. 蚌埠医学院学报, 2013, 37(11): 1399-1401.
    [16] 董银凤 , 陈前芬 . 硫酸镁对小鼠脑缺血再灌注损伤后一氧化氮及ATP酶的影响. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(4): 330-333.
    [17] 杨芬 , 刘浩 , 余美玲 , 张翠玲 . 三七粉对小鼠S180移植肿瘤的抑制作用及免疫功能的影响. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(3): 195-197.
    [18] 姚克 , 陈涛 , 王冬 , 高俊明 . miR-186靶向调控骨桥蛋白基因表达对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响. 蚌埠医学院学报, 2017, 42(1): 30-33. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2017.01.008
    [19] 顾蓉蓉 , 丁长伟 . miRNA-200c/SOX2轴在实验性牙周炎牙槽骨吸收中的作用研究. 蚌埠医学院学报, 2023, 48(3): 281-285. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2023.03.001
    [20] 胡爱武 , 刘小阳 , 秦宜德 . 微量元素氟对小鼠甲状腺功能的影响. 蚌埠医学院学报, 2008, 33(4): 392-394.
  • 加载中
WeChat 点击查看大图
计量
  • 文章访问数:  2984
  • HTML全文浏览量:  265
  • PDF下载量:  4
  • 被引次数: 0
出版历程
  • 收稿日期:  2013-05-17

激活转录因子-2调控小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶-20分子机制的初步研究

    通讯作者: 高玉光, 副教授.287781375@qq.com
    作者简介: 王文江(1985-),男,住院医师.
  • 1. 安徽省蚌埠市第一人民医院 口腔科, 233000;
  • 2. 甘肃省平凉市人民医院 口腔科, 744000;
  • 3. 滨州医学院附属医院 口腔科, 山东 滨州 256603
  • 收稿日期: 2013-05-17

摘要: 目的:通过克隆激活转录因子-2(ATF-2)基因以及真核表达载体的构建,初步研究ATF-2对小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶-20(MMP-20)基因表达的影响。方法:根据引物设计原则设计ATF-2基因逆转录-聚合酶链反应(PCR)引物,从小鼠成釉细胞中提取总RNA逆转录所得cDNA为模板,进行PCR法扩增。得出含有Hind Ⅲ 和xhol酶切位点的ATF-2目的基因连接到pcDNA 3.1/myc-HisA真核表达载体上;用重组质粒转染小鼠MMP-20基因,观察其对MMP-20基因转录活性的影响。结果:经过PCR引物扩增得到1 463 bp基因片段,将获得的重组质粒pcDNA 3.1/myc-HisA-ATF-2双酶切分析鉴定,测序结果与Gen Bank登录基因序列完全一致;双荧光素酶结果显示ATF-2可以促进MMP-20启动子的表达(P<0.01),且在-825～+23(848 bp)启动子区段促进作用最明显。结论:成功实现了ATF-2基因克隆及真核表达载体的构建,并发现ATF-2对MMP-20启动子区域活性表达起正向调节作用。

English Abstract

    全文HTML

参考文献 (11)

目录

    /

    返回文章
    返回

    版权所有© 2019《蚌埠医学院学报》编辑部 皖ICP备06000434号-1

    地址：安徽省蚌埠市东海大道2600号 邮编：233030

    电话：0552-3175456 Email：byxb@vip.163.com

    本系统由 北京仁和汇智信息技术有限公司 开发 技术支持： info@rhhz.net   百度统计