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人载脂蛋白M野生型和突变型表达载体的构建及鉴定

丁淑琴 章尧 陈昌杰 杨清玲 程龙强

引用本文:
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人载脂蛋白M野生型和突变型表达载体的构建及鉴定

    作者简介: 丁淑琴(1980-),女,硕士研究生.
    通讯作者: 章尧, 教授.zhangyao@bbmc.edu.cn
  • 基金项目:

    安徽省自然科学基金资助项目(090413111)

  • 中图分类号: R341.35

Construction and identification of wild-type and mutant human apolipoprotein M expression plasmid

    Corresponding author: ZHANG Yao, 教授.zhangyao@bbmc.edu.cn ;
  • CLC number: R341.35

  • 摘要: 目的: 构建人载脂蛋白M (APoM)野生型和突变型原核表达载体PGEX-KG-APoM及真核表达载体PcDNA3.1(+)-APoM。方法: Trizol法抽提HePG2细胞总RNA,RT-PCR扩增APoM全长基因,将基因片断重组到PMD18-T质粒中构建PMD18-T-APoM重组质粒载体,转化到大肠埃希菌JM109后筛选阳性克隆,提取质粒酶切和测序鉴定。采用Sited-directedMutagenesis定点诱变试剂盒对APoM基因进行体外定点诱变,DNA测序鉴定定点诱变成功与否。用双酶切方法分别将APoM野生型和突变型基因定向连接到原核表达载体PGEX-KG和真核表达载体PcDNA3.1(+)中,构建野生型和突变型PGEX-KGAPoM重组体和PcDNA3.1(+)-APoM重组体,分别转化到大肠埃希菌DH5α内,提取质粒酶切鉴定和测序鉴定。结果: 成功克隆了APoM并构建了野生型和突变型原核表达载体和真核表达载体。结论: 通过RT-PCR,定点诱变及基因重组技术成功构建野生型和突变型重组表达质粒PGEX-KG-APoM和PcDNA3.1(+)-APoM,为进一步研究APoM的功能奠定了基础。
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出版历程
  • 收稿日期:  2010-12-08

人载脂蛋白M野生型和突变型表达载体的构建及鉴定

    通讯作者: 章尧, 教授.zhangyao@bbmc.edu.cn
    作者简介: 丁淑琴(1980-),女,硕士研究生.
  • 1. 蚌埠医学院临床检验学实验中心, 安徽蚌埠 233030;
  • 2. 蚌埠医学院生化与分子生物学教研室, 安徽蚌埠 233030
基金项目:  安徽省自然科学基金资助项目(090413111)

摘要: 目的: 构建人载脂蛋白M (APoM)野生型和突变型原核表达载体PGEX-KG-APoM及真核表达载体PcDNA3.1(+)-APoM。方法: Trizol法抽提HePG2细胞总RNA,RT-PCR扩增APoM全长基因,将基因片断重组到PMD18-T质粒中构建PMD18-T-APoM重组质粒载体,转化到大肠埃希菌JM109后筛选阳性克隆,提取质粒酶切和测序鉴定。采用Sited-directedMutagenesis定点诱变试剂盒对APoM基因进行体外定点诱变,DNA测序鉴定定点诱变成功与否。用双酶切方法分别将APoM野生型和突变型基因定向连接到原核表达载体PGEX-KG和真核表达载体PcDNA3.1(+)中,构建野生型和突变型PGEX-KGAPoM重组体和PcDNA3.1(+)-APoM重组体,分别转化到大肠埃希菌DH5α内,提取质粒酶切鉴定和测序鉴定。结果: 成功克隆了APoM并构建了野生型和突变型原核表达载体和真核表达载体。结论: 通过RT-PCR,定点诱变及基因重组技术成功构建野生型和突变型重组表达质粒PGEX-KG-APoM和PcDNA3.1(+)-APoM,为进一步研究APoM的功能奠定了基础。

English Abstract

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