肿瘤坏死因子-α转换酶基因金属蛋白酶区的克隆及表达

张玉心; 马涛; 陈治文; 夏俊

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肿瘤坏死因子-α转换酶基因金属蛋白酶区的克隆及表达

张玉心 , 马涛 , 陈治文 , 夏俊

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肿瘤坏死因子-α转换酶基因金属蛋白酶区的克隆及表达

1. 蚌埠医学院生物化学和分子生物学教研室, 安徽蚌埠 233030;
2. 蚌埠医学院药物分析教研室, 安徽蚌埠 233030

作者简介: 张玉心(1976-),女,硕士,讲师.

基金项目:
蚌埠医学院科研项目(No.BY0408)

安徽省教育厅自然科学研究资助项目(No.2005kj285)
中图分类号: R730.3

Cloning and expression of gene encoding metalloproteinase domain of tumor necrosis factor-α converting enzyme

Department of Biochemistry and Molecular Biology, Bengbu Medical College, Bengbu 233030, China
CLC number: R730.3

摘要: 目的: 克隆和构建含有肿瘤坏死因子-α转换酶金属蛋白酶区(metallopro teinase dom ain of human tumor necrosis factor-αconve rting enzyme,TACEmp)基因表达载体,并在大肠埃希菌中高效表达。方法: 用RT-PCR方法,从THP-1细胞中扩增出TACEmp基因片段,插入表达载体pET-DsbA^mut,用限制性酶切和DNA测序进行鉴定;转化到大肠埃希菌BL21中进行诱导表达,通过SDS-PAGE电泳分析表达产物。结果: 克隆TACEmp基因并构建重组表达载体pET-DsbA^mut-TACEmp转化入BL21,IPTG诱导后获得高效表达的TACEmp融合表达蛋白。结论: 利用分子伴侣融合蛋白技术使TACEmp在原核表达系统中获得了高效可溶性表达。
- 肿瘤坏死因子-α转换酶 /
- 二硫键异构酶 /
- 基因克隆 /
- 原核表达
Abstract: Objective: To construct expression vector of the metalloproteinase domain of human tumor necrosis factor-α converting enzyme(TACEmp) and express its protein in E.coli.Methods: RT-PCR and sequencing were used to clone and confirm the TACEmp gene.The fusion expression vector was constructed with the prokaryotic expression vector including disulfide isomerase dsbA gene and the TACEmp,named pET-DsbA^mut-TACEmp,and transformed into E.coli.BL21.After induced by IPTG,expression product was analyzed by SDS-PAGE.Results: TACEmp was cloned by RT-PCR.The recombinant vector pET-DsbA^mut-TACEmp was constructed.The fusion protein was expressed at high level in E.coli.Conclusions: The TACEmp was expressed at high level in prokaryotic expression system by using fusion protein technology.The expression of TACEmp protein may be useful for the study of biological functions of TACEmp and it's biotherapy in TACEmp related diseases.
- tumor necrosis factor-α converting enzyme /
- disulfide isomerase /
- gene cloning /
- prokaryotic expression

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肿瘤坏死因子-α转换酶基因金属蛋白酶区的克隆及表达

作者简介: 张玉心(1976-),女,硕士,讲师.

1. 蚌埠医学院生物化学和分子生物学教研室, 安徽蚌埠 233030;
2. 蚌埠医学院药物分析教研室, 安徽蚌埠 233030

收稿日期: 2005-06-22

基金项目: 蚌埠医学院科研项目(No.BY0408)安徽省教育厅自然科学研究资助项目(No.2005kj285)

关键词:

摘要: 目的: 克隆和构建含有肿瘤坏死因子-α转换酶金属蛋白酶区(metallopro teinase dom ain of human tumor necrosis factor-αconve rting enzyme,TACEmp)基因表达载体,并在大肠埃希菌中高效表达。方法: 用RT-PCR方法,从THP-1细胞中扩增出TACEmp基因片段,插入表达载体pET-DsbA^mut,用限制性酶切和DNA测序进行鉴定;转化到大肠埃希菌BL21中进行诱导表达,通过SDS-PAGE电泳分析表达产物。结果: 克隆TACEmp基因并构建重组表达载体pET-DsbA^mut-TACEmp转化入BL21,IPTG诱导后获得高效表达的TACEmp融合表达蛋白。结论: 利用分子伴侣融合蛋白技术使TACEmp在原核表达系统中获得了高效可溶性表达。