靶向mdr1基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定

干惠珠; 张桂珍; 张凤春; 卜丽莎; 杨绍娟; 高申; 郑德明

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靶向mdr1基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定

干惠珠 , 张桂珍 , 张凤春 , 卜丽莎 , 杨绍娟 , 高申 , 郑德明

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靶向mdr1基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定

1. 吉林大学中日联谊医院血液肿瘤科, 吉林长春 130031;
2. 吉林大学中日联谊医院中心研究室, 吉林长春 130031;
3. 上海交通大学医学部附属仁济医院肿瘤科, 上海 200001

作者简介: 干惠珠(1972-),女,博士,主治医师.

基金项目:
国家自然科学基金(No.30171064)及吉林大学创新基金(2003CX045)资助项目
中图分类号: R73-3

Construction and identification of pSilencer^TM 3.1-H1 neo mdr1 short hairpin RNA expression vectors

1. Department of Oncology, China-Japan Union Hospital, Jilin University, Changchun 130031;
2. Central Laboratory, China-Japan Union Hospital, Jilin University, Changchun 130031;
3. Department of Oncology, Renji Hospital, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200001, China
CLC number: R73-3

摘要: 目的: 设计并构建靶向mdr1基因shRNA真核表达质粒。方法: 以mdr1为靶基因设计具有短发夹结构的模板寡核苷酸,退火形成互补双链结构,再克隆至pSilencer^TM3.1-H1neo载体,构建重组的短发夹shRNA表达载体。采用酶切法和测序法鉴定。结果: 经限制性内切酶酶切电泳后显示有66bp模板寡核苷酸片段和4.3kbp的线性化的pSilencer^TM3.1-H1neo载体片段。重组子测序结果与Genebank中的mdr1基因cDNA序列相符。结论: 重组靶向mdr1基因shRNA表达载体构建正确,为进一步转染耐药的肿瘤细胞逆转肿瘤耐药研究奠定了基础。
- mdr1基因 /
- RNA干扰 /
- shRNA表达载体
Abstract: Objective: To study the construction of pSilencer^TM 3.1-H1 neo mdr1 short hairpin RNA expression vectors.Methods: Two different shRNA targets desigened to be homologous to the P-glycoprotein (P-gp) encoding mdr1 mRNA consensus sequence, were annealed and ligated into the BamHⅠ and Hind Ⅲ site of linearized pSilencer^TM 3.1-H1 neo vector.The recombinant named as pSilencer^TM3.1-H1 neo mdr1-A and mdr1-B shRNA expression plasmids was identificated by restrictive enzyme digestion and sequencing.Results: The fragments of 66 bp and 4.3 kbp were shown after digestion by BamHⅠ and Hind Ⅲ and agarose gel electrophoresis.The DNA sequences of pSilencer^TM3.1-H1 neo mdr1-A and mdr1-B shRNA expression plasmids were proved to be identical to the data of mdr1 in Genebank.Conclusions: pSilencer^TM3.1-H1 neo mdr1 shRNA expression vectors has been constructed successfully.
- mdr1 gene /
- RNA interference /
- shRNA expression vector

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靶向mdr1基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定

作者简介: 干惠珠(1972-),女,博士,主治医师.

1. 吉林大学中日联谊医院血液肿瘤科, 吉林长春 130031;
2. 吉林大学中日联谊医院中心研究室, 吉林长春 130031;
3. 上海交通大学医学部附属仁济医院肿瘤科, 上海 200001

收稿日期: 2006-09-25

基金项目: 国家自然科学基金(No.30171064)及吉林大学创新基金(2003CX045)资助项目

关键词:

摘要: 目的: 设计并构建靶向mdr1基因shRNA真核表达质粒。方法: 以mdr1为靶基因设计具有短发夹结构的模板寡核苷酸,退火形成互补双链结构,再克隆至pSilencer^TM3.1-H1neo载体,构建重组的短发夹shRNA表达载体。采用酶切法和测序法鉴定。结果: 经限制性内切酶酶切电泳后显示有66bp模板寡核苷酸片段和4.3kbp的线性化的pSilencer^TM3.1-H1neo载体片段。重组子测序结果与Genebank中的mdr1基因cDNA序列相符。结论: 重组靶向mdr1基因shRNA表达载体构建正确,为进一步转染耐药的肿瘤细胞逆转肿瘤耐药研究奠定了基础。

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作者简介: 干惠珠(1972-),女,博士,主治医师.

Construction and identification of pSilencerTM 3.1-H1 neo mdr1 short hairpin RNA expression vectors

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靶向mdr1基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定

作者简介: 干惠珠(1972-),女,博士,主治医师.

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