人自噬相关基因LC3B真核表达载体的构建及鉴定

朱晓骏; 孙学华; 刘顺庆; 高月求

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人自噬相关基因LC3B真核表达载体的构建及鉴定

朱晓骏 , 孙学华 , 刘顺庆 , 高月求

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人自噬相关基因LC3B真核表达载体的构建及鉴定

1.
上海中医药大学附属曙光医院肝病科,上海,201203

作者简介: 朱晓骏(1978-)，女，主治医师

通讯作者: 高月求

基金项目:
国家十一五课题重大科技专项资助项目(2008ZX10005-006)

国家自然科学基金资助项目(81102570)

国家自然科学基金资助项目(81072792)

上海市卫生局课题资助项目(2010QL007A)

上海市教育委员会重点学科资助项目(J50307)

上海市教育委员会E研究院建设计划资助项目(03008)

上海市科委优秀学科带头人资助项目(10XD1404100)

上海市自然科学研究基金资助项目(10ZR1430900)

Construction and identification of eukaryotic expression vector recombined with human autopha}y-related LC3B gene

1.
Department of Hepatopathy, Shuguang Hospital Affiliated of Shanghai Traditional Chinese Medicine University, Shanghai 201203, China

Corresponding author: GAO Yue-qiu

摘要: 目的：构建人自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3B，MAP1LC3B)真核表达栽体，并鉴定其生物学功能。方法：通过RT-PCR方法扩增得到人MAP1LC3B cDNA；应用基因重组技术构建pEGFP-N1-LC3B真核表达载体，通过酶切和测序进行鉴定；倒置荧光显微镜下观察EBBS诱导4 h后pEGFP-N1-LC3B表达载体转染的HepG2.2.15细胞质中GFP-LC3B分布的变化。结果：通过测序鉴定，pEGFP-N1-LC3B真核表达载体序列正确，编码框正确；转染后的HepG2.2.15细胞经EBBS诱导4 h后，倒置荧光显微镜检测发现GFP-LC3B由散在分布向点状分布改变。结论：成功构建了人自噬相关基因LC3B真核表达载体，为进一步研究自噬在乙型肝炎病毒中的作用机制奠定了基础。
- 基因表达 /
- 微管相关蛋白1轻链3B /
- HepG2.2.15细胞 /
- 自噬
Abstract: Objective:To construet the eukaryotie expression vector with human autophagy-related mic;rotubule ssociated protein 1
- gene expression /
- microtubule-associated protein 1 light chain 3B /
- HepG2.2. 15 cell /
- autophagy

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人自噬相关基因LC3B真核表达载体的构建及鉴定

通讯作者: 高月求

作者简介: 朱晓骏(1978-)，女，主治医师

1. 上海中医药大学附属曙光医院肝病科,上海,201203

收稿日期: 2011-08-07
网络出版日期: 2012-02-15

基金项目: 国家十一五课题重大科技专项资助项目(2008ZX10005-006)国家自然科学基金资助项目(81102570)国家自然科学基金资助项目(81072792)上海市卫生局课题资助项目(2010QL007A)上海市教育委员会重点学科资助项目(J50307)上海市教育委员会E研究院建设计划资助项目(03008)上海市科委优秀学科带头人资助项目(10XD1404100)上海市自然科学研究基金资助项目(10ZR1430900)

关键词:

摘要: 目的：构建人自噬相关基因微管相关蛋白1轻链3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3B，MAP1LC3B)真核表达栽体，并鉴定其生物学功能。方法：通过RT-PCR方法扩增得到人MAP1LC3B cDNA；应用基因重组技术构建pEGFP-N1-LC3B真核表达载体，通过酶切和测序进行鉴定；倒置荧光显微镜下观察EBBS诱导4 h后pEGFP-N1-LC3B表达载体转染的HepG2.2.15细胞质中GFP-LC3B分布的变化。结果：通过测序鉴定，pEGFP-N1-LC3B真核表达载体序列正确，编码框正确；转染后的HepG2.2.15细胞经EBBS诱导4 h后，倒置荧光显微镜检测发现GFP-LC3B由散在分布向点状分布改变。结论：成功构建了人自噬相关基因LC3B真核表达载体，为进一步研究自噬在乙型肝炎病毒中的作用机制奠定了基础。