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野生型及突变型人血管内皮生长因子A真核表达载体的构建与鉴定

吴勇 刘学刚 郭嘉诚 李慧敏 宋伟 丁周志 王亚明 赵武 徐家丽

引用本文:
Citation:

野生型及突变型人血管内皮生长因子A真核表达载体的构建与鉴定

    作者简介: 吴勇(1981-),男,硕士研究生
    通讯作者: 赵武, zhaowuronghai@yahoo.Com
  • 基金项目:

    安徽省自然科学基金项目(11040606M198)

Construction and identification of eukaryotic expression vectors of human wild-type and mutant-type vascular endothelial growth factor A gene

    Corresponding author: ZHAO Wu, zhaowuronghai@yahoo.Com ;
  • 摘要: 目的:构建人野生型和c.454CT突变型血管内皮生长因子A(VEGFA)真核表达载体。方法:采用反转录聚合酶链反应扩增人VEGFA基因,用限制性核酸内切酶BglⅡ和SalⅠ双酶切后连接真核表达载体pEGFP-N1,构建野生型VEGFA真核表达载体(野生型pEGFP-VEGFA),通过双酶切和测序进行鉴定。采用定点诱变PCR技术构建c.454CT突变型人VEGFA真核表达载体(突变型pEGFP-VEGFA),同样通过双酶切和测序进行鉴定。结果:野生型和突变型pEGFP-VEGFA被双酶切为4 697 bp和1 251 bp两条条带。测序结果证实野生型pEGFP-VEGFA VEGFA序列与GenBank公布的VEGFA mRNA序列完全一致,突变型pEGFP-VEGFA除第454位碱基C被T替代以外,其余序列与野生型完全一致。结论:成功构建了野生型和突变型pEGFP-VEGFA,为下一步研究VEGFA基因功能提供参考。
  • [2] Zhao W,Wang J,Shen J,et al. Mutations in VEGFA are associated with congenital left ventricular outflow tract obstruction[J]. Biochem Biophys res Commun, 2010, 396( 2) : 483 - 488.
    [2] McBride KL,Pignatelli r,Lewin M, et al. Inheritance analysis of congenital left ventricular outflow tract obstruction malformations:Segregation,multiplex relative risk,and heritability[J]. Am J Med Genet A,2005,134A( 2) : 180 - 186.
    [3] Aboulhosn J,Child JS. Left ventricular outflow obstruction:subaortic stenosis,bicuspid aortic valve,supravalvar aortic stenosis,and coarctation of the aorta[J]. Circulation,2006,114( 22) : 2412 - 2422.
    [4] Wessels MW,Berger rM,Frohn-Mulder IM,et al. Autosomal dominant inheritance of left ventricular outflow tract obstruction [J]. Am J Med Genet A, 2005, 134A( 2) : 171 - 179.
    [5] Kerstjens-Frederikse WS,Du Marchie Sarvaas GJ,ruiter JS,etal. Left ventricular outflow tract obstruction: should cardiac screening be offered to first-degree relatives? [J]. Heart,2011,97( 15) : 1228 - 1232.
    [6] McBride KL,riley MF,Zender GA, et al. NOTCH1 mutations in individuals with left ventricular outflow tract malformations reduce ligand-induced signaling[J]. Hum Mol Genet,2008,17( 18) :2886 - 2893.
    [7] 李宝珍,李素梅,施卫明,等. 利用重叠PCr 技术对OsAMT112 进行定点突变[J]. 生物技术通报,2009 ( 9 ) :69 - 72.
    [8] Tee MK, Jaffe rB. A precursor form of vascular endothelial growth factor arises by initiation from an upstream in-frame CUG codon[J].Biochem J,2001,359( Pt 1) : 219 - 226.
    [9] Huez I,Bornes S,Bresson D,et al. New vascular endothelial growth factor isoform generated by internal ribosome entry sitedriven CUG translation initiation[J]. Mol Endocrinol,2001,15( 12) : 2197 - 2210.
    [10] Meiron M,Anunu r,Scheinman EJ, et al. New isoforms of VEGF are translated from alternative initiation CUG codons located in its5' UTr[J]. Biochem Biophys res Commun,2001,282 ( 4 ) :1053 - 1060
  • [1] 吴勇刘学刚赵武徐家丽郭嘉诚李慧敏丁周志王亚明宋伟 . 野生型及c.454C>T突变型人血管内皮生长因子A基因重组真核表达载体的体外表达. 蚌埠医学院学报, 2015, 40(2): 148-151. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2015.02.003
    [2] 郭术俊赵保明吕合作胡建国 . 用于双分子荧光互补技术的Olig1/Id2基因真核表达载体的构建和鉴定. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(10): 973-975.
    [3] 管俊昌刘勇徐飞夏佩莹 . 金葡菌及其L型诱导脐静脉内皮细胞凋亡及相关基因的研究. 蚌埠医学院学报, 2005, 30(2): 98-100.
    [4] 赵武王剑沈捷傅启华吉炜李奋 . VEGFA基因c.1039G>A单核苷酸多态性可能增加二叶式主动脉瓣的发生危险. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(10): 986-990.
    [5] 赵武马里奥孙琦杭航高科刘义 . 儿童青少年新诊断糖尿病酮症酸中毒临床、遗传学及随访分析. 蚌埠医学院学报, 2023, 48(3): 311-313. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2023.03.007
    [6] 栾文斌项平 . 视网膜干细胞相关基因的研究进展. 蚌埠医学院学报, 2012, 36(11): 1402-1405.
    [7] 欧玉荣张洪福 . 大肠癌患者粪便p53基因检测及其临床意义. 蚌埠医学院学报, 2005, 30(3): 195-197.
    [8] 蔡朝阳马筱玲纪冰赵燕 . 金黄色葡萄球菌毒素基因的检测及临床应用. 蚌埠医学院学报, 2008, 33(1): 9-12.
    [9] 马飞郭术俊李柏青 . 基因扫描技术检测人TCR δ2链CDR3多态性的方法. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(5): 433-436.
    [10] 赵芳芳 . 幽门螺杆菌空泡毒素编码基因及致病机制研究进展. 蚌埠医学院学报, 2006, 31(1): 108-109.
    [11] 冯艳李志军 . 系统性红斑狼疮易感基因的研究进展. 蚌埠医学院学报, 2011, 36(11): 1284-1287.
    [12] 王春石建华汪万英 . p53和p16基因在甲状腺癌中的研究进展. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(5): 455-457.
    [13] 徐颖石建华项平 . 胰岛素降解酶基因与2型糖尿病的关系研究进展. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(4): 426-429.
    [14] 管俊昌夏佩莹唐素兰 . 金黄色葡萄球菌L型产B型肠毒素及其基因的研究. 蚌埠医学院学报, 2004, 29(4): 283-285.
    [15] 马涛陶润关翰张家俊 . 基于TCGA数据库探究膀胱癌关键基因的表达及预后作用. 蚌埠医学院学报, 2022, 47(6): 811-817. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2022.06.027
    [16] 陆国玉 . 肺癌相关基因研究进展. 蚌埠医学院学报, 2006, 31(3): 320-322.
    [17] 陈冬生程双怀聂刘旺 . Sox基因家族的特点及其功能. 蚌埠医学院学报, 2005, 30(1): 92-94.
    [18] 茆海丰胡飞 . 产ESBLs大肠埃希菌的氨基糖苷抗菌药物耐药性及氨基糖苷类钝化酶基因检测. 蚌埠医学院学报, 2008, 33(1): 94-96.
    [19] 周慧琴徐达良董扬江家云伊世奇 . COL4A5基因c.4518_c.4519 insC新突变所致X连锁显性遗传Alport综合征的分子遗传学及临床分析. 蚌埠医学院学报, 2019, 44(9): 1217-1220. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2019.09.020
    [20] 杜文华 . 脂联素的研究现状. 蚌埠医学院学报, 2007, 32(1): 113-115.
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出版历程
  • 收稿日期:  2012-11-11
  • 刊出日期:  2013-09-15

野生型及突变型人血管内皮生长因子A真核表达载体的构建与鉴定

    通讯作者: 赵武, zhaowuronghai@yahoo.Com
    作者简介: 吴勇(1981-),男,硕士研究生
  • 1. 蚌埠医学院第一附属医院
  • 2.  1. 儿科;
  • 3.  2. 心胸外科;
  • 4.  3. 超声心动图室 安徽蚌埠 233004
基金项目:  安徽省自然科学基金项目(11040606M198)

摘要: 目的:构建人野生型和c.454CT突变型血管内皮生长因子A(VEGFA)真核表达载体。方法:采用反转录聚合酶链反应扩增人VEGFA基因,用限制性核酸内切酶BglⅡ和SalⅠ双酶切后连接真核表达载体pEGFP-N1,构建野生型VEGFA真核表达载体(野生型pEGFP-VEGFA),通过双酶切和测序进行鉴定。采用定点诱变PCR技术构建c.454CT突变型人VEGFA真核表达载体(突变型pEGFP-VEGFA),同样通过双酶切和测序进行鉴定。结果:野生型和突变型pEGFP-VEGFA被双酶切为4 697 bp和1 251 bp两条条带。测序结果证实野生型pEGFP-VEGFA VEGFA序列与GenBank公布的VEGFA mRNA序列完全一致,突变型pEGFP-VEGFA除第454位碱基C被T替代以外,其余序列与野生型完全一致。结论:成功构建了野生型和突变型pEGFP-VEGFA,为下一步研究VEGFA基因功能提供参考。

English Abstract

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