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结核分枝杆菌PPE68基因真核表达载体的构建、表达和鉴定

曹元应 房功思 孟德娣 汪学龙

引用本文:
Citation:

结核分枝杆菌PPE68基因真核表达载体的构建、表达和鉴定

    作者简介: 曹元应(1960- ), 男, 硕士, 副教授.
    通讯作者: 汪学龙, wangxl1964@163.com
  • 基金项目:

    安徽省高等学校省级自然科学研究资助项目(KJ2009B187Z)

Construction,expression and identification of the eukaryotic expression vector carrying Mycobacterium tuberculosis PPE68 gene

    Corresponding author: WANG Xuelong, wangxl1964@163.com
  • 摘要: 目的:建立结核分枝杆菌PPE68蛋白基因重组质粒的真核表达载体,为以后对PPE重组蛋白的免疫原性分析奠定基础。方法:提取结核分枝杆菌总DNA,PCR法扩增出PPE68编码基因,通过线性T克隆载体pGEM-T连接,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)后,转染至HeLa细胞中表达,Western blot鉴定表达产物。结果:PCR产物、pGEM-T-PPE68及pcDNA3.1(+)-PPE68分别经双酶切后均获得同一大小基因片段,表达产物经Western blot鉴定相对分子质量约为40 000。结论:成功构建了结核分枝杆菌PPE68基因真核表达载体,并获得了表达产物。
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出版历程
  • 收稿日期:  2013-06-19
  • 刊出日期:  2014-03-15

结核分枝杆菌PPE68基因真核表达载体的构建、表达和鉴定

    通讯作者: 汪学龙, wangxl1964@163.com
    作者简介: 曹元应(1960- ), 男, 硕士, 副教授.
  • 1. 1. 安徽医学高等专科学校病原生物学与免疫学教研室, 安徽 合肥 230061;
  • 2.  2. 安徽医科大学病原生物学教 研室, 安徽 合肥 230032
基金项目:  安徽省高等学校省级自然科学研究资助项目(KJ2009B187Z)

摘要: 目的:建立结核分枝杆菌PPE68蛋白基因重组质粒的真核表达载体,为以后对PPE重组蛋白的免疫原性分析奠定基础。方法:提取结核分枝杆菌总DNA,PCR法扩增出PPE68编码基因,通过线性T克隆载体pGEM-T连接,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)后,转染至HeLa细胞中表达,Western blot鉴定表达产物。结果:PCR产物、pGEM-T-PPE68及pcDNA3.1(+)-PPE68分别经双酶切后均获得同一大小基因片段,表达产物经Western blot鉴定相对分子质量约为40 000。结论:成功构建了结核分枝杆菌PPE68基因真核表达载体,并获得了表达产物。

English Abstract

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