RNA干扰Heparanase基因表达对胆囊癌侵袭性影响的体外研究

李三红; 刘会春; 周少波; 金浩

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RNA干扰Heparanase基因表达对胆囊癌侵袭性影响的体外研究

李三红 , 刘会春 , 周少波 , 金浩

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Citation:

RNA干扰Heparanase基因表达对胆囊癌侵袭性影响的体外研究

1. 蚌埠医学院第一附属医院肝胆外科, 安徽蚌埠 233004;
2. 蚌埠医学院第二附属医院普外科, 安徽蚌埠 233040

作者简介: 李三红(1981-),女,硕士.

基金项目:
安徽省高等学校自然科学研究资助项目(KJ2009A163)
中图分类号: R735.8

Effects of heparanase gene silencing by RNA interference on invasion of gallbladder carcinoma in vitro

1. Department of Hepatobiliary Surgery, The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, Bengbu Anhui 233004;
2. Department of General Surgery, The Second Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, Bengbu Anhui 233040, China
CLC number: R735.8

摘要: 目的:利用RNA干扰技术沉默人胆囊癌GBC-SD细胞中乙酰肝素酶(heparanase,HPA)基因的表达,探讨抑制HPA基因后对GBC-SD细胞侵袭性的影响。方法:构建靶向人HPA基因miRNA重组质粒,采用脂质体转染法将质粒转染入人胆囊癌GBC-SD细胞,RT-PCR检测转染前后HPA mRNA表达情况,选出对HPA基因沉默效果最佳的质粒。通过划痕损伤试验和Transwell侵袭试验检测干扰沉默HPA表达后对人胆囊癌GBC-SD细胞侵袭性的影响。结果:质粒pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR-HPA-2沉默人胆囊癌GBC-SD细胞HPA mRNA表达的效果最好。划痕损伤试验中胆囊癌GBC-SD细胞的迁移距离在12 h、24 h pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-HPA-2组均低于阴性对照组和空白组(P<0.05~P<0.01)。pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR-HPA-2组中穿过Transwell小室基质的胆囊癌GBC-SD细胞数均明显低于阴性对照组和空白组(P<0.01)。结论:靶向人HPA基因miRNA重组质粒能有效抑制HPA基因的表达,抑制人胆囊癌GBC-SD细胞的侵袭能力。
- 胆囊肿瘤 /
- RNA干扰 /
- 乙酰肝素酶 /
- 肿瘤侵袭
Abstract: Objective:To investigate the effects of heparanase(HPA) gene silencing by miRNA interference on invasion and migration of GBC-SD cells of gallbladder carcinoma. Methods:Four pairs of single-stranded recombinant plasmid miRNA oligo-DNA targeting human HPA gene sequence were synthesized and transfected into GBC-SD cells by lipofectamine^TM 2000. HPA mRNA expression was detectede by RT-PCR before and after transfection, the recombinant plasmid which showed the best silencing effect for further experiments was selected. Transwell invasion assays and wound scarification assays were performed to examine the migration and invasive ability of GBC-SD cells. Results:Recombinant plasmid pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-HPA-2 showed the best silencing effects. The migration distance in wound scarification assays of GBC-SD cells transfected with recombinant plasmid pcDNA 6.2-GW/EmGFP-miR-HPA-2 at 12h,24h was significant shorter than negative control and blank groups(P<0.05-P<0.01). The invasive ability of GBC-SD cells transfected with pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-HPA-2 was decreased significantly when compared with negative control and blank groups(P<0.01). Conclusions:The GBC-SD cells transfected with recombinant plasmid pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR showed decreased HPA mRNA expression,as well as inhibited invasion and migration in vitro.
- gallbladder neoplasms /
- RNA interference /
- heparanase /
- tumor invasion

[1]	刘铮 , 刘会春 , 李三红 . 共干扰Hpa、EP-CAM对人胆囊癌细胞株裸鼠模型的实验研究. 蚌埠医学院学报, 2012, 36(4): 380-382.
[2]	贾兴胜 , 刘会春 , 张军 . RNA干扰对胆囊癌细胞上皮细胞黏附因子表达的影响. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(9): 872-876.
[3]	陈士文 , 徐锦程 . 口腔颌面部肿瘤中硫酸乙酰肝素酶的研究进展. 蚌埠医学院学报, 2014, 38(6): 839-841.
[4]	童旭辉 . 乙酰肝素酶的生理特性及与肿瘤转移的关系. 蚌埠医学院学报, 2005, 30(4): 372-375.
[5]	万宏坤 , 于小华 . 乙酰肝素酶在舌鳞状细胞癌组织中的表达及其与肿瘤转移的关系. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(11): 1138-1139.
[6]	程秀 , 刘浩 , 蒋志文 . 硫酸乙酰肝素对肿瘤中碱性成纤维因子的调控作用. 蚌埠医学院学报, 2012, 36(2): 237-240.
[7]	周国才 , 吴生华 , 姜波健 . 乙酰肝素酶与胃癌侵袭转移及预后的研究进展. 蚌埠医学院学报, 2011, 36(4): 435-437.
[8]	王锐 , 刘会春 . 上皮细胞黏附分子、乙酰肝素酶在胆囊癌中的表达及其意义. 蚌埠医学院学报, 2011, 36(2): 133-136.
[9]	吴维 , 刘会春 , 谈燚 , 崔培元 , 鲁正 . 胆囊癌组织中蛋白赖氨酸乙酰化的变化及临床意义. 蚌埠医学院学报, 2016, 41(6): 722-724. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.06.005
[10]	刘会春 , 鲁贻民 , 谈燚 . 胆囊癌组织端粒酶活性的检测及其意义. 蚌埠医学院学报, 2005, 30(4): 291-292.
[11]	郑晓东 , 毛大华 . 乙酰肝素酶在乳腺浸润性导管癌中的表达及其意义. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(1): 30-32.
[12]	邵华明 , 王穗暖 , 李璐 , 张一 . 乙酰肝素酶和syndecan-1表达与脑胶质瘤恶性程度的关系. 蚌埠医学院学报, 2011, 36(12): 1343-1345.
[13]	王露 , 李见 , 翟玮玮 , 李玉云 . 人凋亡相关因子基因RNA干扰慢病毒载体的构建与包装. 蚌埠医学院学报, 2015, 40(1): 7-10. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2015.01.003
[14]	张林 , 朱勇 , 仲宁 , 吴广洲 , 沈振亚 , 施舜缤 . 人AURKA基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其对A549细胞增殖的影响. 蚌埠医学院学报, 2016, 41(11): 1417-1421. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.11.005
[15]	陈昌杰 , 章菊 , 杨清玲 . 靶向TrKA基因的SiRNA干扰对乳腺癌细胞生长的影响. 蚌埠医学院学报, 2008, 33(6): 677-680.
[16]	吴斌全 , 刘会春 , 金浩 , 承泽农 . hTERT和survivin在胆囊癌中的表达及其意义. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(8): 659-662.
[17]	夏泽亮 , 刘言玉 , 褚亮 , 刘言浩 , 王法宝 , 周超毅 , 蒋磊 . siRNA沉默MUC16对胆囊癌细胞增殖和迁移的影响. 蚌埠医学院学报, 2021, 46(10): 1345-1348. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2021.10.005
[18]	金浩 , 刘会春 , 于东红 , 鲁贻民 , 吴斌全 . β-连环蛋白和APC基因在胆囊良恶性病变中的表达及其意义. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(10): 853-855,860.
[19]	王苏春 , 王禾 , 秦卫军 , 孙航 , 顾汝军 . CD147、MMP-9与VEGF在肾细胞癌中的表达及其临床意义. 蚌埠医学院学报, 2011, 36(11): 1194-1197,1200.
[20]	金浩 , 刘会春 , 周少波 , 于东红 . claudin-1在胆囊癌中的表达及意义. 蚌埠医学院学报, 2012, 36(1): 22-24.

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RNA干扰Heparanase基因表达对胆囊癌侵袭性影响的体外研究

作者简介: 李三红(1981-),女,硕士.

1. 蚌埠医学院第一附属医院肝胆外科, 安徽蚌埠 233004;
2. 蚌埠医学院第二附属医院普外科, 安徽蚌埠 233040

收稿日期: 2011-03-10

基金项目: 安徽省高等学校自然科学研究资助项目(KJ2009A163)

关键词:

摘要: 目的:利用RNA干扰技术沉默人胆囊癌GBC-SD细胞中乙酰肝素酶(heparanase,HPA)基因的表达,探讨抑制HPA基因后对GBC-SD细胞侵袭性的影响。方法:构建靶向人HPA基因miRNA重组质粒,采用脂质体转染法将质粒转染入人胆囊癌GBC-SD细胞,RT-PCR检测转染前后HPA mRNA表达情况,选出对HPA基因沉默效果最佳的质粒。通过划痕损伤试验和Transwell侵袭试验检测干扰沉默HPA表达后对人胆囊癌GBC-SD细胞侵袭性的影响。结果:质粒pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR-HPA-2沉默人胆囊癌GBC-SD细胞HPA mRNA表达的效果最好。划痕损伤试验中胆囊癌GBC-SD细胞的迁移距离在12 h、24 h pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-HPA-2组均低于阴性对照组和空白组(P<0.05~P<0.01)。pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR-HPA-2组中穿过Transwell小室基质的胆囊癌GBC-SD细胞数均明显低于阴性对照组和空白组(P<0.01)。结论:靶向人HPA基因miRNA重组质粒能有效抑制HPA基因的表达,抑制人胆囊癌GBC-SD细胞的侵袭能力。