成人外周血细胞中Th2功能亚群分化的体外实验研究

朱安友; 陈礼文; 李柏青

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成人外周血细胞中Th2功能亚群分化的体外实验研究

朱安友 , 陈礼文 , 李柏青

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成人外周血细胞中Th2功能亚群分化的体外实验研究

蚌埠医学院免疫学教研室, 安徽蚌埠 233003(现工作单位:蚌埠医学院附属医院检验科)

作者简介: 朱安友(1968-),男,安徽蚌埠人,硕士,主要从事细胞免疫研究.

基金项目:
国家自然科学基金资助项目(编号:30070721)
中图分类号: R329.21

Studies on differentiation of Th2 functional subset among adult peripheral blood cells in vitro

Department of Immunology, Bengbu Medical College, Anhui 233003, China
CLC number: R329.21

摘要: 目的: 研究在中性条件和Th2极化条件下CD3单克隆抗体(CD3mAb)激活的人外周血αβT细胞Th1/Th2型细胞因子的表达。方法: 用CD3mAb、IL-2刺激人外周血单个核细胞(PBMC),作为CD3mAb激活的T淋巴细胞(CD3AT)的中性条件培养;用CD3mAb、IL-2、rhIL-4和抗人IL-12抗体,作为Th2极化条件。分别收集PBMC和培养后第7、14和21天细胞,加PMA、ionomycin和monensin作用6 h后,用多色荧光抗体标记,在流式细胞仪上检测αβT细胞中胞内IFN-γ或IL-4产生细胞的比例。结果: PBMC中IFN-γ⁺或IL-4⁺αβT细胞分别为23.6%、2.4%。与中性条件相比,Th2极化条件下培养3周,αβT细胞中IFN-γ产生细胞明显减少(P<0.001),IL-4⁺产生细胞显著增加(P<0.001);同时产生IFN-γ⁺IL-4⁺细胞从3.6%增加至6.1%。结论: 体外Th2极化条件可以使人外周血αβT细胞分化为Th2功能亚群。
- 细胞分化 /
- Th2极化 /
- αβT细胞 /
- Th1/Th2细胞因子 /
- 流式细胞术
Abstract: Objective: To study expression of Th1/Th2 type cytokines in human peripheral αβT cells activated with CD3 monoclonal antibody(CD3mAb),cultured in neutral and Th2 type polarizing condition.Methods: Peripheral blood mononuclear cells(PBMC) were stimulated with CD3mAb to generate CD3mAb activated T cells(CD3AT);CD3AT cells were cultured in medium with IL-2 as neutral culturing condition,or with IL-4 plus anti-IL-12 neutralizing Ab as Th2 type polarizing condition for three weeks.Fresh isolation PBMC and cultured CD3AT for 7 to 21 days in neutral and Th2 type polarizing condition were stimulated with Phorbo 12-myristate 13-acetate(PMA),ionomycin and monensin.Intracellular cytokines of cell were stained with multicolor fluorescence mAb.The percentage of Th1 and Th2 expressing cell among fresh PBMC or CD3AT were measured by flow cytometry.Results: The percentages of IFN-γ and IL-4 producing T cells among fresh isolation PBMC were 23.6% and 2.4%,respectively.Compared to the neutral condition,in the culture of Th2 polarizing condition for 3 weeks,the percentages of IFN-γ⁺ producing cells among CD3AT sharply decreased(P<0.001) and that of IL-4 producing T cells had significant increase(P<0.001),and that of IFN-γ⁺IL-4⁺αβT cells modestly increased(3.6% to 6.1%).Conclusions: αβT cells in human peripheral blood could be developed as type-2 functional subset in Th2 polarizing condition in vitro.
- cell differentiation /
- Th2 polarizing /
- αβT lymphocyte /
- Th1/Th2 type cytokine /
- flow cytometry

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成人外周血细胞中Th2功能亚群分化的体外实验研究

作者简介: 朱安友(1968-),男,安徽蚌埠人,硕士,主要从事细胞免疫研究.

蚌埠医学院免疫学教研室, 安徽蚌埠 233003(现工作单位:蚌埠医学院附属医院检验科)

收稿日期: 2004-08-03

基金项目: 国家自然科学基金资助项目(编号:30070721)

关键词:

摘要: 目的: 研究在中性条件和Th2极化条件下CD3单克隆抗体(CD3mAb)激活的人外周血αβT细胞Th1/Th2型细胞因子的表达。方法: 用CD3mAb、IL-2刺激人外周血单个核细胞(PBMC),作为CD3mAb激活的T淋巴细胞(CD3AT)的中性条件培养;用CD3mAb、IL-2、rhIL-4和抗人IL-12抗体,作为Th2极化条件。分别收集PBMC和培养后第7、14和21天细胞,加PMA、ionomycin和monensin作用6 h后,用多色荧光抗体标记,在流式细胞仪上检测αβT细胞中胞内IFN-γ或IL-4产生细胞的比例。结果: PBMC中IFN-γ⁺或IL-4⁺αβT细胞分别为23.6%、2.4%。与中性条件相比,Th2极化条件下培养3周,αβT细胞中IFN-γ产生细胞明显减少(P<0.001),IL-4⁺产生细胞显著增加(P<0.001);同时产生IFN-γ⁺IL-4⁺细胞从3.6%增加至6.1%。结论: 体外Th2极化条件可以使人外周血αβT细胞分化为Th2功能亚群。