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人凋亡相关因子基因RNA干扰慢病毒载体的构建与包装

王露 李见 翟玮玮 李玉云

引用本文:
Citation:

人凋亡相关因子基因RNA干扰慢病毒载体的构建与包装

    作者简介: 王露(1985-),男,硕士研究生.
    通讯作者: 李玉云, 副教授.bbmcliyuyun@163.com
  • 基金项目:

    安徽省教育厅自然科学研究重点资助项目(KJ2012A198)

  • 中图分类号: Q343.1;R373

Construction and packaging of the recombination lentivirus vector with RNA interference gene targeting human Fas

    Corresponding author: LI Yu-yun, 副教授.bbmcliyuyun@163.com
  • CLC number: Q343.1;R373

  • 摘要: 目的:构建人凋亡相关因子(Fas)基因短发夹RNA慢病毒载体,实现沉默人脐带间充质干细胞Fas基因的表达.方法:根据Fas基因mRNA序列,设计4组靶向Fas基因的短发夹RNA序列,合成、退火形成双链DNA片段,与经过DNA内切酶BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切后的LV3载体连接转入感受态细胞,对长出的克隆进行菌落PCR鉴定,并对阳性克隆进行测序及比对分析.通过转染293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定.结果:经酶切及基因测序鉴定证明慢病毒载体构建成功,通过荧光显微镜观察证明病毒转入293T细胞,感染效率 > 90%,并获得高滴度的慢病毒载体,病毒滴度为3×108TU/ml.结论:成功构建人Fas基因RNA干扰慢病毒载体,为下一步转染脐带间充质干细胞提供理论参考.
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出版历程
  • 收稿日期:  2013-12-30

人凋亡相关因子基因RNA干扰慢病毒载体的构建与包装

    通讯作者: 李玉云, 副教授.bbmcliyuyun@163.com
    作者简介: 王露(1985-),男,硕士研究生.
  • 蚌埠医学院 临床检验诊断学实验中心, 安徽 蚌埠 233030
基金项目:  安徽省教育厅自然科学研究重点资助项目(KJ2012A198)

摘要: 目的:构建人凋亡相关因子(Fas)基因短发夹RNA慢病毒载体,实现沉默人脐带间充质干细胞Fas基因的表达.方法:根据Fas基因mRNA序列,设计4组靶向Fas基因的短发夹RNA序列,合成、退火形成双链DNA片段,与经过DNA内切酶BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切后的LV3载体连接转入感受态细胞,对长出的克隆进行菌落PCR鉴定,并对阳性克隆进行测序及比对分析.通过转染293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定.结果:经酶切及基因测序鉴定证明慢病毒载体构建成功,通过荧光显微镜观察证明病毒转入293T细胞,感染效率 > 90%,并获得高滴度的慢病毒载体,病毒滴度为3×108TU/ml.结论:成功构建人Fas基因RNA干扰慢病毒载体,为下一步转染脐带间充质干细胞提供理论参考.

English Abstract

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