骨桥蛋白基因质粒的构建及慢病毒包装的实验研究

李薇; 王文平; 陈亮; 王珍祥

doi:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2015.05.002

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骨桥蛋白基因质粒的构建及慢病毒包装的实验研究

李薇 , 王文平 , 陈亮 , 王珍祥

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Citation:

骨桥蛋白基因质粒的构建及慢病毒包装的实验研究

1. 蚌埠医学院第一附属医院整形烧伤科, 安徽蚌埠 233004;
2. 第三军医大学附属西南医院整形外科, 重庆 400038

作者简介: 李薇(1989-),女,硕士研究生.

基金项目:
国家自然科学基金资助项目(81071563)
中图分类号: R329.24

The construction of osteopontin gene recombinant plasmid and its package of lentivirus

1. Department of Plastic and Burn Surgery, The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, Bengbu Anhui 233004;
2. Department of Plastic and Aesthetic Surgery, Southwest Hospital, The Third Military Medical University, Chongqing 400038, China
CLC number: R329.24

摘要: 目的:构建骨桥蛋白(OPN)基因的重组质粒,并包装慢病毒。方法:从C57BL/6野生型小鼠肾脏组织提取总RNA,逆转录为cDNA经特定引物扩增出OPN基因片段,并大量扩增,利用基因重组技术该基因片段与慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP-T2A-Puro连接形成重组质粒,该重组质粒转染293T细胞进行慢病毒包装后测定滴度。结果:DNA测序证实提取的基因为OPN片段,慢病毒滴度达2.5×10⁸ TU/ml。结论:成功包装了含有OPN基因片段的慢病毒,为进一步研究OPN对各种细胞的生物学功能的影响奠定了基础。
- 骨桥蛋白 /
- 重组质粒 /
- 慢病毒 /
- 小鼠
Abstract: Objective: To construct the recombinant plasmid containing the osteopontin(OPN) gene and package lentivirus with it.Methods: The total RNA of kidney tissue was abstracted from C57BL/6 wild type mouse,and then was transcribed to cDNA.The OPN gene was largely amplified with special primers,and then cloned to lentivirus carrier to constract the pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP-T2A-Puro.The lentivirus was packaged by transfecting the plasmids into 293T cells,and the virus titer was tested.Results: The OPN gene fragment was successfully cloned by sequencing.The virus titer was 2.5×10⁸ TU/ml.Conclusions: The lentivirus containing OPN gene is successfully packaged,which lays the foundation in further researching the biological function of OPN gene.
- osteopontin /
- recombinant plasmid /
- lentivirus /
- mouse

[1]	Wang KX,Denhardt DT.Osteopontin:role in immune regulation and stress Responses[J].Cytokine Growth Factor Rev,2008,19(1):333-345.
[2]	孙爱军,高平进,刘建军,等.骨桥蛋白增高自发性高血压大鼠血管外膜成纤维细胞的迁移活性[J].生理学报,2004,56(1):21-24.
[3]	Zou C,Luo Q,Qin J,et al.Osteopontin promotes mesenchymal stem cell migration and lessens cell stiffness via integrin b1,FAK,and ERK pathways[J].Cell Biochem Biophy,2013,65(3):455-456.
[4]	李琴,王左林.骨桥蛋白对鼠皮肤表皮干细胞的生物学影响[J].口腔颌面外科杂志,2012,22(1):8-14.
[5]	Yamanaka O,Sumioka T,Saika S,et al.The role of extrancellular matrix in corneal wound healing[J].Cornea,2013(32 Suppl 1):S43-S45.
[6]	陶潜,张晓娟,郑艳莉,等.骨桥蛋白在卵巢癌及交界性肿瘤中的表达及临床意义[J].实用癌症杂志,2013,28(6):606-607.
[7]	王云萍,张琳,赵华明,等.骨桥蛋白在类风湿关节炎患者血清中的表达及意义[J].山西医药杂志,2011,40(6):583-584.
[8]	Uysal T,Gorgulu S,Yagci A,et al.Effect of resveratrol on bone formation in the expanded inter-premaxillary suture:early bone changes[J].Orthod Craniofac Res,2011,14(2):80-87.
[9]	Katagiri YU,Sleeman J,Fujii H,et al.CD44 variants but not CD44s cooperate with β1-containing in integrins to permit cells to bind to osteopontin independently of arginine-glycine-aspartic acid,thereby stimulating cell motility and chemotaxis[J].Cancer Res,1999,59(1):219-226.
[10]	Yamamoto N,Sakai F,Kon S,et al.Essential role of the cryptic epitope SLAGLR within osteopontin in a murine model of theumatoid arthritis[J].J Clin Invest,2003,112(2):181-188.
[11]	Qin C,Baba O,Butler WT.Post-translational modifications of sibling proteins and their roles in osteogenesis and dentinogenesis[J].Crit Rev Oral Biol Med,2004,15(3):126-136.

[1]	姚克 , 陈涛 , 王冬 , 高俊明 . miR-186靶向调控骨桥蛋白基因表达对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响. 蚌埠医学院学报, 2017, 42(1): 30-33. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2017.01.008
[2]	孙志兵 , 杨娟 . 慢病毒介导沉默SOCS3基因对糖尿病大鼠相关胰岛素通路蛋白表达的影响. 蚌埠医学院学报, 2020, 45(5): 572-577. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2020.05.004
[3]	钟裕恒 , 黄湘 , 王莹 , 郑国兵 , 李红艳 , 张艳芳 . RPS27a蛋白重组质粒的构建及其在肝癌细胞株的定位. 蚌埠医学院学报, 2017, 42(4): 421-424. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2017.04.001
[4]	左联 , 谢鹏 , 徐霞红 , 胡晖 , 顾晓波 , 黄东雅 . Balb/c小鼠单纯疱疹病毒性脑炎模型的建立. 蚌埠医学院学报, 2013, 37(2): 131-133;130.
[5]	董春玲 , 王桂芳 , 肖奎 , 李波 , 马忠森 , 白春学 . 水通道蛋白3基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定. 蚌埠医学院学报, 2007, 32(5): 505-507.
[6]	罗裕旋 , 何小媚 , 邱群芳 , 杨建军 , 朱飞 . 复方护肝汤对刀豆蛋白A诱导小鼠肝损伤的保护作用. 蚌埠医学院学报, 2011, 36(6): 554-556.
[7]	解华 , 郑荣生 . 骨桥蛋白表达与乳腺癌关系的研究进展. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(11): 1045-1048.
[8]	路亮 , 许建明 , 梅俏 . 生存素、骨桥蛋白在大肠腺瘤癌变过程中的表达. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(4): 290-293.
[9]	胡圳圳 , 李璐 , 吴小芸 , 郑大同 , 吴伟玲 . pEGFP-N1-Mxi1-0重组质粒的构建与表达. 蚌埠医学院学报, 2015, 40(3): 318-321. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2015.03.008
[10]	王双虎 , 陆培琴 , 王珍珍 , 叶迎安 , 何文钦 . 神经生长因子对脑出血病人神经功能缺损及骨桥蛋白表达的影响. 蚌埠医学院学报, 2017, 42(8): 1076-1079. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2017.08.020
[11]	刘晓佳 , 谭宁 , 田晶 , 曾思恩 . 潜伏膜蛋白1基因真核表达载体的构建及其在鼻咽癌细胞中的表达. 蚌埠医学院学报, 2014, 38(5): 561-564.
[12]	吴良霞 , 林晓亮 , 徐敏 , 张建华 . 哮喘小鼠肺组织中趋化因子干扰素-γ诱导蛋白-10、干扰素-γ诱导单核细胞因子表达及其意义. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(1): 15-17.
[13]	王文江 , 冯琦 , 袁杰 , 高玉光 . 激活转录因子-2调控小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶-20分子机制的初步研究. 蚌埠医学院学报, 2014, 39(11): 1460-1463.
[14]	孙祥瑞 , 高家荣 , 汪庆飞 , 王婷 . 补骨脂-肉豆蔻醇提物对脾虚泄泻小鼠水通道蛋白及结肠中细胞因子的影响. 蚌埠医学院学报, 2018, 43(2): 152-155,159. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2018.02.004
[15]	邱筱婷 , 巩红校 , 朱玲 , 霍星星 . 原发性干燥综合征小鼠唾液腺组织及唾液的转录组和蛋白质组分析. 蚌埠医学院学报, 2023, 48(6): 711-716. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2023.06.002
[16]	杨勇波 , 向平 . 骨桥蛋白、环氧化酶-2在宫颈癌组织中的表达及其与化疗敏感性的相关性. 蚌埠医学院学报, 2021, 46(4): 464-467, 474. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2021.04.011
[17]	宋红涛 , 焦东亮 , 王立金 , 沐林林 , 王文娟 , 宋佩佩 , 翟长平 , 何震 . 精神分裂症易感基因DISC1重组质粒pmirGLO-DISC1 3'UTR的构建和分析. 蚌埠医学院学报, 2022, 47(1): 26-29. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2022.01.006
[18]	姚晓敏 , 李宏伟 , 曲均革 , 崔相一 . 刀豆蛋白A引起小鼠免疫性肝损伤机制研究. 蚌埠医学院学报, 2011, 36(5): 445-447.
[19]	马栋柱 , 孙克任 , 赵丽 , 肖志峰 , 李慧 . AC-88对荷瘤小鼠抑瘤作用及对T细胞Fas蛋白表达的影响. 蚌埠医学院学报, 2004, 29(1): 1-4.
[20]	焦玉萌 , 陈兴智 , 孙新 , 王雪梅 , 方强 . 弓形虫529bp重复序列基因的PCR阳性质控质粒的构建. 蚌埠医学院学报, 2011, 36(1): 1-3.

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骨桥蛋白基因质粒的构建及慢病毒包装的实验研究

作者简介: 李薇(1989-),女,硕士研究生.

1. 蚌埠医学院第一附属医院整形烧伤科, 安徽蚌埠 233004;
2. 第三军医大学附属西南医院整形外科, 重庆 400038

收稿日期: 2014-08-01

基金项目: 国家自然科学基金资助项目(81071563)

关键词:

摘要: 目的:构建骨桥蛋白(OPN)基因的重组质粒,并包装慢病毒。方法:从C57BL/6野生型小鼠肾脏组织提取总RNA,逆转录为cDNA经特定引物扩增出OPN基因片段,并大量扩增,利用基因重组技术该基因片段与慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP-T2A-Puro连接形成重组质粒,该重组质粒转染293T细胞进行慢病毒包装后测定滴度。结果:DNA测序证实提取的基因为OPN片段,慢病毒滴度达2.5×10⁸ TU/ml。结论:成功包装了含有OPN基因片段的慢病毒,为进一步研究OPN对各种细胞的生物学功能的影响奠定了基础。