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vMIP-ⅡN端肽对趋化因子受体CXCR4表达调控的机制研究

吴海华 李钰 张凌宇 王海凤 杭旭东 李从新 陈素莲 陈昌杰 杨清玲

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Citation:

vMIP-ⅡN端肽对趋化因子受体CXCR4表达调控的机制研究

    作者简介: 吴海华(1989-),女,硕士研究生.
  • 基金项目:

    安徽省教育厅自然科学重大项目(KJ2015ZD29);安徽省自然科学基金项目(1508085MH159);安徽省高校学科(专业)拔尖人才学术资助重点项目(gxbjZD2016069);国家级大学生创新项目(201210367020,201410367023);蚌埠医学院研究生创新项目(Byycx1524)

  • 中图分类号: Q51

The study of chemokine receptors CXCR4 expression regulation by N-peptide of vMIP-Ⅱ

  • CLC number: Q51

  • 摘要: 目的:探讨病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ(vMIP-Ⅱ)对乳腺癌细胞CXCR4表达的影响及分子机制。方法:设计并合成扩增CXCR4核心启动子基因序列,构建荧光素酶报告载体,酶切鉴定;通过检测报告基因荧光素酶活性反映病毒巨噬细胞炎性蛋白N端21肽(NT21MP)对CXCR4启动子的作用;通过荧光定量PCR技术和Western blot检测CXCR4干扰或过表达、HER-2干扰,以及miRNAs抑制剂和类似物转染后相关基因及miRNAs表达;采用磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测细胞增殖活性,PI染色法检测细胞周期,Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡。结果:NT21MP下调CXCR4的表达,并上调miR-125b、miR-135a和miR-146a的表达(P < 0.05~P < 0.01);NT21MP降低CXCR4核心启动子的活性;SP1为CXCR4核心启动子高频结合转录因子,miR-135a可下调SP1的表达(P < 0.01);过表达CXCR4上调HER-2表达(P < 0.01),而干扰CXCR4表达则下调HER-2表达(P < 0.01);miR-125b可下调HER-2的表达(P < 0.01);HER-2表达下调诱导miR-146a的表达;miR-146a抑制CXCR4表达(P < 0.01);相对于空白对照组,miR-146a和miR-135a均可抑制细胞增殖,阻断细胞周期,并诱导凋亡(P < 0.01)。结论:NT21MP通过诱导miR-125b、miR-135a和miR-146a负调控CXCR4的表达,从而抑制乳腺癌细胞的增殖能力,为NT21MP应用于乳腺癌患者的治疗提供了理论基础。
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出版历程
  • 收稿日期:  2016-04-27

vMIP-ⅡN端肽对趋化因子受体CXCR4表达调控的机制研究

    作者简介: 吴海华(1989-),女,硕士研究生.
  • 1. 蚌埠医学院 临床检验与诊断教研室, 安徽 蚌埠 233030;
  • 2. 蚌埠医学院 微生物学教研室, 安徽 蚌埠 233030;
  • 3. 蚌埠医学院 生物化学与分子生物学教研室, 安徽 蚌埠 233030
基金项目:  安徽省教育厅自然科学重大项目(KJ2015ZD29);安徽省自然科学基金项目(1508085MH159);安徽省高校学科(专业)拔尖人才学术资助重点项目(gxbjZD2016069);国家级大学生创新项目(201210367020,201410367023);蚌埠医学院研究生创新项目(Byycx1524)

摘要: 目的:探讨病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ(vMIP-Ⅱ)对乳腺癌细胞CXCR4表达的影响及分子机制。方法:设计并合成扩增CXCR4核心启动子基因序列,构建荧光素酶报告载体,酶切鉴定;通过检测报告基因荧光素酶活性反映病毒巨噬细胞炎性蛋白N端21肽(NT21MP)对CXCR4启动子的作用;通过荧光定量PCR技术和Western blot检测CXCR4干扰或过表达、HER-2干扰,以及miRNAs抑制剂和类似物转染后相关基因及miRNAs表达;采用磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测细胞增殖活性,PI染色法检测细胞周期,Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡。结果:NT21MP下调CXCR4的表达,并上调miR-125b、miR-135a和miR-146a的表达(P < 0.05~P < 0.01);NT21MP降低CXCR4核心启动子的活性;SP1为CXCR4核心启动子高频结合转录因子,miR-135a可下调SP1的表达(P < 0.01);过表达CXCR4上调HER-2表达(P < 0.01),而干扰CXCR4表达则下调HER-2表达(P < 0.01);miR-125b可下调HER-2的表达(P < 0.01);HER-2表达下调诱导miR-146a的表达;miR-146a抑制CXCR4表达(P < 0.01);相对于空白对照组,miR-146a和miR-135a均可抑制细胞增殖,阻断细胞周期,并诱导凋亡(P < 0.01)。结论:NT21MP通过诱导miR-125b、miR-135a和miR-146a负调控CXCR4的表达,从而抑制乳腺癌细胞的增殖能力,为NT21MP应用于乳腺癌患者的治疗提供了理论基础。

English Abstract

参考文献 (24)

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