miR-186靶向调控骨桥蛋白基因表达对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

姚克; 陈涛; 王冬; 高俊明

doi:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2017.01.008

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miR-186靶向调控骨桥蛋白基因表达对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

姚克 , 陈涛 , 王冬 , 高俊明

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miR-186靶向调控骨桥蛋白基因表达对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

1. 辽宁省盘锦市中心医院骨科, 124000;
2. 辽河油田总医院渤海院区骨科, 辽宁盘锦 124010;
3. 辽河石油勘探局康复医院骨科, 辽宁盘锦 124010

作者简介: 姚克(1974-),男,硕士,副主任医师.

中图分类号: R329.24

Effect of the miR-186 target-regulating the osteopontin expression on the osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells

1. Department of Orthopaedics, The Central Hospital of Panjin, Panjin Liaoning 124000;
2. Department of Orthopaedics, The General Hospital of Liaohe Oil Field, Panjin Liaoning 124010;
3. Department of Orthopaedics, The Rehabilitation Hospital of Liaohe Oil Exploration Bureau, Panjin Liaoning 124010, China
CLC number: R329.24

摘要: 目的：探讨miR-186对骨髓间充质干细胞（bMSCs）成骨向诱导分化过程中骨桥蛋白（OPN）基因的靶向作用及其对bMSCs成骨分化的影响。方法：分离培养bMSCs，应用骨形成蛋白2成骨向诱导分化并采用碱性磷酸酶染色和Von-kossa染色鉴定；运用生物信息学方法对miR-186和OPN基因的靶向配对关系进行预测，采用荧光素酶报告系统鉴定；脂质体2000转染miR-186模拟物以及干扰OPN基因的siRNA后，Real-time PCR检测miR-186和OPN mRNA的表达，Western blot检测OPN蛋白的表达。结果：光镜下可见bMSCs均匀分布，诱导分化后的细胞碱性磷酸酶染色呈蓝色。生物信息学软件TargetScan和miRanda显示miR-186和OPN基因二者靶向配对良好，荧光素酶报告系统进一步验证发现，miR-186能够抑制OPN mRNA表达。Real-time PCR和Western blot检测结果表明过表达miR-186能够降低OPN mRNA和蛋白的表达。结论：miR-186通过下调bMSCs成骨向诱导分化过程中OPN基因表达进而抑制bMSCs的成骨分化。
- 骨髓间充质干细胞 /
- 微小RNA /
- 骨桥蛋白 /
- 小鼠
Abstract: Objective: To explore the effects of the miR-186 target-regulating the osteopontin(OPN) expression on the osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells(bMSCs).Methods: The bMSCs were isolated from bone marrow,induced with BMP 2,and identified using the Alkaline Phosphatase(ALP) and Von-kossa staining.Targeting pairing relationship between miR-186 and OPN was predicted by bioinformatics,and identified with luciferase assay.After transfecting miR-186 mimics and siRNA interfering OPN gene into cells,the expressions of miR-186 and OPN were determined by real-time PCR,and the protein expression of OPN was detected using western blot.Results: The uniform distribution of bMSCs was found under light microscope,and the induced cells could be stained blue by ALP.MiRanda and TargetScan showed that miR-186 was well complementary with OPN gene.The result of luciferase assay showed that miR-186 could inhibit the expression of OPN mRNA.The results of real-time PCR and western blot showed that the over-expression of miR-186 could downregulate the expressions of OPN mRNA and protein.Conclusions: MiR-186 can inhibit the osteogenic differentiation of bMSCs by downregulating the OPN gene expression.
- bone marrow mesenchymal stem cell /
- microRNA /
- osteopontin /
- mice

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miR-186靶向调控骨桥蛋白基因表达对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

作者简介: 姚克(1974-),男,硕士,副主任医师.

1. 辽宁省盘锦市中心医院骨科, 124000;
2. 辽河油田总医院渤海院区骨科, 辽宁盘锦 124010;
3. 辽河石油勘探局康复医院骨科, 辽宁盘锦 124010

收稿日期: 2016-05-29

关键词:

摘要: 目的：探讨miR-186对骨髓间充质干细胞（bMSCs）成骨向诱导分化过程中骨桥蛋白（OPN）基因的靶向作用及其对bMSCs成骨分化的影响。方法：分离培养bMSCs，应用骨形成蛋白2成骨向诱导分化并采用碱性磷酸酶染色和Von-kossa染色鉴定；运用生物信息学方法对miR-186和OPN基因的靶向配对关系进行预测，采用荧光素酶报告系统鉴定；脂质体2000转染miR-186模拟物以及干扰OPN基因的siRNA后，Real-time PCR检测miR-186和OPN mRNA的表达，Western blot检测OPN蛋白的表达。结果：光镜下可见bMSCs均匀分布，诱导分化后的细胞碱性磷酸酶染色呈蓝色。生物信息学软件TargetScan和miRanda显示miR-186和OPN基因二者靶向配对良好，荧光素酶报告系统进一步验证发现，miR-186能够抑制OPN mRNA表达。Real-time PCR和Western blot检测结果表明过表达miR-186能够降低OPN mRNA和蛋白的表达。结论：miR-186通过下调bMSCs成骨向诱导分化过程中OPN基因表达进而抑制bMSCs的成骨分化。