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siRNA靶向抑制4-1BBL基因表达在HL-60细胞对淋巴细胞增殖和凋亡的影响

王慧 吴俊英

引用本文:
Citation:

siRNA靶向抑制4-1BBL基因表达在HL-60细胞对淋巴细胞增殖和凋亡的影响

    作者简介: 王慧(1980-),女,主管检验师.
    通讯作者: 吴俊英, 教授.jywu8191@126.com
  • 基金项目:

    安徽省教育厅自然科学研究重点项目(kj2007A097)

  • 中图分类号: R730.5

Effect of siRNA targeting inhibition of 4-1BBL gene expression in HL-60 tumor cells on lymphocytic proliferation and apoptosis

    Corresponding author: WU Jun-ying, 教授.jywu8191@126.com
  • CLC number: R730.5

  • 摘要: 目的:观察4-1BB配体(4-1BBL)-siRNA对HL-60细胞细胞因子分泌的影响;对比观察4-1BBL基因被干扰前后,HL-60细胞培养上清液对淋巴细胞增殖、凋亡诱导作用的影响;探讨肿瘤细胞的免疫逃逸机制。方法:采用化学合成法人工合成靶向人4-1BBL基因的siRNA,脂质体转染法转染HL-60细胞;半定量RT-PCR和流式细胞术检测干扰前后HL-60细胞4-1BBL-mRNA和表面蛋白的表达水平;ELISA法检测4-1BBL干扰前后HL-60细胞培养上清液转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)分泌水平。密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,收集4-1BBL干扰后的HL-60细胞培养上清液与体外分离的人淋巴细胞共培养,MTT法检测机体淋巴细胞增殖水平;流式细胞术检测淋巴细胞凋亡比率的变化。结果:靶向4-1BBL-siRNA转染HL-60后,4-1BBL-mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.01); ELISA结果显示,4-1BBL基因被干扰后,HL-60细胞培养上清液中TGF-β和VEGF分泌水平明显降低(P<0.01和P<0.05)。与干扰前比较,干扰后的HL-60细胞培养上清液对机体淋巴细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用均下降(P<0.05)。结论:HL-60细胞高表达的4-1BBL信号具有反向调节作用,通过促进其分泌TGF-β、VEGF,使肿瘤细胞培养上清液对淋巴细胞活性的抑制作用增强并促进淋巴细胞凋亡,可能是肿瘤细胞逃避宿主免疫监视的机制之一。
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出版历程
  • 收稿日期:  2016-09-30
  • 录用日期:  2018-07-10

siRNA靶向抑制4-1BBL基因表达在HL-60细胞对淋巴细胞增殖和凋亡的影响

    通讯作者: 吴俊英, 教授.jywu8191@126.com
    作者简介: 王慧(1980-),女,主管检验师.
  • 1. 陕西省宝鸡市中医医院 检验科, 721000;
  • 2. 蚌埠医学院 免疫学教研室, 安徽 蚌埠 233030
基金项目:  安徽省教育厅自然科学研究重点项目(kj2007A097)

摘要: 目的:观察4-1BB配体(4-1BBL)-siRNA对HL-60细胞细胞因子分泌的影响;对比观察4-1BBL基因被干扰前后,HL-60细胞培养上清液对淋巴细胞增殖、凋亡诱导作用的影响;探讨肿瘤细胞的免疫逃逸机制。方法:采用化学合成法人工合成靶向人4-1BBL基因的siRNA,脂质体转染法转染HL-60细胞;半定量RT-PCR和流式细胞术检测干扰前后HL-60细胞4-1BBL-mRNA和表面蛋白的表达水平;ELISA法检测4-1BBL干扰前后HL-60细胞培养上清液转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)分泌水平。密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,收集4-1BBL干扰后的HL-60细胞培养上清液与体外分离的人淋巴细胞共培养,MTT法检测机体淋巴细胞增殖水平;流式细胞术检测淋巴细胞凋亡比率的变化。结果:靶向4-1BBL-siRNA转染HL-60后,4-1BBL-mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.01); ELISA结果显示,4-1BBL基因被干扰后,HL-60细胞培养上清液中TGF-β和VEGF分泌水平明显降低(P<0.01和P<0.05)。与干扰前比较,干扰后的HL-60细胞培养上清液对机体淋巴细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用均下降(P<0.05)。结论:HL-60细胞高表达的4-1BBL信号具有反向调节作用,通过促进其分泌TGF-β、VEGF,使肿瘤细胞培养上清液对淋巴细胞活性的抑制作用增强并促进淋巴细胞凋亡,可能是肿瘤细胞逃避宿主免疫监视的机制之一。

English Abstract

参考文献 (16)

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