家兔腰椎纤维环细胞的培养与鉴定

许刚; 张长春; 朱坤; 叶雨辰

doi:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2018.11.004

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家兔腰椎纤维环细胞的培养与鉴定

许刚 , 张长春 , 朱坤 , 叶雨辰

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家兔腰椎纤维环细胞的培养与鉴定

蚌埠医学院第一附属医院骨科, 安徽蚌埠 233004

作者简介: 许刚(1986-),男,硕士,住院医师.

中图分类号: R681.5

Study on the culture and identification of annulus fibrosus cells in rabbit

Department of Orthopedics, The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, Bengbu Anhui 233004, China
CLC number: R681.5

摘要: 目的：建立家兔腰椎纤维环细胞体外培养模型并对其进行鉴定，为进一步研究椎间盘退变提供理论依据。方法：用酶消化法得到家兔原代纤维环细胞，再用差速贴壁法及自然消化法得到传代后纯化的细胞，观察纤维环细胞的细胞学特征，MTT法绘制细胞生长曲线，用间接免疫荧光法联合Hoechst核染法、免疫组织化学法分别检测纤维环细胞特征性表达产物Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白，进行细胞鉴定。结果：初贴壁的细胞呈类圆形，很快伸展为短梭形，传代后细胞逐渐伸展为长梭形或多角形，第四代后细胞开始老化；纤维环细胞表达Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白。结论：成功在体外培养出家兔腰椎纤维环细胞，为研究椎间盘退变的发生发展机制提供基础。
- 椎间盘退变 /
- 纤维环细胞 /
- 细胞培养 /
- 细胞鉴定
Abstract: Objective: To establish and identify the culture model of annulus fibrosus(AF) cells of rabbit in vitro for providing the theoretical basis in further studying the intervertebral disc degeneration.Methods: The primary AF cells were obtained using enzyme digestion method,and the AF cells after passage were purified using gradient centrifugation technique and natural digestion method.The cytological characteristics of AF cells were observed,the growth curve of cells was drew by MTT assay.The expression levels of type Ⅰ and Ⅱ collagen in AF cells were measured using immunofluorescence combined with Hoechst nuclear staining,and the AF cells were identified.Results: The firstly adherent AF cells was round,and soon extended for the short spindle.After passage,the cells was long spindle or polygon,and began to age after fourth generation,and the expressions of type Ⅰand Ⅱ collagen in AF cells were found.Conclusions: The AF cells of rabbit are successfully cultured in vitro,which can provide the basis in further studying the occurrence and development mechanism of intervertebral disc degeneration.
- intervertebral disc degeneration /
- annulus fibrosus cell /
- cell culture /
- cell identification

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家兔腰椎纤维环细胞的培养与鉴定

作者简介: 许刚(1986-),男,硕士,住院医师.

蚌埠医学院第一附属医院骨科, 安徽蚌埠 233004

收稿日期: 2017-08-08
录用日期: 2018-05-25

关键词:

摘要: 目的：建立家兔腰椎纤维环细胞体外培养模型并对其进行鉴定，为进一步研究椎间盘退变提供理论依据。方法：用酶消化法得到家兔原代纤维环细胞，再用差速贴壁法及自然消化法得到传代后纯化的细胞，观察纤维环细胞的细胞学特征，MTT法绘制细胞生长曲线，用间接免疫荧光法联合Hoechst核染法、免疫组织化学法分别检测纤维环细胞特征性表达产物Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白，进行细胞鉴定。结果：初贴壁的细胞呈类圆形，很快伸展为短梭形，传代后细胞逐渐伸展为长梭形或多角形，第四代后细胞开始老化；纤维环细胞表达Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白。结论：成功在体外培养出家兔腰椎纤维环细胞，为研究椎间盘退变的发生发展机制提供基础。