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核苷(酸)类似物对慢性乙型肝炎的疗效及与外周血调节性T细胞的相关性

何俊楠 赵守松

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核苷(酸)类似物对慢性乙型肝炎的疗效及与外周血调节性T细胞的相关性

    作者简介: 何俊楠(1988-), 女, 硕士研究生
    通讯作者: 赵守松, 857776630@139.com
  • 中图分类号: R512.62;R575.1

Effect of the nucleoside analogues in the treatment of chronic hepatitis B and its correlation with regulatory T cells of peripheral blood

    Corresponding author: ZHAO Shou-song, 857776630@139.com
  • CLC number: R512.62;R575.1

  • 摘要: 目的探讨核苷(酸)类似物治疗过程中慢性乙型肝炎(CHB)病人外周血中调节性T细胞(Treg)表达水平的变化及临床意义。方法选取130例接受核苷(酸)类似物治疗的CHB病人,治疗前及治疗48周时,分别以流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+CD127Low/- Tregs比例。结果治疗前,免疫耐受组、免疫清除组及健康对照组间CD4+CD25+CD127Low/- Treg水平差异有统计学意义(P < 0.01),其中免疫清除组与免疫耐受组和健康对照组差异均有统计学意义(P < 0.01和P < 0.05),而免疫清除组与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05);治疗48周时,HBeAg未变化组、HBeAg转阴组、HBeAg血清转换组、健康对照组CD4+CD25+CD127Low/- Treg细胞水平差异均有统计学意义(P < 0.05),HBeAg未变化组与HBeAg转阴组和健康对照组Treg细胞差异均有统计学意义(P < 0.05),而HBeAg转阴组、HBeAg血清转换组与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05);48周治疗后乙型肝炎病毒(HBV)复常组与HBV未复常组Treg差异无统计学意义(P>0.05);ALT复常组与ALT未复常组差异无统计学意义(P>0.05)。结论CHB病人经核苷(酸)类似物治疗过程中CD4+CD25+CD127Low/- Treg细胞水平变化与HBeAg是否发生血清转换、HBV是否复常有关,对核苷(酸)类似物治疗的疗效及预后有一定的预测价值。
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出版历程
  • 收稿日期:  2016-01-04
  • 录用日期:  2017-03-28
  • 刊出日期:  2019-03-15

核苷(酸)类似物对慢性乙型肝炎的疗效及与外周血调节性T细胞的相关性

    通讯作者: 赵守松, 857776630@139.com
    作者简介: 何俊楠(1988-), 女, 硕士研究生
  • 蚌埠医学院第一附属医院 感染病科, 安徽 蚌埠 233004

摘要: 目的探讨核苷(酸)类似物治疗过程中慢性乙型肝炎(CHB)病人外周血中调节性T细胞(Treg)表达水平的变化及临床意义。方法选取130例接受核苷(酸)类似物治疗的CHB病人,治疗前及治疗48周时,分别以流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+CD127Low/- Tregs比例。结果治疗前,免疫耐受组、免疫清除组及健康对照组间CD4+CD25+CD127Low/- Treg水平差异有统计学意义(P < 0.01),其中免疫清除组与免疫耐受组和健康对照组差异均有统计学意义(P < 0.01和P < 0.05),而免疫清除组与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05);治疗48周时,HBeAg未变化组、HBeAg转阴组、HBeAg血清转换组、健康对照组CD4+CD25+CD127Low/- Treg细胞水平差异均有统计学意义(P < 0.05),HBeAg未变化组与HBeAg转阴组和健康对照组Treg细胞差异均有统计学意义(P < 0.05),而HBeAg转阴组、HBeAg血清转换组与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05);48周治疗后乙型肝炎病毒(HBV)复常组与HBV未复常组Treg差异无统计学意义(P>0.05);ALT复常组与ALT未复常组差异无统计学意义(P>0.05)。结论CHB病人经核苷(酸)类似物治疗过程中CD4+CD25+CD127Low/- Treg细胞水平变化与HBeAg是否发生血清转换、HBV是否复常有关,对核苷(酸)类似物治疗的疗效及预后有一定的预测价值。

English Abstract

  • 调节性T细胞(Treg)是抑制机体免疫应答, 诱导机体免疫耐受的一种T细胞亚群。乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)的清除依赖于T细胞,CD8+T细胞是从肝脏中清除HBV的关键细胞。Treg在外围以及肿瘤区域表达较多的Foxp3和特异性抑制CD8+T细胞的活性,从而阻断病毒的特异性免疫反应,导致病毒的持久性[1-3]。目前核苷(酸)类似物是慢性乙肝病人的主要治疗手段,但该类药物治疗期间Treg水平变化与病情不同转归之间的关系尚无定论。本实验通过分析慢性乙肝病人不同感染状态下CD4+CD25+Treg细胞表达水平的差异以及接受核苷(酸)类似物治疗48周后ALT、HBV是否复常,乙肝e抗原(HBeAg)不同血清学变化等情况与CD4+CD25+Treg之间的关系,对核苷类似物治疗预后及预测进行了相关探讨。现作报道。

    • 选取2014年12月至2015年8月我科130例慢性乙肝抗病毒治疗病人,排除其他病毒性肝炎、HIV感染及自身免疫性肝炎及脂肪肝等疾病。前半年内未接受过其他抗病毒药及免疫调节治疗。选择健康对照者18名,来自我院健康体检中心,对照者各项指标都在正常范围内,并排除肝炎、自身免疫性疾病、肿瘤及其他感染性疾病。2组性别、年龄等一般资料均具有可比性。

    • 研究对象在清晨空腹情况下,使用EDTA-K2抗凝真空采血管,抽取静脉血2 mL,6 h内上机检测。染色和固定细胞:取2只流式专用管,分别编号为Tr1和Tr2。Tr2管加入Anti-CD25-FITC、Anti-CD4-Percp 20 μL及Anti-CD127-APC 5 μL(试剂均购自美国BD公司),然后Tr1和Tr2均加入全血100 μL, 混匀,室温避光孵育15 min。然后分别加入FACSLysing溶血液2 mL,混匀,室温避光孵育10 min后,1 500 r/min离心5 min,弃上清液,再用PBS洗涤液1 mL洗涤细胞1次, 混匀,1 500 r/min离心5 min,弃上清液,加入1%多聚甲醛0.5 mL,立即用FACSCalibur流式细胞仪(购自美国BD公司)检测,CellQuest软件获取并分析CD4+CD25+CD127Low/-Treg的比例。

    • 全自动生化分析仪检测生物化学项目,酶联免疫吸附法检测HBV血清学标志物,荧光定量聚合酶链反应检测血清HBV-DNA水平。

    • 采用方差分析和q检验及t检验。

    • 26例免疫耐受期病人CD4+CD25+CD127Low/-Treg水平为(5.50±2.01)%,29例免疫清除期病人为(3.87±1.55)%,18名健康对照者为(4.18±1.20)%,3组差异有统计学意义(F=7.14,P<0.01,MS组内=2.754);其中耐受组与免疫清除组和健康对照组差异均有统计学意义(P<0.01和P < 0.05),而免疫清除组与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)。

    • 15例HBeAg未变化病人CD4+CD25+CD127Low/-Treg细胞水平为(5.56±1.14)%,33例HBeAg转阴病人为(4.63±1.61)%,12例HBeAg血清转换者为(4.33±1.64)%,18名健康对照者为(4.18±1.20)%,4组间差异有统计学意义(F=2.80,P<0.05, MS组内=2.097);其中HBeAg未变化组与HBeAg转阴组及健康对照组差异均有统计学意义(P<0.05),HBeAg转阴组和HBeAg血清转换组与健康对照组差异均无统计学意义(P>0.05),HBeAg转阴组与HBeAg血清转换组差异也无统计学意义(P>0.05)。

    • 114例HBV复常者CD4+CD25+CD127Low/-Treg细胞水平为(4.34±1.79)%,16例HBV未复常者为(5.30±2.31)%[其中HBV载量均值为(4.84±1.91)lg copies/mL),2组差异无统计学意义(t=1.93, P>0.05)。

    • 113例ALT复常者CD4+CD25+CD127Low/-Treg细胞水平为(4.33±1.79)%,8例ALT未复常者为(4.79±1.84)%[其中ALT均值为(310.44±468.82)U/L],2组差异无统计学意义(t=0.70, P>0.05)。

    • 慢性HBV感染的自然史包括免疫耐受期、免疫清除期、低活动或低(非)复制期和再活动期。HBV感染时宿主会发生免疫反应,特别是细胞免疫反应。HBV清除和肝损伤的作用机制依赖于病毒复制和HBV特异性细胞毒性T淋巴细胞免疫应答之间的平衡。清除期时,CD4+和CD8+T细胞的应答是控制感染的关键。机体针对HBV抗原可产生HBV特异性细胞毒性免疫应答,可有效清除HBV;而免疫耐受期时,往往表现出HBV特异性免疫反应较弱,导致HBV感染的慢性化。这种感染慢性化的原因之一是在持续抗原暴露情况下激活了宿主介导的免疫抑制的角色[4]。而Treg在免疫抑制方面则具有不可或缺的作用[5]。本研究数据显示免疫耐受组的CD4+CD25+CD127Low/-Treg的表达水平均高于免疫清除组和健康对照组,而免疫清除组的Treg细胞已降至正常。推测免疫耐受期Treg表达水平的升高抑制了HBV特异性T细胞反应,而免疫清除期的Treg仍处于正常水平,只是外来的HBV抗原使机体产生了正常或超常的HBV特异性细胞毒性免疫应答,导致肝细胞的损伤和HBV的清除。这与陈慧娟等[6]的研究结果部分一致,但后者认为免疫清除组Treg显著低于再活动组和健康对照组。

      目前已知核苷(酸)类似物主要通过抑制HBV复制过程中逆转录酶的活性而发挥抗病毒作用, 可显著抑制HBV-DNA复制。可这些慢性乙肝病人对药物的临床应答差异较大。目前主要以HBV-DNA载量下降及HBeAg的血清转换作为评价疗效的重要指标[7]。本研究数据显示核苷类似物治疗48周后,HBV复常组的Treg细胞水平与HBV未复常组差异无统计学意义,与文献[8-10]报道稍有出入,可能需要扩大样本量进一步研究。

      目前HBV前C区或HBeAg的作用很大程度上仍是未知的。然而,HBeAg在病毒持续感染中确实发挥着作用。已知HBeAg作为一种免疫调节蛋白可促进慢性HBV感染。本研究发现,核苷类似物治疗48周后,HBeAg未变化组的CD4+CD25+CD127Low/-Treg细胞水平有明显高于HBeAg转阴组,而HBeAg转阴组和HBeAg血清转换组的CD4+CD25+CD127Low/-Treg细胞水平已降至正常水平。可能是HBeAg可促使慢性HBV感染的免疫负调节因子表达上调,导致T细胞功能障碍;而核苷类药物治疗后发生HBeAg血清转换的病人,具有负性调节作用的Treg细胞表达减少,使得抗原特异性T细胞反应增强,利于病情的好转。这与李成伟等[11]研究结果一致。因此推测Treg细胞水平的变化可能与核苷类似物的疗效及预后有关。但郑琦等[12]却发现核苷类似物治疗后Treg的表达趋势在HBeAg阴转组和未阴转组间差异并无统计学意义。本研究还发现在核苷类似物治疗48周后,ALT是否复常与外周血CD4+CD25+CD127Low/-Treg细胞水平并无直接关系。考虑可能与外周血Treg的研究不能更真实地反映机体肝脏内部的情况以及样本数较少有关。

      有限的样本数量和随访时间的限制使得本研究受到一定限制,而且不同的研究者对Treg的检测方法不同也可能会导致结果有差异,这些都需要我们以后大规模多中心的研究进一步的证明Treg与慢性乙型肝炎核苷类抗病毒治疗过程的疗效关系。

参考文献 (12)

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