• 中国科技论文统计源期刊
  • 中国科技核心期刊
  • 中国高校优秀期刊
  • 安徽省优秀科技期刊

留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

焦虑状态下去甲肾上腺素激活Akt信号通路对乳腺癌作用研究

欧阳雪岩 朱朕 杨超 王丽 姜峰 丁罡

引用本文:
Citation:

焦虑状态下去甲肾上腺素激活Akt信号通路对乳腺癌作用研究

    作者简介: 欧阳雪岩(1993-), 女, 硕士研究生.
    通讯作者: 姜峰, jf365321@163.com ; 丁罡, ddinggang@hotmail.com
  • 基金项目:

    上海市卫生健康委员会资助项目 20184Y0016

    上海市卫生健康委员会资助项目 201740027

    上海市卫生健康委员会资助项目 201640201

    上海市崇明区科学技术委员会资助项目 CKY2018-03

    上海市卫生健康委员会资助项目 201840003

    国家自然科学基金项目 81572859

  • 中图分类号: R737.9

Study on norepinephrine activating Akt signaling pathway in breast cancer under anxiety state

    Corresponding author: Feng JIANG, jf365321@163.com ;Gang DING, ddinggang@hotmail.com
  • CLC number: R737.9

  • 摘要: 目的探讨去甲肾上腺素在焦虑状态下对乳腺癌的作用及机制。方法将20只C57BL/6小鼠分为对照组及模型组,通过接种肿瘤细胞和实验刺激建立焦虑荷瘤小鼠模型,造模结束后检测血清中去甲肾上腺素水平并测量肿瘤体积。人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞在去甲肾上腺素处理后检测其增殖、迁移、侵袭、细胞周期分布及Akt信号通路的激活状态。结果模型组小鼠肿瘤体积大于对照组(P < 0.05),血清中去甲肾上腺素含量明显升高(P < 0.01),且同焦虑程度呈现相关关系(r=0.78)。去甲肾上腺素提高了MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并且促进DNA复制以及Akt信号通路的激活。结论去甲肾上腺素在焦虑状态下激活AKt信号通路,促进乳腺癌的发展。
  • 图 1  MDA-MB-231细胞中β1受体存在表达

    图 2  MDA-MB-231细胞中β2受体存在表达

    表 1  CCK-8实验结果OD值比较(ni=3;x±s)

    分组 0 h 24 h 48 h 72 h
    对照组 0.125±0.005 0.233±0.063 0.36±0.024 0.448±0.028
    0.1 μmol/L 0.123±0.004 0.228±0.027 0.40±0.019 0.413±0.011
    1 μmol/L 0.124±0.004 0.349±0.039 0.471±0.010 0.482±0.013
    10 μmol/L 0.124±0.003 0.428±0.020* 0.562±0.036** 0.567±0.026**
    100 μmol/L 0.127±0.004 0.517±0.029* 0.555±0.022** 0.586±0.041**
    F 0.74 10.45 43.64 21.95
    P > 0.05 < 0.05 < 0.01 < 0.01
    MS组内 0.001 0.010 0.010 0.010
    q检验:与对照组比较*P<0.05,**P<0.01
    下载: 导出CSV

    表 2  各组细胞迁移指数、跨膜细胞数量及相对表达量比较(ni=3;x±s)

    分组 迁移指数 跨膜细胞数量 相对表达量
    对照组 0.22±0.05 38.33±5.13 1.00±0.02
    NE组 0.68±0.16** 86.67±17.16** 3.18±0.65**
    PRO+NE组 0.23±0.11# 54.33±5.69# 2.44±0.31##
    PRO组 0.18±0.06 20.33±4.16** 0.30±0.09**
    F 15.91 25.70 33.33
    P < 0.01 < 0.01 < 0.01
    MS组内 0.010 92.580 0.214
    q检验:与对照组比较**P<0.01;与NE组比较# P<0.05,##P < 0.01
    下载: 导出CSV

    表 3  细胞周期检测实验各期细胞数量百分比比较(ni=3;x±s)

    分组 G1 S期 G2
    对照组 67.93±2.12 23.55±1.05 8.04±0.59
    NE组 47.64±1.63** 44.08±1.66** 7.95±0.64
    PRO+NE组 56.75±1.35## 35.11±0.67## 7.98±0.31
    PRO组 73.93±3.24 18.73±1.21** 8.01±0.44
    F 84.32 270.60 0.05
    P < 0.01 < 0.01 > 0.05
    MS组内 4.870 1.450 0.260
    q检验:与对照组比较**P<0.01;与NE组相比##P<0.01
    下载: 导出CSV

    表 4  对照组、模型组及PRO组小鼠肿瘤体积比较(ni=10;x±s)

    分组 肿瘤体积/mm3 F P MS组内
    对照组 2 149.51±145.97
    模型组 2 910.74±433.01* 8.96 < 0.05 86 699.900
    PRO组 1 945.13±226.33#
    q检验:与对照组比较*P<0.05;与模型组比较#P<0.05
    下载: 导出CSV
  • [1] ROSENHAN DL, SELIGMAN ME.Abnormal psychology[M].New York:WW Norton & Co., 1995.
    [2] YI JC, SYRJALA KL.Anxiety and Depression in Cancer Survivors[J].Med Clin North Am, 2017, 101(6):1099. doi: 10.1016/j.mcna.2017.06.005
    [3] MCGUIRE S.World Cancer Report 2014.Geneva, Switzerland:World Health Organization, International Agency for Research on Cancer, WHO Press, 2015[J].Adv Nutr, 2016, 7(2):418.
    [4] ZHAO W, WU Z, CHEN J, et al.Survival prediction of anxious emotion in advanced cancer patients receiving palliative care[J].Psychooncology, 2017, 26(10):1463. doi: 10.1002/pon.4314
    [5] 阎子海, 肖永红, 张文杰, 等.心理因素与女性乳腺癌关系的Meta分析[J].中国公共卫生, 2006, 22(6):748. doi: 10.3321/j.issn:1001-0580.2006.06.060
    [6] FRANKE TF, KAPLAN DR, CANTLEY LC, et al.Direct regulation of the Akt proto-oncogene product by phosphatidylinositol-3, 4-bisphosphate[J].Science, 1997, 275(5300):665. doi: 10.1126/science.275.5300.665
    [7] PALMIERI M, PAL R, NELVAGAL HR, et al.mTORC1-independent TFEB activation via Akt inhibition promotes cellular clearance in neurodegenerative storage diseases[J].Nat Commun, 2017, 8:14338. doi: 10.1038/ncomms14338
    [8] 翟亚南, 陈柏安, 郭萌, 等.束缚应激的研究进展[J].实验动物科学, 2013, 30(4):56. doi: 10.3969/j.issn.1006-6179.2013.04.015
    [9] SHAO F, LIN W, WANG W, et al.The effect of emotional stress on the primary humoral immunity of rats[J].J Psychopharmacol, 2003, 17(2):179. doi: 10.1177/0269881103017002005
    [10] 谢贵林, 陈璐艳, 陈新华, 等.纳秒脉冲电场消融乳腺癌的实验研究[J].中国医药导报, 2015, 12(16):4.
    [11] OUYANG X, ZHU Z.Epinephrine increases malignancy of breast cancer through p38 MAPK signaling pathway in depressive disorders[J].Int J Clin Exp Pathol, 2019, 12(46):1932
    [12] INHESTERN L, BEIERLEIN V, BULTMANN J C, et al.Anxiety and depression in working-age cancer survivors:a register-based study[J].BMC Cancer, 2017, 17(1):347. doi: 10.1186/s12885-017-3347-9
    [13] PYTER LM, SUAREZ-KELLY LP, CARSON WE, et al.Novel rodent model of breast cancer survival with persistent anxiety-like behavior and inflammation[J].Behav Brain Res, 2017, 330(108):17.
    [14] DHABHAR FS, SAUL AN, HOLMES TH, et al.High-anxious individuals show increased chronic stress burden, decreased protective immunity, and increased cancer progression in a mouse model of squamous cell carcinoma[J].PLoS One, 2012, 7(4):e33069. doi: 10.1371/journal.pone.0033069
    [15] LUTGENDORF S K, DEGEEST K, DAHMOUSH L, et al.Social isolation is associated with elevated tumor norepinephrine in ovarian carcinoma patients[J].Brain Behav Immun, 2011, 25(2):250. doi: 10.1016/j.bbi.2010.10.012
    [16] YASUNARI K, MATSUI T, MAEDA K, et al.Anxiety-induced plasma norepinephrine augmentation increases reactive oxygen species formation by monocytes in essential hypertension[J].Am J Hypertens, 2006, 19(6):573. doi: 10.1016/j.amjhyper.2005.10.027
    [17] REEDER A, ATTAR M, NAZARIO L, et al.Stress hormones reduce the efficacy of paclitaxel in triple negative breast cancer through induction of DNA damage[J].Br J Cancer, 2015, 112(9):1461. doi: 10.1038/bjc.2015.133
    [18] THAKER PH, HAN LY, KAMAT AA, et al.Chronic stress promotes tumor growth and angiogenesis in a mouse model of ovarian carcinoma[J].Nat Med, 2006, 12(8):939. doi: 10.1038/nm1447
    [19] DETHLEFSEN C, HANSEN LS, LILLELUND C, et al.Exercise-Induced Catecholamines Activate the Hippo Tumor Suppressor Pathway to Reduce Risks of Breast Cancer Development[J].Cancer Res, 2017, 77(18):4894. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-16-3125
    [20] DETHLEFSEN C, LILLELUND C, MIDTGAARD J, et al.Exercise regulates breast cancer cell viability:systemic training adaptations versus acute exercise responses[J].Breast Cancer Res Treat, 2016, 159(3):469. doi: 10.1007/s10549-016-3970-1
    [21] CUI B, LUO Y, TIAN P, et al.Stress-induced epinephrine enhances lactate dehydrogenase A and promotes breast cancer stem-like cells[J].2019, 129(3): 1030.
    [22] KAMIYA A, HAYAMA Y, KATO S, et al.Genetic manipulation of autonomic nerve fiber innervation and activity and its effect on breast cancer progression[J].Nat Neurosci, 2019, 22(8):1289. doi: 10.1038/s41593-019-0430-3
  • [1] 陈永侠杨秀木况静英韩布新 . 乳腺癌手术患者焦虑抑郁状况及相关因素分析. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(9): 840-842.
    [2] 况敬英周清杨秀木陈永侠韩布新 . 乳腺癌患者配偶焦虑抑郁状况的调查及相关因素分析. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(11): 1170-1172.
    [3] 周丽华刘丽娜陈燕虹 . 自编瑜伽干预对乳腺癌术后化疗患者癌因性疲乏和焦虑的影响. 蚌埠医学院学报, 2016, 41(6): 827-829. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.06.040
    [4] 宣冬生郑立东 . TEE指导GDFT联合小剂量去甲肾上腺素用于老年腹腔镜结直肠癌手术的临床观察. 蚌埠医学院学报, 2019, 44(5): 585-589. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2019.05.006
    [5] 刘扬李竹琴张志刚 . 去甲肾上腺素及血管紧张素Ⅱ对大鼠心肌细胞胰岛素受体及胰岛素受体底物1酪氨酸磷酸化的综合效应. 蚌埠医学院学报, 2018, 43(2): 146-149. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2018.02.002
    [6] 赵遵兰卢晓辉王洋洋吴海华夏春磊陈素莲杨清玲陈昌杰 . 微小RNA-125b及其靶基因信号素分子4C在乳腺癌中的表达及意义. 蚌埠医学院学报, 2015, 40(10): 1301-1304.
    [7] 黄中岩唐启寿刘锦秀蒋玉敏陈善 . 大学生师源性焦虑现状调查. 蚌埠医学院学报, 2011, 36(6): 656-658.
    [8] 李文坚朱喜山孙柳静张正林 . 女性膀胱白斑患者焦虑、抑郁状态及其影响因素. 蚌埠医学院学报, 2015, 40(4): 461-463. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2015.04.014
    [9] 袁媛张耀龙范宏娟宋旭东于增荣 . 半乳糖凝集素3在乳腺癌中的表达及与人表皮生长因子受体2的关系. 蚌埠医学院学报, 2014, 39(7): 846-848.
    [10] 年娣孙俊杰时鹏 . 99Tcm-黄体生成素释放激素在荷人乳腺癌裸鼠体内的生物学分布. 蚌埠医学院学报, 2013, 37(10): 1238-1240.
    [11] 许美华 . 心理干预对宫腔镜检查患者焦虑及疼痛的影响. 蚌埠医学院学报, 2014, 38(3): 401-402.
    [12] 凌琳赵丽丽 . 治疗性沟通在诱导期血液透析患者焦虑中的运用. 蚌埠医学院学报, 2014, 39(8): 1129-1131.
    [13] 符彩艳何先弟 . ICU住院患者家属焦虑抑郁综合心理干预的研究进展. 蚌埠医学院学报, 2012, 36(5): 616-618.
    [14] 王娅 . 沟通告示牌对ICU患者家属焦虑情绪的影响. 蚌埠医学院学报, 2013, 37(9): 1218-1219.
    [15] 张洪凤张桂霞陈晓莉王红艳王德光 . 社会支持对慢性肾脏病患者焦虑、抑郁情绪的影响. 蚌埠医学院学报, 2016, 41(2): 259-262. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.02.041
    [16] 丁宁陶治荣胡芳 . 住院白血病患者生命质量与焦虑抑郁的相关性研究. 蚌埠医学院学报, 2015, 40(5): 672-675. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2015.05.037
    [17] 庄蔚然姚荣英 . 农村地区小学高年级儿童社交焦虑与养育状况的关系. 蚌埠医学院学报, 2017, 42(4): 491-494,507. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2017.04.022
    [18] 张先棠石秀峰刘学军 . 护理干预对全髋关节置换术患者术前焦虑的影响. 蚌埠医学院学报, 2011, 36(9): 1011-1013.
    [19] 周晓娟张理想詹玲尹丹丹 . 心房颤动病人焦虑抑郁状况及影响因素分析. 蚌埠医学院学报, 2019, 44(7): 876-880. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2019.07.009
    [20] 穆菁菁苏普玉李龙春王瑞斌孙婷婷张欣尚杨会 . 某高校大学生心理调适能力与焦虑、抑郁的相关性研究. 蚌埠医学院学报, 2019, 44(6): 787-791. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2019.06.026
  • 加载中
图(2)表(4)
计量
  • 文章访问数:  75
  • HTML全文浏览量:  66
  • PDF下载量:  12
  • 被引次数: 0
出版历程
  • 收稿日期:  2019-02-01
  • 录用日期:  2019-06-30
  • 刊出日期:  2019-07-15

焦虑状态下去甲肾上腺素激活Akt信号通路对乳腺癌作用研究

    通讯作者: 姜峰, jf365321@163.com
    通讯作者: 丁罡, ddinggang@hotmail.com
    作者简介: 欧阳雪岩(1993-), 女, 硕士研究生
  • 1. 上海交通大学医学院附属新华医院, 上海 200092
  • 2. 上海大学 生命科学学院, 上海 200444
  • 3. 上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院 癌痛转化研究所, 上海 202150
  • 4. 上海国际医学中心, 200120
基金项目:  上海市卫生健康委员会资助项目 20184Y0016上海市卫生健康委员会资助项目 201740027上海市卫生健康委员会资助项目 201640201上海市崇明区科学技术委员会资助项目 CKY2018-03上海市卫生健康委员会资助项目 201840003国家自然科学基金项目 81572859

摘要: 目的探讨去甲肾上腺素在焦虑状态下对乳腺癌的作用及机制。方法将20只C57BL/6小鼠分为对照组及模型组,通过接种肿瘤细胞和实验刺激建立焦虑荷瘤小鼠模型,造模结束后检测血清中去甲肾上腺素水平并测量肿瘤体积。人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞在去甲肾上腺素处理后检测其增殖、迁移、侵袭、细胞周期分布及Akt信号通路的激活状态。结果模型组小鼠肿瘤体积大于对照组(P < 0.05),血清中去甲肾上腺素含量明显升高(P < 0.01),且同焦虑程度呈现相关关系(r=0.78)。去甲肾上腺素提高了MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并且促进DNA复制以及Akt信号通路的激活。结论去甲肾上腺素在焦虑状态下激活AKt信号通路,促进乳腺癌的发展。

English Abstract

  • 焦虑是一种使人内心混乱的、不愉悦的精神状态[1]。有研究[2-3]发现,焦虑症状在乳腺癌病人中发生率较高且影响抗肿瘤治疗效果,并且与乳腺癌病人总生存时间存在显著相关性[4-5]。有报道显示,Akt通路作为一种特异性的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,对于许多细胞生理过程的调控起着关键的作用[6-7]。本研究拟用焦虑模型以及去甲肾上腺素处理的乳腺癌细胞,探究焦虑状态下乳腺癌发展的可能分子机制。现作报道。

    • 选用18~20 g雌性C57BL/6小鼠20只,饲养温度(24±2) ℃,湿度50%~60%,12 h昼夜循环,7:00开灯,19:00关灯,自由进食、饮水。实验分组前所有小鼠适应性饲养1周,经检查无异样后,随机分为对照组和模型组,各10只。动物实验按照上海交通大学医学院动物护理与使用委员会批准的方案进行。

    • 对照组小鼠正常饲养,模型组小鼠用束缚模型和空瓶模型联合使用造模[8-9]的基础上加以改进。每日观察各组小鼠的精神状态、饮食情况等。每周2次测量小鼠的体质量并观察其变化。(1)高架迷宫实验:高架十字迷宫由两条开放臂(50 cm×10 cm)和两条封闭臂(50 cm ×10 cm ×40 cm)组成,呈十字形交叉,中间由中央区连接(10 cm×10 cm),距离地面高50 cm,测试前1 d把动物搬进测试室适应环境。实验时,小鼠置于高架十字平台中央区域,头部正对其中一侧开放臂,每只小鼠测试时间5 min,计算机将自动记录下述指标:进入开放臂的次数(OE),进入开放臂次数百分比,进入开放臂时间(OT),进入开放臂时间百分比。本研究选取开放臂进入次数百分比作为评价指标。(2)旷场实验:旷场反应箱高30~40 cm,底边长100 cm,内壁涂黑,底面平均分为25个4 cm×4 cm小方格,实验在安静的环境下进行。将动物放入箱内底面中心,同时进行摄像和计时,观察5 min后停止摄像,清洗方箱内壁及底面。实验检测下述指标:单位时间内动物在中央格停留时间,某一肢体越过的格子数为水平得分,后肢站立次数为垂直得分,修饰次数、尿便次数、运动速度、运动距离、休息时间、沿边运动距离、中央运动距离等。本研究选取垂直评分作为评价指标。

    • 在造模成功以后,参考谢贵林等[10]在C57小鼠构建乳腺癌模型的经验,对所有动物进行皮下荷瘤。在构建模型前,将小鼠置于X光下照射4 h,注射环磷酰胺35 mg/kg降低其免疫机能。小鼠皮下注射悬浮在0.2 mL磷酸盐缓冲液(PBS)中的MDA-MB-231(1×107个),2周后处死小鼠,剥离肿瘤,计算肿瘤体积=(a×b2)/2(a=最大表面直径,b=最小表面直径)。

    • 在模型建立结束时收集来自对照组和实验组动物的血液。将收集的样品在室温下静置40 min,离心(3 000 r/min,4 ℃,10 min)。吸出300 μL血清,使用ELISA KIT检测游离血清中的去甲肾上腺素。每个样品测定3次,并且基于标准曲线计算每个样品的平均光密度(OD)值。该实验过程独立重复3次。

    • 人乳腺癌细胞系MDA-MB-231购自Cell Bank(上海生命科学研究院和中国科学院)。细胞在Dulbecco′s Modified Eagle培养基(DMEM)中培养,添加1%双抗和10%热灭活的胎牛血清(Thermo Fisher Scientific,Inc)置于37 ℃,5%CO2的环境中培养。

    • 将MDA-MB-231细胞以2×104个细胞的密度加入6孔板中,爬片24 h后,用预冷的PBS洗涤3次后,使用4%多聚甲醛固定细胞,用0.15%Triton透化,然后PBS再次充分洗涤。将细胞与抗-β1-AR(Abcam, USA)或抗-β2-AR(Abcam,USA)的一抗(1:100)在室温下孵育1 h。然后,将细胞与二抗(Jackson,USA,1:1 000)在室温下黑暗中孵育1 h。再次用PBS洗涤,用4, 6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI,Sangon)对细胞进行复染并用荧光显微镜(Olympus,Tokyo,Japan)观察。

    • 将细胞接种于96孔板(每孔1×103个,100 μL)中,将去甲肾上腺素按照0、0.1、1、10、100 μmol/L的浓度加入孔中,并在37 ℃、5%CO2下培养24、48或72 h。向每个孔中加入10 μL CCK-8(Thermo Fisher Scientific),并且在温育2 h后,使用Multiskan FC酶免疫测定分析仪检测450 nm处的OD值。该实验独立重复3次。

    • 将MDA-MB-231细胞以每孔2×104个细胞的密度接种到6孔板中,并在无血清的培养基中培养,过夜,将细胞分为普萘洛尔预处理45 min后给予去甲肾上腺素组(PRO+NE组)、直接加入去甲肾上腺素组(NE组)、只用普萘洛尔处理组(PRO组)和对照组。继续培养48 h后,每个孔用PBS洗涤3次, 在显微镜下选取视野观察。迁移指数=(边缘距离0 h-边缘距离48 h)/边缘距离0 h。

    • 将MDA-MB-231(3×103个)置于上部Transwell小室(24孔版,0.8 μm孔径; Corning Costar)上,小室内底面涂抹覆盖Matrigel(Sigma)并加入200 μL无血清的培养液。下室加入500 μL含有10%胎牛血清的DMEM,分组同前。在37 ℃温育48 h后,用棉签轻擦上层小室内底面的细胞,用4%多聚甲醛固定下膜表面的细胞,用0.1%结晶紫染色,并在显微镜下计数。该实验独立重复3次。

    • 将MDA-MB-231细胞分组处理后,使用胰蛋白酶消化,差速离心收集细胞,用预冷的PBS洗涤2次,并在4 ℃下在冷冻的70%乙醇中固定过夜。收集固定的细胞,用PBS洗涤2次,悬浮于含有10 μg/mL碘化丙啶(PI,Sigma,USA)和100 μg/mL RNase A的PBS中,然后在4 ℃下孵育30 min,避光操作。使用流式细胞仪分析(Becton-Dickinson FACScan)测定细胞周期分布。

    • 预冷200 μL含有蛋白酶抑制剂(PMSF)的细胞裂解缓冲液(RIPA)裂解细胞MDA-MB-231并收集其中的总蛋白,BCA蛋白质测定法测定提取的蛋白质浓度。每孔加样30 μg蛋白,加入十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺(SDS)凝胶上进行电泳,然后转移到PVDF膜(Thermo Fisher,USA)上。将膜用Tris缓冲盐水(TBS)配成5%脱脂奶粉在室温下封闭1 h,添加一抗在4 ℃下孵育过夜。然后用兔二抗室温孵育2 h,用Trident ECL显色。相对表达量=目的蛋白表达量/actin表达量。

    • 采用t检验、方差分析和q检验。

    • 小鼠高架十字迷宫实验结果显示,造模组小鼠进入开放臂次数比例为13.75%±4.16%,明显低于对照组的40.68%±9.87%(t=7.95,P < 0.01)。ELISA实验结果显示,造模组小鼠血清中的去甲肾上腺素的水平为(195.64±17.53)pg/mL, 低于对照组的(65.69±16.41)pg/ mL(t=17.11,P < 0.01)。造模组小鼠的去甲肾上腺素水平与焦虑程度呈显著正相关关系(r=0.78,P < 0.01)。造模组小鼠的肿瘤体积(2 830.13±188.68)mm3, 大于对照组的(2 155.33±212.43)mm3(t=7.51,P < 0.05)。

    • Western blotting结果显示,β1-AR和β2-AR均可在MDA-MB-231细胞系中表达,相对表达分别为1.63%±0.09%、1.72%±0.23%。免疫荧光实验支持这一结果(见图 12)。

      图  1  MDA-MB-231细胞中β1受体存在表达

      图  2  MDA-MB-231细胞中β2受体存在表达

    • 去甲肾上腺素对MDA-MB-231的增殖有明显的促进作用,且具有时间和剂量依赖性, 各实验组与对照组间相比有统计学意义(P < 0.05)(见表 1)。与对照组相比,去甲肾上腺素组细胞的迁移指数有明显增加(P < 0.01),经PRO预处理后,细胞迁移能力较单加去甲肾上腺素明显减弱(P < 0.05)。去甲肾上腺素处理组的跨膜细胞数量相比对照组有明显增加(P < 0.01),而经PRO预处理组的细胞跨膜数量比单用去甲肾上腺素组减少(P < 0.05)。去甲肾上腺素上调Akt表达量(P<0.01),PRO组Akt信号通路蛋白相对表达量比NE组明显降低(P<0.01)(见表 2)。

      分组 0 h 24 h 48 h 72 h
      对照组 0.125±0.005 0.233±0.063 0.36±0.024 0.448±0.028
      0.1 μmol/L 0.123±0.004 0.228±0.027 0.40±0.019 0.413±0.011
      1 μmol/L 0.124±0.004 0.349±0.039 0.471±0.010 0.482±0.013
      10 μmol/L 0.124±0.003 0.428±0.020* 0.562±0.036** 0.567±0.026**
      100 μmol/L 0.127±0.004 0.517±0.029* 0.555±0.022** 0.586±0.041**
      F 0.74 10.45 43.64 21.95
      P > 0.05 < 0.05 < 0.01 < 0.01
      MS组内 0.001 0.010 0.010 0.010
      q检验:与对照组比较*P<0.05,**P<0.01

      表 1  CCK-8实验结果OD值比较(ni=3;x±s)

      分组 迁移指数 跨膜细胞数量 相对表达量
      对照组 0.22±0.05 38.33±5.13 1.00±0.02
      NE组 0.68±0.16** 86.67±17.16** 3.18±0.65**
      PRO+NE组 0.23±0.11# 54.33±5.69# 2.44±0.31##
      PRO组 0.18±0.06 20.33±4.16** 0.30±0.09**
      F 15.91 25.70 33.33
      P < 0.01 < 0.01 < 0.01
      MS组内 0.010 92.580 0.214
      q检验:与对照组比较**P<0.01;与NE组比较# P<0.05,##P < 0.01

      表 2  各组细胞迁移指数、跨膜细胞数量及相对表达量比较(ni=3;x±s)

    • 流式细胞仪结果显示,去甲肾上腺素作用后,S期细胞比例相较对照组明显增加(P<0.01),G1期细胞的比例明显减少(P<0.01)。而如果用PRO预处理,则上述作用明显减弱(P<0.01)(见表 3)。

      分组 G1 S期 G2
      对照组 67.93±2.12 23.55±1.05 8.04±0.59
      NE组 47.64±1.63** 44.08±1.66** 7.95±0.64
      PRO+NE组 56.75±1.35## 35.11±0.67## 7.98±0.31
      PRO组 73.93±3.24 18.73±1.21** 8.01±0.44
      F 84.32 270.60 0.05
      P < 0.01 < 0.01 > 0.05
      MS组内 4.870 1.450 0.260
      q检验:与对照组比较**P<0.01;与NE组相比##P<0.01

      表 3  细胞周期检测实验各期细胞数量百分比比较(ni=3;x±s)

    • 模型组小鼠肿瘤体积大于对照组肿瘤体积(P<0.05)。PRO组肿瘤体积与模型组比较明显缩小(P<0.05)(见表 4)。

      分组 肿瘤体积/mm3 F P MS组内
      对照组 2 149.51±145.97
      模型组 2 910.74±433.01* 8.96 < 0.05 86 699.900
      PRO组 1 945.13±226.33#
      q检验:与对照组比较*P<0.05;与模型组比较#P<0.05

      表 4  对照组、模型组及PRO组小鼠肿瘤体积比较(ni=10;x±s)

    • 本研究结果提示焦虑样情绪或可通过提高血液去甲肾上腺素水平激活肿瘤细胞Akt信号通路,促进乳腺癌的进展。体内外实验证实去甲肾上腺素是与焦虑症状相关的关键激素。已有研究[11]表明,不良情绪会影响乳腺癌的恶性程度。焦虑情绪作为不良情绪的一种,同样会促进前列腺癌、肺癌等肿瘤的增殖、迁移和侵袭[12-13]能力。然而,焦虑促进乳腺癌进程的发生机制尚未完全阐明。

      为了进一步进行相关机制研究,我们采用束缚模型和空瓶模型联合应用的方法建立C57BL/6小鼠焦虑模型,以模拟临床病人的慢性焦虑症状。对实验动物皮下荷瘤的尺寸测定结果提示,焦虑动物瘤体较对照组显著增大,提示焦虑症状的确可以促进乳腺癌的生长,同DHABHAR等[14-15]研究结果相互印证。造模结束后,我们检测了小鼠血清的去甲肾上腺素含量,结果表明,在焦虑状态下,去甲肾上腺素浓度上升且与焦虑程度呈正相关。YASUNARI等研究[16]也表明去甲肾上腺素作为一种情绪相关激素,在焦虑状态下其血清中的含量发生改变。

      在去甲肾上腺素对肿瘤的作用方面,前人的研究结果出现了一定的差异,REEDER等[17-18]认为去甲肾上腺素可以促进乳腺肿瘤和卵巢肿瘤的增殖,而DETHLEFSEN等[19-20]在裸鼠中的研究表明去甲肾上腺素对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的抑制作用,可能是运动抑癌效应的原因。我们认为,多项研究结果间的差异,可能与研究的载体、给药途径、药物浓度有关,在体研究的体系差异也可能导致与离体研究结果的不同。本研究与CUI等[21-22]的结果一致,即肾上腺素受体的激活对乳腺癌细胞系的增殖、侵袭和迁移能力均有促进作用,提示焦虑状态下去甲肾上腺素在促进乳腺癌进程中可能扮演着重要角色。

      综上所述,去甲肾上腺素作为一种重要的情绪相关激素,对于焦虑促进肿瘤进程发挥了重要的介导作用,其机制可能与激活Akt信号通路有关。有效的情绪管理以及特异性地阻断去甲肾上腺素受体可能成为抗肿瘤治疗的新策略。

参考文献 (22)

目录

    /

    返回文章
    返回