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SOX7基因对肝癌细胞凋亡、氧化应激及Wnt/β-catenin信号通路的影响

冯桂银 张庚 王海伦 梁东启 袁媛 樊艳

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SOX7基因对肝癌细胞凋亡、氧化应激及Wnt/β-catenin信号通路的影响

    作者简介: 冯桂银(1974-), 女, 主治医师.
  • 基金项目:

    河北省沧州市中心医院市级项目 162302119

  • 中图分类号: R735.7

Effect of SOX7 gene on the apoptosis, oxidative stress and Wnt/β-catenin signaling pathway in liver cancer cells

  • CLC number: R735.7

  • 摘要: 目的探讨过表达SOX7对肝癌细胞凋亡、活性氧(ROS)水平及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法人肝癌Huh-7细胞分为空白组、空质粒pcDNA3.1组(Vector组)和pcDNA3.1-SOX7重组质粒组(pcDNA3.1-SOX7组)。转染48 h,Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡试剂盒、DCFH-DA法及Western blotting分别检测细胞凋亡率、ROS含量及SOX7、β-catenin、cyclin D1和cleaved-caspase 3蛋白表达。MTT法检测pcDNA3.1转染24 h、48 h和72 h的细胞活力。结果pcDNA3.1-SOX7重组质粒组SOX7蛋白表达明显高于空白组(P < 0.05)。与空白组比较,pcDNA3.1-SOX7组细胞活力及β-catenin和cyclin D1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡率、ROS含量及cleaved-caspase 3蛋白表达明显升高(P < 0.05)。结论过表达SOX7可诱导肝癌细胞凋亡,凋亡机制与细胞内ROS水平提高及Wnt/β-catenin信号通路抑制有关。
  • 图 1  pcDNA3.1-SOX7重组质粒转染Huh-7细胞效果

    图 2  过表达S0X7对Huh-7细胞凋亡的影响

    图 3  过表达S0X7对Wnt/β -catenin信号通路的影响

    表 1  pcDNA3.1-SOX7重组质粒转染Huh-7细胞后SOX7蛋白表达情况(x±s)

    分组 SOX7蛋白相对表达量
    空白组 0.072±0.008
    Vector组 0.065±0.007
    pcDNA3.1-SOX7组 0.572±0.042*
    F 405.25
    P < 0.01
    MS组内 0.001
    与空白组比较*P < 0.05
    下载: 导出CSV

    表 2  过表达SOX7对Huh-7细胞活力的影响(x±s)

    分组 24 h 48 h 72 h
    空白组 0.488±0.045 0.712±0.059 0.978±0.072
    Vector组 0.501±0.042 0.687±0.051 0.954±0.078
    pcDNA3.1-SOX7组 0.311±0.028* 0.502±0.043* 0.697±0.056*
    F 22.17 14.93 15.16
    P < 0.01 < 0.01 < 0.01
    MS组内 0.002 0.003 0.005
    与空白组比较*P < 0.05
    下载: 导出CSV

    表 3  过表达SOX7对Huh-7细胞凋亡的影响(x±s)

    分组 凋亡率/% 荧光强度
    空白组 4.15±0.46 51.25±5.06
    Vector组 4.26±0.51 52.88±5.39
    pcDNA3.1-SOX7组 25.54±1.62* 114.9±8.42*
    F 441.06 94.39
    P < 0.01 < 0.01
    MS组内 1.032 41.851
    与空白组比较*P < 0.05
    下载: 导出CSV

    表 4  β-catenin、cyclin D1和cleaved-caspase 3的蛋白相对表达量情况(x±s)

    分组 β-catenin cyclin D1 cleaved-caspase 3
    空白组 0.815±0.069 0.271±0.032 0.026±0.004
    Vector组 0.832±0.072 0.294±0.035 0.030±0.005
    pcDNA3.1-SOX7组 0.356±0.039* 0.150±0.018* 0.104±0.010*
    F 57.24 20.93 123.15
    P < 0.01 < 0.01 < 0.01
    MS组内 0.004 0.001 0.001
    与空白组比较*P < 0.05
    下载: 导出CSV
  • [1] 朱威威, 陈晓龙, 陈建安, 等.α-烯醇化酶在肝癌组织中的表达及临床意义[J].郑州大学学报:医学版, 2018, 53(4):412.
    [2] FENG X, JIANG J, SHI S, et al.Knockdown of miR-25 increases the sensitivity of liver cancer stem cells to TRAIL-induced apoptosis via PTEN/PI3K/Akt/Bad signaling pathway[J].Int J Oncol, 2016, 49(6):2600. doi: 10.3892/ijo.2016.3751
    [3] HONG H, AN JC, DE LA CRUZ JF, et al.Cnidium officinale Makino extract induces apoptosis through activation of caspase-3 and p53 in human liver cancer HepG2 cells[J].Exp Ther Med, 2017, 14(4):3191. doi: 10.3892/etm.2017.4916
    [4] 聂金霞, 刘娅, 徐明明.长链非编码RNA PVT1调控miR-551通过Wnt信号通路对卵巢癌迁移和侵袭的影响[J].中国病理生理杂志, 2018, 34(2):232. doi: 10.3969/j.issn.1000-4718.2018.02.007
    [5] LI Y, GANG Z, WEN Z, et al.Long noncoding RNA AB073614 promotes the malignance of glioma by activating Wnt/β-catenin signaling through downregulating SOX7[J].Oncotarget, 2017, 8(39):65577.
    [6] WANG J, ZHANG S, WU J, et al.Clinical significance and prognostic value of SOX7 expression in liver and pancreatic carcinoma[J].Mol Med Rep, 2017, 16(1):499.
    [7] LIANG Y, MA J, ZHU Y, et al.miR-24-3p promotes cell migration and proliferation in lung cancer by targeting SOX7[J].J Cell Biochem, 2017, 119(5):3989.
    [8] LIU X, LI J, YU Z, et al.MiR-935 promotes liver cancer cell proliferation and migration by targeting SOX7[J].Oncol Res, 2017, 25(3):427.
    [9] WU GG, LI WH, HE WG, et al.miR-184 post-transcriptionally regulates SOX7 expression and promotes cell proliferation in human hepatocellular carcinoma[J].PLoS One, 2014, 9(2):e88796. doi: 10.1371/journal.pone.0088796
    [10] 陆周一, 陈晓峰.WNT/β-catenin信号通路与miRNA在原发性肺癌中的研究进展[J].中国癌症杂志, 2017, 27(2):151.
    [11] GUO D, DI Z, WANG Q, et al.Baicalein inhibits progression of osteosarcoma cells through inactivation of the Wnt/β-catenin signaling pathway[J].Oncotarget, 2017, 8(49):86098.
    [12] 刘洪羽, 吴再锋, 曾峥, 等.抑癌因子SOX7在乳腺癌中的表达及其与AXIN2表达的相关性[J].国际遗传学杂志, 2017, 40(2):72. doi: 10.3760/cma.j.issn.1673-4386.2017.02.002
    [13] ZHAO T, YANG H, YU T, et al.SOX7 is associated with the suppression of human glioma by HMG-box dependent regulation of Wnt/β-catenin signaling[J].Cancer Lett, 2016, 375(1):100. doi: 10.1016/j.canlet.2016.02.044
    [14] CUI J, XI H, CAI A, et al.Decreased expression of Sox7 correlates with the upregulation of the Wnt/β-catenin signaling pathway and the poor survival of gastric cancer patients[J].Int J Mol Med, 2014, 34(1):197. doi: 10.3892/ijmm.2014.1759
    [15] CHAN DW, MAK CS, LEUNG TH, et al.Down-regulation of Sox7 is associated with aberrant activation of Wnt/β-catenin signaling in endometrial cancer[J].Oncotarget, 2012, 3(12):1546.
    [16] PU X, STORR SJ, ZHANG Y, et al.Caspase-3 and caspase-8 expression in breast cancer:caspase-3 is associated with survival[J].Apoptosis, 2017, 22(3):1.
    [17] LI S, YANG Y, DING Y, et al.Impacts of survivin and caspase-3 on apoptosis and angiogenesis in oral cancer[J].Oncol Lett, 2017, 14(3):3774. doi: 10.3892/ol.2017.6626
    [18] 李先佳, 任丽平, 金少举.马鞭草总黄酮诱导肝癌HepG-2细胞凋亡及可能机制[J].国际药学研究杂志, 2017, 44(8):790.
    [19] SU N, WANG P, LI Y.Role of Wnt/β-catenin pathway in inducing autophagy and apoptosis in multiple myeloma cells[J].Oncol Lett, 2016, 12(6):4623. doi: 10.3892/ol.2016.5289
    [20] KALEEM S, SIDDIQUI S, HUSSAIN A, et al.Eupalitin induces apoptosis in prostate carcinoma cells through ROS generation and increase of caspase-3 activity[J].Cell Biol Int, 2016, 40(2):196.
    [21] CUSIMANO A, BALASUS D, AZZOLINA A, et al.Oleocanthal exerts antitumor effects on human liver and colon cancer cells through ROS generation[J].Int J Oncol, 2017, 51(2):533. doi: 10.3892/ijo.2017.4049
  • [1] 陈正徐章尧陈昌杰 . 三氧化二砷诱导肿瘤细胞凋亡的机制及信号传导. 蚌埠医学院学报, 2008, 33(1): 116-118.
    [2] 裴晓艳张晓梅 . 不同糖调节受损人群氧化应激状况与胰岛素抵抗及胰岛细胞功能的相关性. 蚌埠医学院学报, 2012, 36(10): 1174-1177.
    [3] 孙军培刘久华杜丹丽杨晓东张燕 . 三氧化二砷对膀胱癌T24细胞增殖及APC基因表达的影响. 蚌埠医学院学报, 2018, 43(8): 989-992. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2018.08.003
    [4] 刘倩周庆 . 过氧化氢对人脐静脉内皮细胞白细胞介素-37表达的影响. 蚌埠医学院学报, 2016, 41(11): 1413-1416,1421. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.11.004
    [5] 刘海防谢青 . 内质网应激在肝细胞凋亡中的意义. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(8): 768-770.
    [6] 高绪锋陈昌杰王东萍章尧 . bcl-2和bax在三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(1): 9-11.
    [7] 王玮陈立军初殿伟呼文亮 . 人源肝癌细胞系中甲胎蛋白基因表达及甲基化的研究. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(2): 106-109.
    [8] 席盼盼张淑香 . 凋亡相关基因及其与喉癌关系的研究进展. 蚌埠医学院学报, 2016, 41(1): 137-140. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.01.045
    [9] 梁利梅王才智刘淑玉 . 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体、死亡受体5及诱骗受体2在子宫内膜癌中的表达及其临床意义. 蚌埠医学院学报, 2012, 36(10): 1162-1165.
    [10] 杨芬蒋志文 . 内质网应激对肿瘤发展及化疗反应的影响. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(5): 457-459.
    [11] 刘继松方勇 . 氧化应激和糖尿病创面的延迟愈合. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(7): 756-757.
    [12] 黄桦高洁 . 三氧化二砷对人恶性黑素瘤A375细胞抑制机制的探讨. 蚌埠医学院学报, 2012, 36(11): 1277-1279,1282.
    [13] 张克昌吴俊英王慧李柏青陈庆书 . 4-1BBL介导逆向信号在HL-60细胞对淋巴细胞活性影响中的作用. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(4): 337-339,342.
    [14] 高洁丁淑琴邓蓉郭普张伦军黄桦 . 奥沙利铂通过p53信号通路抑制肝癌细胞增殖的机制研究. 蚌埠医学院学报, 2018, 43(8): 984-988. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2018.08.002
    [15] 郭绍永许培权 . Livin基因与消化道肿瘤的研究进展. 蚌埠医学院学报, 2013, 37(5): 643-645.
    [16] 曲真真石建华汪万英 . nm23和Bcl-2基因在甲状腺肿瘤中的研究进展. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(3): 267-269.
    [17] 王慧吴俊英 . 靶向4-1BBL基因siRNA抑制HL-60B细胞生长的体外研究. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(8): 757-761.
    [18] 武秀玲李向荣 . 还原型谷胱甘肽对糖尿病酮症酸中毒患者氧化应激的影响. 蚌埠医学院学报, 2011, 36(6): 600-601,605.
    [19] 刘传苗李伟赵守松 . 原发性肝癌患者及慢性乙肝病毒携带者肝组织中乙型肝炎病毒X基因的变异. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(7): 665-667.
    [20] 刘传苗徐静 . 肝细胞癌血清肿瘤标志物DCP、AFP-L3和AFP的表达及临床意义. 蚌埠医学院学报, 2012, 36(9): 1031-1033.
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出版历程
  • 收稿日期:  2018-11-23
  • 录用日期:  2019-06-07
  • 刊出日期:  2019-07-15

SOX7基因对肝癌细胞凋亡、氧化应激及Wnt/β-catenin信号通路的影响

    作者简介: 冯桂银(1974-), 女, 主治医师
  • 河北省沧州市中心医院 疼痛科, 061000
基金项目:  河北省沧州市中心医院市级项目 162302119

摘要: 目的探讨过表达SOX7对肝癌细胞凋亡、活性氧(ROS)水平及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法人肝癌Huh-7细胞分为空白组、空质粒pcDNA3.1组(Vector组)和pcDNA3.1-SOX7重组质粒组(pcDNA3.1-SOX7组)。转染48 h,Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡试剂盒、DCFH-DA法及Western blotting分别检测细胞凋亡率、ROS含量及SOX7、β-catenin、cyclin D1和cleaved-caspase 3蛋白表达。MTT法检测pcDNA3.1转染24 h、48 h和72 h的细胞活力。结果pcDNA3.1-SOX7重组质粒组SOX7蛋白表达明显高于空白组(P < 0.05)。与空白组比较,pcDNA3.1-SOX7组细胞活力及β-catenin和cyclin D1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡率、ROS含量及cleaved-caspase 3蛋白表达明显升高(P < 0.05)。结论过表达SOX7可诱导肝癌细胞凋亡,凋亡机制与细胞内ROS水平提高及Wnt/β-catenin信号通路抑制有关。

English Abstract

  • 肝癌发病隐匿、发展迅速、恶性程度高, 术后易复发和转移,5年生存率低,且近些年的发病率和死亡率明显上升[1]。肝癌是一个多基因参与、多因素作用和多阶段发病的疾病,其发生发展机制尚未明确[2]。有研究[3-4]发现,抑癌基因、癌基因、信号通路等参与了肿瘤形成,如RTEN基因、p53基因、Wnt信号通路等。因此,研究引起肝癌发生发展的分子机制对于其诊疗尤为重要。SOX7是含高迁移率族蛋白(HMG)结构域的SOX家族成员之一,可与β-catenin竞争结合TCF/LEF,从而抑制Wnt/β-catenin信号通路激活[5]。有研究[6-7]报道,肝癌、肺癌等多种肿瘤中SOX7呈现低表达,其表达与肿瘤进展明显相关。miR-935可通过靶向抑制SOX7促进肝癌细胞增殖和迁移[8];miR-184可靶向抑制SOX7促进肝癌细胞增殖,加速细胞周期进程[9]。关于SOX7对肝癌细胞凋亡影响及机制尚未明确。因此,本研究将pcDNA3.1-SOX7重组质粒转染人肝癌细胞,旨在观察过表达SOX7对肝癌细胞凋亡影响,并进一步研究其对细胞活性氧(ROS)水平及Wnt/β-catenin信号通路影响, 以期为肝癌治疗提供理论基础。

    • 人肝癌Huh-7细胞购自中国科学院上海细胞研究所;DMEM培养基购自美国Gibco;FBS购自杭州四季青;MTT、DMSO均购自美国Sigma;流式细胞仪和Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡试剂盒均购自美国BD;SOX7、β-catenin、cyclin D1和cleaved-caspase 3抗体及HRP标记的二抗均购自美国Abcam;酶标仪购自美国Thermo。

    • Huh-7细胞在含10% FBS的DMEM培养基中,于37 ℃、5%CO2培养箱中常规传代培养。细胞分为空白组、空质粒pcDNA3.1组(Vector组)和pcDNA3.1-SOX7重组质粒组(pcDNA3.1-SOX7组)。

    • 依据GeneBank中提供的SOX7基因CDS序列(NM-031439),委托上海生工生物工程有限公司设计合成pcDNA3.1-SOX7重组质粒。参照lipofectamineTM2000说明书进行转染。转染前24 h,将生长至对数期的Huh-7细胞接种于6孔板,每孔2 mL(约3×105个细胞),于37 ℃、5%CO2培养箱中培养,使转染时细胞达50%~60%的生长融合度。制备pcDNA3.1与lipofectamineTM 2000混合物,将混合物加入6孔板各分组相应的孔内,常规孵育6 h后,换为含血清的培养基,继续培养48 h,用于后续实验研究。

    • 以每孔200 μL细胞悬液(约5×103个细胞)接种生长至对数期的Huh-7细胞于96孔板,常规孵育24 h后,将pcDNA3.1转染细胞,并设置未转染的细胞作为空白组,分别于转染的24、48和72 h,每孔细胞中加10 μL MTT溶液(5 mg/mL),于培养箱中继续孵育4 h,将上清液吸弃,每孔加DMSO溶液150 μL,摇床上低速振荡10 min,以使结晶能够溶解充分。490 nm波长,酶标仪测定各孔的吸光度值(A)。每组设置5个复孔,实验重复3次。

    • pcDNA3.1-SOX7重组质粒转染Huh-7细胞48 h,预冷PBS洗涤细胞,500 μL 1×binding buffer重悬细胞。计算比例取出1×105个细胞,加10 μL Annexin V-FITC,混匀,再加入5 μL PI,混匀,暗室室温避光反应15~20 min,上机前再加入1×binding buffer 200 μL,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况(1 h内)。实验重复3次。

    • pcDNA3.1-SOX7重组质粒转染Huh-7细胞48 h,收集细胞,更换为含10 μmol/L DCFH-DA的DMEM培养液,于37 ℃孵育20 min,弃掉培养液,无血清培养液洗涤细胞3次,镜下观察。同时收获细胞,并将细胞浓度调整为1×106/mL,流式细胞仪检测各组的荧光强度。激发波长488 nm,发射波长525 nm。实验重复3次。

    • pcDNA3.1-SOX7重组质粒转染Huh-7细胞48 h,收集细胞,加适量RIPA裂解液提取细胞总蛋白,BCA法测定总蛋白浓度。SDS-PAGE后湿转PVDF膜,膜用5%脱脂奶粉封闭1 h,TBST洗膜,加一抗稀释液(SOX7、β-catenin、cyclin D1和cleaved-caspase 3抗体,均为1:1 000稀释),4 ℃冰箱孵育过夜,TBST洗膜,加HRP标记的二抗稀释液(1:3 000稀释),室温孵育1 h,在膜上滴加ECL显色液,在暗盒中使用X光胶片曝光。拍照。Image J图像分析软件分析各条带的灰度值。实验重复3次。

    • 采用方差分析和q检验。

    • pcDNA3.1-SOX7重组质粒转染Huh-7细胞48 h,Western blotting检测结果显示,pcDNA3.1-SOX7组SOX7表达明显高于空白组(P < 0.05),Vector组SOX7表达与空白组差异无统计学意义(P>0.05)(见图 1表 1)。

      图  1  pcDNA3.1-SOX7重组质粒转染Huh-7细胞效果

      分组 SOX7蛋白相对表达量
      空白组 0.072±0.008
      Vector组 0.065±0.007
      pcDNA3.1-SOX7组 0.572±0.042*
      F 405.25
      P < 0.01
      MS组内 0.001
      与空白组比较*P < 0.05

      表 1  pcDNA3.1-SOX7重组质粒转染Huh-7细胞后SOX7蛋白表达情况(x±s)

    • pcDNA3.1-SOX7重组质粒转染Huh-7细胞24、48和72 h,MTT检测结果显示,与空白组比较,pcDNA3.1-SOX7组在3个时间点的细胞活力均明显降低(P < 0.05)(见表 2)。

      分组 24 h 48 h 72 h
      空白组 0.488±0.045 0.712±0.059 0.978±0.072
      Vector组 0.501±0.042 0.687±0.051 0.954±0.078
      pcDNA3.1-SOX7组 0.311±0.028* 0.502±0.043* 0.697±0.056*
      F 22.17 14.93 15.16
      P < 0.01 < 0.01 < 0.01
      MS组内 0.002 0.003 0.005
      与空白组比较*P < 0.05

      表 2  过表达SOX7对Huh-7细胞活力的影响(x±s)

    • pcDNA3.1-SOX7重组质粒转染Huh-7细胞48 h,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡结果显示,与空白组比较,pcDNA3.1-SOX7组细胞凋亡率及ROS含量均明显升高(P < 0.05)(见图 2表 3)。

      图  2  过表达S0X7对Huh-7细胞凋亡的影响

      分组 凋亡率/% 荧光强度
      空白组 4.15±0.46 51.25±5.06
      Vector组 4.26±0.51 52.88±5.39
      pcDNA3.1-SOX7组 25.54±1.62* 114.9±8.42*
      F 441.06 94.39
      P < 0.01 < 0.01
      MS组内 1.032 41.851
      与空白组比较*P < 0.05

      表 3  过表达SOX7对Huh-7细胞凋亡的影响(x±s)

    • Western blotting检测各组细胞β-catenin、cyclin D1和cleaved-caspase 3蛋白表达,与空白组比较,pcDNA3.1-SOX7组β-catenin和cyclin D1明显降低,cleaved-caspase 3表达明显升高(P < 0.05)(见图 3表 4)。

      图  3  过表达S0X7对Wnt/β -catenin信号通路的影响

      分组 β-catenin cyclin D1 cleaved-caspase 3
      空白组 0.815±0.069 0.271±0.032 0.026±0.004
      Vector组 0.832±0.072 0.294±0.035 0.030±0.005
      pcDNA3.1-SOX7组 0.356±0.039* 0.150±0.018* 0.104±0.010*
      F 57.24 20.93 123.15
      P < 0.01 < 0.01 < 0.01
      MS组内 0.004 0.001 0.001
      与空白组比较*P < 0.05

      表 4  β-catenin、cyclin D1和cleaved-caspase 3的蛋白相对表达量情况(x±s)

    • Wnt/β-catenin信号通路是Wnt信号通路中的经典信号途径,在进化上高度保守,参与调节多种人类疾病,特别是肿瘤的发生发展及预后[10]。Wnt/β-catenin信号通路的异常活化可引起肿瘤发生。β-catenin是Wnt/β-catenin信号的关键分子,入核后可结合于TCF/LEF,从而激活cyclin D1、c-myc等下游与肿瘤发生发展相关的靶基因,从而促进肿瘤进展[11]。近些年来,关于高迁移率族蛋白结构域SOX家族基因与肿瘤发生发展关系已成为研究热点。SOX7是Wnt/β-catenin信号的关键负性调控因子,发挥抑癌基因样作用[12]。有研究[13]显示,SOX7质粒转染脑胶质瘤细胞后,细胞增殖明显被抑制,Wnt/β-catenin信号转录水平降低,且下游靶基因cyclin D1和c-myc的表达降低,而抑制SOX7表达后不能引起上述现象。因此认为,SOX7可通过将自身HGM-box结构域与β-catenin结合,抑制β-catenin表达,从而降低β-catenin介导的细胞增殖活性,扮演着抑癌基因作用。此外,在胃癌、子宫内膜癌等多种肿瘤中也有类似的报道[14-15]。过表达SOX7是否可诱导肝癌细胞凋亡还未明确。本研究结果显示,过表达SOX7组肝癌Huh-7细胞在24 h、48 h和72 h的细胞活力均明显低于空白组,细胞凋亡率高于空白组,β-catenin和cyclin D1蛋白表达低于空白组,这与在其他肿瘤研究结果一致。

      肿瘤细胞增殖和凋亡不平衡是其发生发展的重要环节。caspase 3是可介导细胞凋亡的一类蛋白水解酶,是caspase家族中的关键效应酶,也是凋亡的执行者,其活化可使凋亡不可逆[16]。研究[17]显示,人正常组织及多种肿瘤组织中caspase 3广泛表达。caspase 3蛋白酶激活与肝癌凋亡密切相关[18]。多种肿瘤中Wnt/β-catenin信号功能亢进,可通过抑制caspase 3表达,进而使癌细胞增殖凋亡失衡[19]。本研究结果发现,过表达SOX7组Huh-7细胞剪切后的caspase 3表达明显高于空白组。ROS包括过氧化氢、羟自由基、脂过氧化自由基等,目前研究[20]显示ROS与细胞生长抑制、细胞凋亡间有密切关系,ROS水平变化可引起与肿瘤增殖凋亡有关的NF-κB、Wnt等信号通路变化,活化caspase 3,从而引起肿瘤细胞凋亡[20]。目前诱导ROS产生已作为引起细胞凋亡的机制之一。有研究[21]表明,ROS可诱导肝癌细胞凋亡。本研究结果显示,过表达SOX7组细胞ROS水平明显高于空白组。提示提高ROS水平可能是SOX7诱导肝癌细胞凋亡途径之一。

      综上所述,本研究将重组体pcDNA3.1-SOX7转染人肝癌Huh-7细胞,通过MTT法、流式细胞术、DCFH-DA法及Western blotting分别检测过表达SOX7对Huh-7细胞活力、凋亡、ROS水平及Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、cyclin D1和凋亡相关的cleaved-caspase 3蛋白表达的影响。发现过表达SOX7可明显抑制Huh-7细胞活力,诱导细胞凋亡,机制可能与提高细胞ROS水平及抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。提示SOX7可能是肝癌诊疗的靶点之一,值得进一步深入探究。

参考文献 (21)

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