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马齿苋提取物治疗大鼠口腔溃疡的疗效及其对细胞免疫、炎性因子的影响

欧江勇 郑丽明 王栋

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马齿苋提取物治疗大鼠口腔溃疡的疗效及其对细胞免疫、炎性因子的影响

    作者简介: 欧江勇(1983-), 男, 主治医师.
  • 基金项目:

    广东省东莞市社会科技发展(一般)项目 201750715035089

  • 中图分类号: R781.5

Efficacy of purslane extract in the treatment of oral ulcer, and its effects on cellular immunity and inflammatory factors in rats

  • CLC number: R781.5

  • 摘要: 目的观察马齿苋提取物治疗大鼠口腔溃疡的疗效,初步探讨其对大鼠细胞免疫、炎性因子的影响,以期为临床用药提供参考。方法采用抗原乳化液方法建立大鼠口腔溃疡模型,实验设有空白对照组、模型对照组(不给予药物处理)、口腔溃疡散组(6%口腔溃疡散混悬液涂抹)以及马齿苋提取物组(0.24 g/mL马齿苋水溶液灌胃),每组8只大鼠。观察各组大鼠口腔溃疡数目、持续时间以及治疗效果。比较各组大鼠的血清干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)水平以及T细胞亚群水平变化情况。结果各组大鼠口腔溃疡数目、持续时间差异均有统计学意义(P < 0.01),且马齿苋提取物组显著低于口腔溃疡散组和模型对照组(P < 0.05~P < 0.01),口腔溃疡散组显著低于模型对照组(P < 0.01和P < 0.05)。口腔溃疡散组小鼠治疗效果优于模型对照组,马齿苋提取物组小鼠治疗效果优于口腔溃疡散组与模型对照组(P < 0.05)。各组大鼠炎性因子水平差异均有统计学意义(P < 0.01),且血清IFN-γ水平,模型对照组显著低于空白对照组,口腔溃疡散组与马齿苋提取物组明显高于模型对照组,马齿苋提取物组高于口腔溃疡散组(P < 0.05~P < 0.01);血清TNF-α和IL-2水平,模型对照组较空白对照组明显升高,口腔溃疡散组、马齿苋提取物组低于模型对照组(P < 0.01),马齿苋提取物组与口腔溃疡散组间差异无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠T淋巴细胞亚群水平差异均有统计学意义(P < 0.01),且模型对照组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平显著低于空白对照组,CD8+水平显著高于空白对照组(P < 0.01);口腔溃疡散组与马齿苋提取液组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平均高于模型组,而CD8+均低于模型对照组(P < 0.05~P < 0.01),马齿苋提取液组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平均明显高于口腔溃疡散组(P < 0.05~P < 0.01)。结论马齿苋提取物可有效缩短大鼠溃疡持续时间,减少溃疡数目,提高溃疡治疗效率。其机制可能是通过增强机体免疫功能以治疗复合性口腔溃疡。
  • 表 1  各组口腔溃疡大鼠溃疡数目、持续时间比较(x±s)

    分组 n 持续时间/d 溃疡数目/个
    模型对照组 8 6.3±1.6 7.9±1.9
    口腔溃疡散组 8 4.7±1.3* 3.8±1.2**
    马齿苋提取物组 8 3.1±0.8**# 1.6±0.6**##
    F 12.56 45.35
    P <0.01 <0.01
    MS组内 1.630 1.803
    q检验:与模型对照组比较*P<0.05,**P<0.01;与口腔溃疡散组比较#P<0.05,##P<0.01
    下载: 导出CSV

    表 2  不同药物对大鼠口腔溃疡的治疗效果比较[n;百分率(%)]

    分组 n 痊愈 显效 无效 总有效率 Z P
    模型对照组 8 0(0.0) 0(0.0) 8(100.0) 0(0.0)
    口腔溃疡散组* 8 1(12.5) 4(50) 3(37.5) 5(62.5) 17.50 <0.01
    马齿苋提取物组# 8 5(62.5) 2(25) 1(12.5) 7(87.5)
    与模型对照组比较*P<0.05;与口腔溃疡散组比较#P<0.05
    下载: 导出CSV

    表 3  不同药物治疗后大鼠炎性因子水平比较(x±s;ng/L)

    分组 n IFN-γ TNF-α IL-2
    正常对照组 8 162.7±23.5 138.7±22.3 38.6±4.6
    模型对照组 8 94.6±21.2** 219.6±21.4** 61.3±3.7**
    口腔溃疡散组 8 124.1±16.3*## 152.5±13.8## 49.6±3.9**
    马齿苋提取物组 8 149.4±15.7##▲ 146.3±12.4## 47.4±2.8**##
    F 19.06 34.28 48.30
    P <0.01 <0.01 <0.01
    MS组内 378.468 324.863 14.475
    q检验:与正常对照组比较*P<0.05,**P<0.01;与模型对照组比较##P<0.01;与口腔溃疡散组比较▲P < 0.05
    下载: 导出CSV

    表 4  不同药物治疗后大鼠T淋巴细胞亚群水平比较(x±s;%)

    分组 n CD3+ CD4+ CD4+/CD8+ CD8+
    正常对照组 8 39.4±3.1 28.3±2.9 2.3±0.4 12.3±2.4
    模型对照组 8 24.3±3.5** 19.6±4.4** 1.1±0.2** 18.7±3.5**
    口腔溃疡散组 8 29.1±6.2** 23.5±3.8*# 1.5±0.3**# 15.5±2.3#
    马齿苋提取物组 8 36.4±5.7##▲▲ 27.3±2.1##▲ 2.2±0.4##▲▲ 13.1±1.4##
    F 16.26 10.79 23.41 10.47
    P <0.01 <0.01 <0.01 <0.01
    MS组内 23.198 11.655 0.113 6.315
    q检验:与正常对照组比较*P<0.05,**P<0.01;与模型对照组比较#P<0.05,##P<0.01;与口腔溃疡散组比较▲P < 0.05,▲▲P < 0.01
    下载: 导出CSV
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出版历程
  • 收稿日期:  2018-08-08
  • 录用日期:  2019-07-05
  • 刊出日期:  2019-07-15

马齿苋提取物治疗大鼠口腔溃疡的疗效及其对细胞免疫、炎性因子的影响

    作者简介: 欧江勇(1983-), 男, 主治医师
  • 广东省东莞市常平医院 口腔科, 523573
基金项目:  广东省东莞市社会科技发展(一般)项目 201750715035089

摘要: 目的观察马齿苋提取物治疗大鼠口腔溃疡的疗效,初步探讨其对大鼠细胞免疫、炎性因子的影响,以期为临床用药提供参考。方法采用抗原乳化液方法建立大鼠口腔溃疡模型,实验设有空白对照组、模型对照组(不给予药物处理)、口腔溃疡散组(6%口腔溃疡散混悬液涂抹)以及马齿苋提取物组(0.24 g/mL马齿苋水溶液灌胃),每组8只大鼠。观察各组大鼠口腔溃疡数目、持续时间以及治疗效果。比较各组大鼠的血清干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)水平以及T细胞亚群水平变化情况。结果各组大鼠口腔溃疡数目、持续时间差异均有统计学意义(P < 0.01),且马齿苋提取物组显著低于口腔溃疡散组和模型对照组(P < 0.05~P < 0.01),口腔溃疡散组显著低于模型对照组(P < 0.01和P < 0.05)。口腔溃疡散组小鼠治疗效果优于模型对照组,马齿苋提取物组小鼠治疗效果优于口腔溃疡散组与模型对照组(P < 0.05)。各组大鼠炎性因子水平差异均有统计学意义(P < 0.01),且血清IFN-γ水平,模型对照组显著低于空白对照组,口腔溃疡散组与马齿苋提取物组明显高于模型对照组,马齿苋提取物组高于口腔溃疡散组(P < 0.05~P < 0.01);血清TNF-α和IL-2水平,模型对照组较空白对照组明显升高,口腔溃疡散组、马齿苋提取物组低于模型对照组(P < 0.01),马齿苋提取物组与口腔溃疡散组间差异无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠T淋巴细胞亚群水平差异均有统计学意义(P < 0.01),且模型对照组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平显著低于空白对照组,CD8+水平显著高于空白对照组(P < 0.01);口腔溃疡散组与马齿苋提取液组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平均高于模型组,而CD8+均低于模型对照组(P < 0.05~P < 0.01),马齿苋提取液组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平均明显高于口腔溃疡散组(P < 0.05~P < 0.01)。结论马齿苋提取物可有效缩短大鼠溃疡持续时间,减少溃疡数目,提高溃疡治疗效率。其机制可能是通过增强机体免疫功能以治疗复合性口腔溃疡。

English Abstract

  • 复发性口腔溃疡(recurrent oral ulcer, ROU)是常见的口腔损伤性疾病,调查[1]显示人群中10%~25%患有此病,且女性好发于男性。ROU临床表现主要有剧烈疼痛、灼热难忍等,对病人生活造成了极大的困扰。免疫功能低下的病人,一旦患有口腔溃疡,往往反复发作,病期延长[2]。ROU的发病机制错综复杂,目前临床上尚无统一定论,但有研究[3]显示,免疫因素尤其是T细胞免疫在ROU的发生中有着重要作用。还有研究[4-5]表明,在ROU发病过程中,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)异常释放,而TNF-α具有调节免疫的功能,其异常释放可致病人发生口腔溃疡。目前临床上主要采取中医、西医加饮食调理等对症治疗的方法。近年来,有研究[6]报道,马齿苋在治疗ROU方面具有一定疗效。马齿苋为一年生肉质草本植物,我国各地均产,为药食两用植物,其营养丰富。中药马齿苋具有清热解毒、散血消肿、止血凉血、杀菌抗炎等功效。现代药理学研究[7-9]表明,马齿苋能够增强组织修复,促进溃疡愈合,此外,还可降低血糖浓度,增强抗炎、抗菌能力,提高机体免疫力等。鉴于此,本研究通过观察马齿苋提取物治疗大鼠口腔溃疡的疗效,初步探讨其对大鼠细胞免疫、炎性因子的影响,以期为临床用药提供参考。

    • 清洁级雄性成年SD大鼠,质量(260±28) g,由广东医学动物实验中心提供,用全价饲料喂养,自由饮水,室温(20±2)℃,合格证:44007200042896。

    • 马齿苋提取物(陕西中医学院附属医院中药房提供),水煎成浓度约为0.24 g/mL的马齿苋水溶液,置于4 ℃保存待用。口腔溃疡散(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂,国药准字Z11020184),用蒸馏水制备成浓度为6%的悬浮液,置于4 ℃保存待用。白细胞介素-2(IL-2)、TNF-α、干扰素-γ(IFN-γ) ELISA试剂盒(上海江莱生物科技有限公司);完全弗氏佐剂(sigma,9007-81-2);PBS缓冲液;0.9%氯化钠溶液。

    • 高速离心机(美国赛默飞公司);MODEL-550型酶标仪(美国bio rad公司);BD FACSCalibur型全自动分析流式细胞仪(山东莱索科技有限公司)。

    • 参照文献[10]报道制备大鼠口腔溃疡模型。采集口腔黏膜:将5只雄性SD大鼠拉颈处死,剥取口腔黏膜层,并将其剪碎进行组织匀浆,放置于-70 ℃冰箱保存待用;制备抗原乳化液:取一定量的组织匀浆和完全弗氏佐剂分别装于容器中,充分混合形成抗原乳化剂,且放置后不出现分层现象;模型制备:在大鼠脊柱两侧分别皮下注射0.1 mL的抗原乳化液,每2周注射1次,累计共5次。

    • 取32只SD大鼠进行实验研究,随机选取8只作为正常对照组,其余24只大鼠按上述方法制备口腔溃疡大鼠模型。模型成功后,随机分为模型对照组、口腔溃疡散组和马齿苋提取物组,每组大鼠8只。其中正常对照组和模型对照组不给予药物处理,正常饲养;口腔溃疡散组利用消毒棉签涂抹1 mL的口腔溃疡散混悬液(6%),1次/天,连续给药7 d;马齿苋提取物组给予灌胃4 mL的马齿苋水溶液(0.24 g/mL),1次/天,连续给药7 d。观察大鼠症状体征变化,第14天处死大鼠,并取血样进行测定。

    • (1) 观察各组大鼠口腔溃疡数目、持续时间。(2)对各组大鼠治疗后的疗效评价,痊愈:治疗后,口腔溃疡面完全愈合;显效:治疗后,口腔溃疡面显著缩小>2/3,局部红肿消退;无效:治疗后,口腔溃疡面及症状均未改善;将痊愈、显效归纳为总有效率。(3)采用ELISA法和MODEL-550酶标仪测定血清IFN-γ、TNF-α和IL-2水平。(4)采用BD FACSCalibur型全自动分析流式细胞仪测定大鼠T淋巴细胞亚群。

    • 采用方差分析、q检验和χ2检验。

    • 各组大鼠口腔溃疡数目、持续时间差异均有统计学意义(P < 0.01),且马齿苋提取物组大鼠的口腔溃疡数目及持续时间显著低于口腔溃疡散组和模型对照组(P < 0.05~P < 0.01),口腔溃疡散组显著低于模型对照组(P < 0.01和P < 0.05)(见表 1)。

      分组 n 持续时间/d 溃疡数目/个
      模型对照组 8 6.3±1.6 7.9±1.9
      口腔溃疡散组 8 4.7±1.3* 3.8±1.2**
      马齿苋提取物组 8 3.1±0.8**# 1.6±0.6**##
      F 12.56 45.35
      P <0.01 <0.01
      MS组内 1.630 1.803
      q检验:与模型对照组比较*P<0.05,**P<0.01;与口腔溃疡散组比较#P<0.05,##P<0.01

      表 1  各组口腔溃疡大鼠溃疡数目、持续时间比较(x±s)

    • 马齿苋提取物组小鼠治疗效果优于口腔溃疡散组与模型对照组,口腔溃疡散组小鼠临床效果优于模型对照组(P < 0.05) (见表 2)。

      分组 n 痊愈 显效 无效 总有效率 Z P
      模型对照组 8 0(0.0) 0(0.0) 8(100.0) 0(0.0)
      口腔溃疡散组* 8 1(12.5) 4(50) 3(37.5) 5(62.5) 17.50 <0.01
      马齿苋提取物组# 8 5(62.5) 2(25) 1(12.5) 7(87.5)
      与模型对照组比较*P<0.05;与口腔溃疡散组比较#P<0.05

      表 2  不同药物对大鼠口腔溃疡的治疗效果比较[n;百分率(%)]

    • 各组大鼠炎性因子水平差异均有统计学意义(P < 0.01),且血清IFN-γ水平,模型对照组水平显著低于空白对照组,口腔溃疡散组与马齿苋提取物组明显高于模型对照组,马齿苋提取物组高于口腔溃疡散组(P < 0.05~P < 0.01)。血清TNF-α和IL-2水平,模型对照组较空白对照组明显升高,口腔溃疡散组、马齿苋提取物组低于模型对照组(P < 0.01),马齿苋提取物组与口腔溃疡散组间差异无统计学意义(P>0.05)(见表 3)

      分组 n IFN-γ TNF-α IL-2
      正常对照组 8 162.7±23.5 138.7±22.3 38.6±4.6
      模型对照组 8 94.6±21.2** 219.6±21.4** 61.3±3.7**
      口腔溃疡散组 8 124.1±16.3*## 152.5±13.8## 49.6±3.9**
      马齿苋提取物组 8 149.4±15.7##▲ 146.3±12.4## 47.4±2.8**##
      F 19.06 34.28 48.30
      P <0.01 <0.01 <0.01
      MS组内 378.468 324.863 14.475
      q检验:与正常对照组比较*P<0.05,**P<0.01;与模型对照组比较##P<0.01;与口腔溃疡散组比较▲P < 0.05

      表 3  不同药物治疗后大鼠炎性因子水平比较(x±s;ng/L)

    • 各组大鼠T淋巴细胞亚群水平差异均有统计学意义(P < 0.01),且模型对照组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平显著低于空白对照组,CD8+水平显著高于空白对照组(P < 0.01);口腔溃疡散组与马齿苋提取液组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平均高于模型组,而CD8+均低于模型对照组(P < 0.05~P < 0.01),马齿苋提取液组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平均明显高于口腔溃疡散组(P < 0.05~P < 0.01) (见表 4)。

      分组 n CD3+ CD4+ CD4+/CD8+ CD8+
      正常对照组 8 39.4±3.1 28.3±2.9 2.3±0.4 12.3±2.4
      模型对照组 8 24.3±3.5** 19.6±4.4** 1.1±0.2** 18.7±3.5**
      口腔溃疡散组 8 29.1±6.2** 23.5±3.8*# 1.5±0.3**# 15.5±2.3#
      马齿苋提取物组 8 36.4±5.7##▲▲ 27.3±2.1##▲ 2.2±0.4##▲▲ 13.1±1.4##
      F 16.26 10.79 23.41 10.47
      P <0.01 <0.01 <0.01 <0.01
      MS组内 23.198 11.655 0.113 6.315
      q检验:与正常对照组比较*P<0.05,**P<0.01;与模型对照组比较#P<0.05,##P<0.01;与口腔溃疡散组比较▲P < 0.05,▲▲P < 0.01

      表 4  不同药物治疗后大鼠T淋巴细胞亚群水平比较(x±s;%)

    • ROU是一种反复性发作的疾病,且国内外均无根治ROU的特效疗法,均主要采取对症治疗,促进溃疡愈合、延长间歇期[11-12]。有文献[13]报道,血清炎性因子IFN-γ、TNF-α和IL-2在ROU的发生中扮演着至关重要的角色。其中IFN-γ具有抗病毒、抗肿瘤以及调节免疫的作用。而TNF-α能够促进机体IL-2、IL-6、IL-10等多种炎性因子的分泌,造成炎性损伤。此外TNF-α具有趋化作用,能够促使巨噬细胞释放多种趋化因子,导致黏膜损伤[14]。研究[15]显示,ROU的发生可能与TNF-α介导的炎性反应有密切关系。国外学者[16-17]研究指出,ROU是一种自身免疫性疾病,在病发部位存在大量T淋巴细胞浸润。马晓喆等[18]研究发现,ROU病人普遍炎性因子分泌异常、免疫功能低下。因此,在治疗ROU中,监测病人炎性因子水平(如IFN-γ、TNF-α和IL-2等)及T细胞亚群水平的变化具有现实意义,可为改进ROU的治疗方案提供参考。

      本研究结果显示,治疗后,口腔溃疡散和马齿苋提取物均可显著缩短溃疡的持续时间,减少溃疡数目,提高治疗有效率,且马齿苋提取物组治疗效果要显著优于口腔溃疡散组。口腔溃疡散属于中药制剂,主要成分为青黛、白矾、冰片。中医认为口腔溃疡属于“口疮”“口糜”范畴,临床治疗主要以清热解毒、敛疮为原则。口腔溃疡散广泛应用于治疗口腔溃疡的反复发作,但临床经验发现,其长期治疗效果较差,病人口腔溃疡易反复发作[19-20]。中医认为马齿苋具有清热解毒、利水去湿、消炎止痛、除尘杀菌的功效。现代药理学研究显示,马齿苋能够控制炎性因子异常释放,抑制变态反应,提高机体免疫力,从而促进溃疡愈合[21]。本研究结果显示,治疗后,口腔溃疡散和马齿苋提取物均可使口腔溃疡大鼠的血清TNF-α和IL-2水平明显下降,使IFN-γ水平明显升高,且马齿苋提取物效果更为显著;且口腔溃疡散和马齿苋提取物均可使口腔溃疡大鼠的CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平明显升高,使CD8+水平降低,马齿苋提取物效果更为显著。结果表明,应用马齿苋提取物治疗ROU,可降低口腔溃疡大鼠的血清炎性因子水平,且可以在一定程度上改善机体免疫功能,从而提高治疗效果。

      综上所述,马齿苋提取物可有效降低ROU大鼠血清中IL-2、TNF-α水平,升高IFN-γ水平,改善T细胞亚群比例,从而增强机体免疫功能,最终达到治疗ROU的作用,疗效显著,但远期疗效有待进一步研究。

参考文献 (21)

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