-
近年，环状RNA为一种新出现的非编码RNA被人们重视，它们在多种肿瘤中有特异性表达，可以作为一种新的生物标志物对肿瘤进行诊断[1-2]。尽管环状RNA在多种疾病中起到关键作用，如卵巢癌、结直肠癌、特发性肺纤维化等[3]，但在很多癌症中的表达机制和作用尚不清楚。本研究旨在探讨环状RNA circ_100290在结直肠癌中的表达及其临床意义，现作报道。
-
收集本院2010-2018年根治性结直肠癌切除标本共134例，每例标本包括肿瘤组织及癌旁正常结直肠组织(距离肿瘤组织边缘2 cm以上)。所有病例术前均未接受放疗、化疗等治疗。新鲜组织标本离体后30 min内放入液氮速冻，后转入-80 ℃冰箱保存。所有结直肠癌病例均有病理学诊断证实，其中男82例，女52例，年龄(53.26±8.38)岁。所有病人均具有完整的随访资料。病人已签署由医院伦理委员会批准的病人知情同意书，符合医学伦理学规定。
-
Trizol法提取来自结直肠癌及癌旁正常结直肠组织总RNA，以提取的总RNA为模板，逆转录cDNA，反应体系为70 ℃，保温10 min后迅速在冰上冷却2 min，42 ℃ 60 s，72 ℃ 15 s。按照qRT-PCR试剂盒SYBR Green法进行扩增，扩增45个循环周期，每个标本3个复孔。人环状RNA circ_100290引物序列为上游：5′- TAT GTT GGT GGA TCC TGT TCG GCA-3′，下游5′- TGG TGG GTA GAC CAA GAC TTG TGA-3′。使用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内部对照, 人GAPDH引物序列为上游：5′-TTG TTA CAG GAA GTC CCT TGC C-3′，下游5′-ATG CTA TCA CCT CCC CTG TGT G-3′。使用2-ΔΔCt法计算相对表达量。
-
采用t检验、χ2检验、Kaplan-Meier分析和Cox回归(比例风险模型)。
-
qRT-PCR检测结果发现：人环状RNA circ_100290在结直肠癌组织中的相对表达量为3.15±0.14，高于人环状RNA circ_100290在对应结直肠癌旁组织中的相对表达量0.98±0.03(t=175.44，P < 0.01)。
-
circ_100290表达量与临床病理特征的相关性 将结直肠癌组织中人环状RNA circ_100290表达量取中位数分为高表达组与低表达组，人环状RNA circ_100290高表达与淋巴结转移、远处转移和TNM分期有关(P < 0.05~P < 0.01)，与性别、年龄、肿瘤大小、血管浸润和分化程度无关(见表 1)。
临床
病理特征n circ_100290表达量 χ2 P 低表达 高表达 年龄/岁 >60 59 30 29 0.30 >0.05 ≤60 75 37 38 性别 女 52 27 25 0.13 >0.05 男 82 40 42 肿瘤大小/cm >5 60 28 32 0.48 >0.05 ≤5 74 39 35 淋巴结转移 无 63 41 22 10.81 < 0.01 有 71 26 45 血管浸润 无 110 57 53 0.81 >0.05 有 24 10 14 远处转移 无 56 34 22 4.42 < 0.05 有 78 33 45 分化程度 高中分化 67 30 37 1.46 >0.05 低分化 67 37 30 TNM分期 Ⅰ~Ⅱ 80 45 35 3.89 < 0.05 Ⅲ~Ⅳ 54 21 33 表 1 结直肠癌组织人环状RNA circ_100290表达与临床病理特征的相关性
-
在随访期间，134例结直肠癌病人中有39例死亡(25例来自人环状RNA circ_100290高表达组，14例来自人环状RNA circ_100290低表达组)。Kaplan-Meier分析结果发现，与人环状RNA circ_100290表达低的病人相比，人环状RNA circ_100290高表达的病人总生存的平均时间更短(P < 0.05)(见图 1)。
图 1 结直肠癌病人人环状RNA eire_ 100290表达水平与临床预后之间的关联
-
单变量和多变量Cox比例风险回归模型分析结果均表明，人环状RNA circ_100290表达水平、淋巴结转移、远处转移和TNM分期与结直肠癌病人的总生存率相关(P < 0.05~P < 0.01)(见表 2)。
变量 单变量分析 多变量分析 HR 95%CI P HR 95%CI P 年龄 1.214 0.655~2.825 >0.05 1.316 0.592~2.661 >0.05 性别 1.304 0.805~2.135 >0.05 1.427 0.561~2.944 >0.05 肿瘤大小 1.814 0.528~3.234 >0.05 1.739 0.623~3.234 >0.05 淋巴结转移 3.251 1.541~5.734 < 0.01 2.958 1.268~4.884 < 0.05 血管浸润 1.645 0.815~2.845 >0.05 1.563 0.863~2.375 >0.05 远处转移 2.986 0.715~4.741 < 0.05 2.745 1.621~4.255 < 0.05 分化程度 2.974 0.654~4.665 >0.05 2.268 0.378~3.254 >0.05 TNM分期 2.384 1.323~4.356 < 0.05 2.698 1.521~3.985 < 0.05 circ_100290 3.553 1.474~6.841 < 0.05 3.298 1.531~5.515 < 0.05 表 2 Cox比例风险回归模型进行单变量和多变量回归分析
-
结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，占全球癌症发病率近10%，且死亡率高[4]。虽然结直肠癌的治疗手段取得一定的进展，但是由于难以早期诊断而错过最佳治疗时间，结直肠癌病人生存率仍然很低。因此，寻找理想的生物标志物和治疗靶点来提高结直肠癌的诊疗水平是很有价值的。
环状RNA是一种新型的RNA分子，主要通过反式剪接使3′端与5′端以共价键相连接而形成[5]。虽然环状RNA在二十余年前就已有报道[6]，但这种分子大多被认为是错误剪接的副产品[7-8]。随着新兴的生物信息学方法和深度测序等技术的发展，真核细胞中大量的环状RNA被发现。最近的研究主要发现了3种环状RNA：外显子环状RNA，环状内含子RNA和被保留内含子环状RNA[8-10]。随着生物信息学方法和测序技术的发展，大量的环状RNA被发现。越来越多的研究发现环状RNA在结直肠癌的发生发展中起重要作用。例如，环状RNA circ_ITGA7在结直肠癌中低表达，抑制结直肠癌增殖和转移[11]。YUAN等[12]报道环状RNA circ_0026344通过竞争性吸附microRNA-21抑制结直肠癌进展。ZENG等[13]发现环状RNA circ_HIPK3通过竞争性吸附microRNA-7促进结直肠癌增殖和转移。ZHANG等[14]研究表明环状RNA circ_0020397通过抑制PD-1和TERT表达促进结直肠癌发生发展。CHEN等[15]研究发现环状RNA circ_100290在口腔癌中高表达，促进口腔癌增殖和转移。然而，环状RNA circ_100290在结直肠癌中的表达及其临床意义仍不清楚。
在本研究中，我们观察到，与邻近的正常癌旁结肠组织相比，人环状RNA circ_100290在结直肠癌组织中表达上调。进一步检查发现结直肠癌组织人环状RNA circ_100290高表达与淋巴结转移、远处转移和TNM分期密切相关。为了探索结直肠癌病人中人环状RNA circ_100290的表达水平与预后的相关性，我们通过Kaplan-Meier分析，明确人环状RNA circ_100290表达水平与总体生存率之间的存在关联。结果显示，人环状RNA circ_100290高表达的结直肠癌病人总体生存率显著降低。进一步通过单变量Cox比例风险回归模型分析，结果表明人环状RNA circ_100290表达水平、淋巴结转移、远处转移和TNM分期与结直肠癌病人的总生存率相关。最后，通过多变量分析发现人环状RNAcirc_100290高表达是结直肠癌病人的独立预后不良因素。
综上所述，人环状RNAcirc_100290在结直肠癌的发生发展中起重要作用。人环状RNAcirc_100290高表达与结直肠癌转移和预后相关。因此，人环状RNAcirc_100290可以作为预测结直肠癌病人预后的潜在生物标志物。
环状RNA circ_100290在结直肠癌中的表达及其临床意义
Expression of circ_100290 in colorectal cancer and its clinical significance
-
摘要:
目的探讨环状RNA circ_100290在结直肠癌病人中的表达，及其与临床病理特征及预后的关系。 方法实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测结直肠癌及其癌旁正常组织中环状RNA circ_100290的表达量。分析环状RNA circ_100290的表达差异与临床资料及病例特征的关系。生存曲线分析环状RNA circ_100290的表达差异与临床预后的相关性。Cox比例风险回归模型进行单变量和多变量回归分析。 结果环状RNA circ_100290在结直肠癌组织中的相对表达水平高于癌旁肠正常组织（P < 0.01）。环状RNA circ_100290高表达与与淋巴结转移、远处转移、TNM分期有关（P < .05~P < 0.01）。生存曲线分析显示，与人环状RNA circ_100290表达低的病人相比，高表达的病人总生存的平均时间更短（P < 0.05）；单变量与多变量Cox比例风险回归模型分析均显示，环状RNA circ_100290表达水平、淋巴结转移、远处转移和TNM分期与结肠癌病人的总生存率均有关系（P < 0.05~P < 0.01）。 结论环状RNA circ_100290高表达与结直肠癌转移和预后相关。因此，环状RNA circ_100290可以作为预测结肠癌病人预后的潜在生物标志物。 -
关键词:
- 结直肠肿瘤 /
- 环状RNA /
- circ_100290 /
- 预后
Abstract:ObjectiveTo investigate the expression level of circular RNA circ_100290 in colorectal cancer patients, and its correlation with clinicopathological features of colorectal cancer and prognosis. MethodsThe expression levels of circ_100290 in colorectal cancer tissue and normal tissue adjacent to cancer were detected using qRT-PCR.The relationship between circ_100290 expression level, and clinical data and case characteristics were analyzed.The correlation between circ_100290 expression level and clinical prognosis was analyzed using survival curve analysis.The Cox proportional hazard regression model was used for univariate and multivariate regression analysis. ResultsThe expression level of circ_100290 in colorectal cancer tissue was higher than that in normal tissue(P < 0.01), and the high expression of circ_100290 was related to the lymph node metastasis, distant metastasis and TNM stage(P < 0.05 to P < 0.01).The results of Kaplan-Meier survival analysis showed that the total mean survival time in patients with high circ_100290 expression was shorter than that in patients with low circ_100290 expression(P < 0.05).The results of univariate Cox proportional hazards regression model analysis indicated that the expression level of circ_100290, lymph node metastasis, distant metastasis and TNM stage were correlated with the overall survival rate of colorectal cancer patients(P < 0.05 to P < 0.01). ConclusionsThe high expression of circ_100290 is related to the colorectal cancer metastasis and prognosis.The circ_100290 may serve as a promising biomarker in predicting the prognosis of colorectal cancer. -
Key words:
- colorectal neoplasms /
- circular RNA /
- circ_100290 /
- prognosis
-
表 1 结直肠癌组织人环状RNA circ_100290表达与临床病理特征的相关性
临床
病理特征n circ_100290表达量 χ2 P 低表达 高表达 年龄/岁 >60 59 30 29 0.30 >0.05 ≤60 75 37 38 性别 女 52 27 25 0.13 >0.05 男 82 40 42 肿瘤大小/cm >5 60 28 32 0.48 >0.05 ≤5 74 39 35 淋巴结转移 无 63 41 22 10.81 < 0.01 有 71 26 45 血管浸润 无 110 57 53 0.81 >0.05 有 24 10 14 远处转移 无 56 34 22 4.42 < 0.05 有 78 33 45 分化程度 高中分化 67 30 37 1.46 >0.05 低分化 67 37 30 TNM分期 Ⅰ~Ⅱ 80 45 35 3.89 < 0.05 Ⅲ~Ⅳ 54 21 33 
下载: 导出CSV
表 2 Cox比例风险回归模型进行单变量和多变量回归分析
变量 单变量分析 多变量分析 HR 95%CI P HR 95%CI P 年龄 1.214 0.655~2.825 >0.05 1.316 0.592~2.661 >0.05 性别 1.304 0.805~2.135 >0.05 1.427 0.561~2.944 >0.05 肿瘤大小 1.814 0.528~3.234 >0.05 1.739 0.623~3.234 >0.05 淋巴结转移 3.251 1.541~5.734 < 0.01 2.958 1.268~4.884 < 0.05 血管浸润 1.645 0.815~2.845 >0.05 1.563 0.863~2.375 >0.05 远处转移 2.986 0.715~4.741 < 0.05 2.745 1.621~4.255 < 0.05 分化程度 2.974 0.654~4.665 >0.05 2.268 0.378~3.254 >0.05 TNM分期 2.384 1.323~4.356 < 0.05 2.698 1.521~3.985 < 0.05 circ_100290 3.553 1.474~6.841 < 0.05 3.298 1.531~5.515 < 0.05
下载: 导出CSV
-
[1] SALZMAN J.Circular RNA expression:its potential regulation and function[J].Trends Genet, 2016, 32(5):309. doi: 10.1016/j.tig.2016.03.002 [2] ABU N, JAMAL R.Circular RNAs as promising biomarkers:a mini-review[J].Front Physiol, 2016, 7:355. [3] BACHMAYR-HEYDA A, REINER A, AUER K, et al.Correlation of circular RNA abundance with proliferation-exemplified with colorectal and ovarian cancer, idiopathic lung fibrosis, and normal human tissues[J].Sci Rep, 2015, 5:8057. doi: 10.1038/srep08057 [4] FERLAY J, STELIAROVA-FOUCHER E, LORTET-TIEULENT J, et al.Cancer incidence and mortality patterns in Europe:estimates for 40 countries in 2012[J].Eur J Cancer, 2013, 49(6):1374. doi: 10.1016/j.ejca.2012.12.027 [5] HENTZE MW, PREISS T.Circular RNAs:splicing's enigma variations[J].EMBO J, 2013, 32(7):923. doi: 10.1038/emboj.2013.53 [6] NIGRO JM, CHO KR, FEARON ER, et al.Scrambled exons[J].Cell, 1991, 64(3):607. doi: 10.1016/0092-8674(91)90244-S [7] COCQUERELLE C, MASCREZ B, HETUIN D, et al.Mis-splicing yields circular RNA molecules[J].FASEB J, 1993, 7(1):155. doi: 10.1096/fasebj.7.1.7678559 [8] DANAN M, SCHWARTZ S, EDELHEIT S, et al.Transcriptome-wide discovery of circular RNAs in Archaea[J].Nucleic Acids Res, 2011, 40(7):3131. [9] SALZMAN J, GAWAD C, WANG PL, et al.Circular RNAs are the predominant transcript isoform from hundreds of human genes in diverse cell types[J].PLoS One, 2012, 7(2):e30733. doi: 10.1371/journal.pone.0030733 [10] ZHANG Y, ZHANG XO, CHEN T, et al.Circular intronic long noncoding RNAs[J].Mol Cell, 2013, 51(6):792. doi: 10.1016/j.molcel.2013.08.017 [11] LI X, WANG J, ZHANG C, et al.Circular RNA circITGA7 inhibits colorectal cancer growth and metastasis by modulating the Ras pathway and upregulating transcription of its host gene ITGA7[J].J Pathol, 2018, 246(2):166. doi: 10.1002/path.5125 [12] YUAN Y, LIU W, ZHANG Y, et al.CircRNA circ_0026344 as a prognostic biomarker suppresses colorectal cancer progression via microRNA-21 and microRNA-31[J].Biochem Biophys Res Commun, 2018, 503(2):870. doi: 10.1016/j.bbrc.2018.06.089 [13] ZENG K, CHEN X, XU M, et al.CircHIPK3 promotes colorectal cancer growth and metastasis by sponging miR-7[J].Cell Death Dis, 2018, 9(4):417. doi: 10.1038/s41419-018-0454-8 [14] ZHANG X, XU L, WANG F.Hsa_circ_0020397 regulates colorectal cancer cell viability, apoptosis and invasion by promoting the expression of the miR-138 targets TERT and PD-L1[J].Cell Biol Int, 2017, 41(9):1056. doi: 10.1002/cbin.10826 [15] CHEN L, ZHANG S, WU J, et al.circRNA_100290 plays a role in oral cancer by functioning as a sponge of the miR-29 family[J].Oncogene, 2017, 36(32):4551. doi: 10.1038/onc.2017.89 -
点击查看大图
图(1)表(2)
计量
- 文章访问数: 4852
- HTML全文浏览量: 2214
- PDF下载量: 12
- 被引次数: 0
