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BRAFV600E基因突变与甲状腺乳头状癌中央区淋巴结转移的关系

于婧 王凤琴 姚文娟 吴冬梅 张伟强 王勤增 庞嗣裔

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BRAFV600E基因突变与甲状腺乳头状癌中央区淋巴结转移的关系

    作者简介: 于婧(1985-), 女, 硕士, 主治医师
  • 中图分类号: R736.1

Study on the relationship between BRAFV600E mutation and central lymph node metastasis of papillary thyroid carcinoma

  • CLC number: R736.1

  • 摘要: 目的分析BRAFV600E基因突变与甲状腺乳头状癌(PTC)中央区淋巴结(CLN)转移的关系,探讨CLN转移的危险因素。方法检测104例PTC病例BRAFV600E基因突变情况,分析该突变与PTC临床病理特征、超声特征的关系,单因素及多因素分析CLN转移的危险因素。结果BRAFV600E基因突变与肿瘤最大径、肿瘤钙化、被膜外侵犯及CLN转移相关(P < 0.01),BRAFV600E基因突变和被膜外侵犯是CLN转移的独立因素(P < 0.01)。结论BRAFV600E基因突变可为PTC手术CLN清扫提供基因依据。
  • 表 1  104例PTC病人临床病理参数

    因素 分组 n 百分比/%
    性别
    35 33.7
    69 66.3
    年龄/岁
    < 45 55 52.9
    ≥45 49 47.1
    肿瘤最大径/cm
    ≤1 29 27.9
    1.1~2 27 26.0
    2.1~4 33 31.7
    >4 15 14.4
    肿瘤多灶性
    单灶 75 72.1
    多灶 29 27.9
    被膜外侵犯
    44 42.3
    60 57.7
    超声回声性质
    高/中回声 38 36.5
    低回声 66 63.5
    钙化
    59 56.7
    45 43.3
    边界
    界清 46 44.2
    不清 58 55.8
    CLN转移
    50 48.1
    54 51.9
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    表 2  PTC BRAFV600E基因突变与临床病理特征的关系[n; 构成比(%)]

    分组 n 肿瘤多灶性 被膜外侵犯 超声回声性质 钙化 边界 CLN转移
    单灶 多灶 高中 界清 不清
    BRAFV600E基因突变(+) 67 21(31.3) 46(68.7) 48(71.6) 19(28.4) 41(61.2) 26(38.8) 38(56.7) 29(43.3) 46(68.7) 21(31.3) 36(53.7) 31(46.3) 17(25.4) 50(74.6)
    BRAFV600E基因突变(-) 37 14(37.8) 23(62.2) 27(73.0) 10(27.0) 3(8.1) 34(91.9) 28(75.7) 9(24.3) 13(35.1) 24(64.9) 22(59.5) 15(40.5) 4(10.8) 33(89.2)
    χ2 0.45 0.02 27.52 3.69 10.91 10.91 38.89
    P >0.05 >0.05 < 0.01 >0.05 < 0.01 >0.05 < 0.01
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    表 3  PTC CLN转移危险因素分析[n;构成比(%)]

    分组 n 肿瘤多灶性 被膜外侵犯 超声回声性质 钙化 边界 BRAFV600E突变
    单灶 多灶 高中 界清 不清 + -
    CLN有转移 54 19(35.2) 35(64.8) 38(70.4) 16(29.6) 39(72.2) 15(27.8) 35(64.8) 19(35.2) 37(68.5) 17(31.5) 30(55.6) 24(44.4) 50(92.6) 4(7.4)
    CLN无转移 50 16(32.0) 34(68.0) 37(74.0) 13(26.0) 5(10.0) 45(90.0) 31(62.0) 19(38.0) 22(44.0) 28(56.0) 28(56.0) 22(44.0) 17(34.0) 33(66.0)
    χ2 0.12 0.17 41.18 0.09 6.36 0.00 38.89
    P >0.05 >0.05 < 0.01 >0.05 < 0.05 >0.05 < 0.01
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    表 4  PTC CLN转移的多因素logistic回归分析

    自变量 B SE Waldχ2 P OR(95%CI)
    钙化 1.080 0.659 2.686 >0.05 2.944(0.809~10.712)
    被膜外侵犯 2.770 0.673 16.940 < 0.01 15.965(4.268~59.722)
    BRAFV600E突变 2.100 0.687 9.361 < 0.01 8.170(2.127~31.376)
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出版历程
  • 收稿日期:  2019-06-03
  • 录用日期:  2019-12-19
  • 刊出日期:  2020-04-15

BRAFV600E基因突变与甲状腺乳头状癌中央区淋巴结转移的关系

    作者简介: 于婧(1985-), 女, 硕士, 主治医师
  • 1. 河北中石油中心医院 病理科, 河北 廊坊 065000
  • 2. 河北省廊坊市中医医院 病理科, 065000

摘要: 目的分析BRAFV600E基因突变与甲状腺乳头状癌(PTC)中央区淋巴结(CLN)转移的关系,探讨CLN转移的危险因素。方法检测104例PTC病例BRAFV600E基因突变情况,分析该突变与PTC临床病理特征、超声特征的关系,单因素及多因素分析CLN转移的危险因素。结果BRAFV600E基因突变与肿瘤最大径、肿瘤钙化、被膜外侵犯及CLN转移相关(P < 0.01),BRAFV600E基因突变和被膜外侵犯是CLN转移的独立因素(P < 0.01)。结论BRAFV600E基因突变可为PTC手术CLN清扫提供基因依据。

English Abstract

  • 甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)发病率逐年上升,近十年我国已达到10.16/10万人[1],其中央区淋巴结(central lymph node,CLN)为淋巴结转移的第1站,转移率42.4%~68.2%[2-4],目前对术前查体和/或彩超检查没有颈部可疑淋巴结转移的cN0病例是否进行预防性CLN清扫仍无合理指标和预测模型。文献报道BRAFV600E基因突变是PTC最常见的分子遗传学事件,该突变与肿瘤侵袭能力强,易淋巴结转移等不良预后相关[5-6]。本研究通过检测104例PTC组织的BRAFV600E基因突变情况,分析BRAFV600E基因突变及临床病理特征、超声特征与CLN转移的关系,预测CLN转移的危险因素,为PTC手术CLN的清扫提供相关依据。

    • 收集河北中石油中心医院2017年1月至2018年7月行甲状腺切除手术并CLN清扫,经病理确诊的PTC病例104例,均为初治病例,术前未行外照射、131I治疗、化学治疗等其他辅助治疗;病理切片经2名病理医生双盲法复阅并明确诊断。记录病人年龄、性别、术前超声特征(结节回声性质、肿瘤边缘是否规则、是否有微小钙化)、手术方式(广泛淋巴结清扫/ CLN清扫)、术后病理参数(肿瘤最大径、单/多发病灶、被膜外侵犯、淋巴结转移情况)。

    • (1) DNA提取:存档蜡块制备5张厚度8 μm的连续切片,首张和尾张HE染色并复阅切片均可见PTC组织,对照HE切片用无菌刀片刮取中间3张切片对应的癌组织区域,保证肿瘤细胞的量在50%以上。按照QIAGEN石蜡组织DNA提取试剂盒说明提取DNA,立即进行PCR检测。(2)基因突变检测:按照肿瘤相关基因突变检测(qPCR荧光探针法)人B-raf试剂盒说明,采用PCR扩增方法,利用实时荧光Taqman探针法,通过荧光信号的变化,检测标本的BRAFV600E基因突变。每次试验必须同时进行阳性对照、阴性对照检测。

    • 采用t检验、χ2检验和多因素logistic回归分析。

    • 纳入研究的104例PTC病人均行CLN清扫术,其中cN0病人转移率30.30%(20/66),cN1病人转移率89.47%(34/38)。104例PTC病人中男35例,女69例,平均年龄(42.28±13.91)岁,临床病理参数见表 1

      因素 分组 n 百分比/%
      性别
      35 33.7
      69 66.3
      年龄/岁
      < 45 55 52.9
      ≥45 49 47.1
      肿瘤最大径/cm
      ≤1 29 27.9
      1.1~2 27 26.0
      2.1~4 33 31.7
      >4 15 14.4
      肿瘤多灶性
      单灶 75 72.1
      多灶 29 27.9
      被膜外侵犯
      44 42.3
      60 57.7
      超声回声性质
      高/中回声 38 36.5
      低回声 66 63.5
      钙化
      59 56.7
      45 43.3
      边界
      界清 46 44.2
      不清 58 55.8
      CLN转移
      50 48.1
      54 51.9

      表 1  104例PTC病人临床病理参数

    • BRAFV600E基因在104例PTC中突变率64.4%(67/104),BRAFV600E基因突变(+)组年龄(41.84±14.09)岁与BRAFV600E基因突变(-)组年龄(43.08±13.72)岁差异无统计学意义(t=0.43,P>0.05);BRAFV600E基因突变(+)组肿瘤最大径(2.71±1.50)cm大于BRAFV600E基因突变(-)组肿瘤最大径(1.44±1.44)cm(t=4.19,P < 0.01)。BRAFV600E基因突变(+)与肿瘤钙化、被膜外侵犯及CLN转移相关(P < 0.01),而与病人性别、肿瘤多灶性、超声回声性质、肿瘤边界等因素无关(P>0.05)(见表 2)。

      分组 n 肿瘤多灶性 被膜外侵犯 超声回声性质 钙化 边界 CLN转移
      单灶 多灶 高中 界清 不清
      BRAFV600E基因突变(+) 67 21(31.3) 46(68.7) 48(71.6) 19(28.4) 41(61.2) 26(38.8) 38(56.7) 29(43.3) 46(68.7) 21(31.3) 36(53.7) 31(46.3) 17(25.4) 50(74.6)
      BRAFV600E基因突变(-) 37 14(37.8) 23(62.2) 27(73.0) 10(27.0) 3(8.1) 34(91.9) 28(75.7) 9(24.3) 13(35.1) 24(64.9) 22(59.5) 15(40.5) 4(10.8) 33(89.2)
      χ2 0.45 0.02 27.52 3.69 10.91 10.91 38.89
      P >0.05 >0.05 < 0.01 >0.05 < 0.01 >0.05 < 0.01

      表 2  PTC BRAFV600E基因突变与临床病理特征的关系[n; 构成比(%)]

    • 104例PTC病人发生CLN转移54例(51.9%),其中cN0病人转移率30.30%(20/66),cN1病人转移率89.47%(34/38)。CLN转移组年龄(41.87±14.59)岁与无转移组年龄(42.72±13.27)岁差异无统计学意义(t=0.12,P>0.05),CLN转移组肿瘤最大径(2.96±1.47)cm大于无转移组肿瘤最大径(1.50±1.38)cm(t=5.21,P < 0.01)。单因素分析显示,BRAFV600E基因突变、钙化、被膜外侵犯是CLN转移的危险因素(P < 0.05~P < 0.01),而CLN转移与病人性别、肿瘤多灶性、超声回声性质、肿瘤边界等因素无关(P>0.05)(见表 3)。多因素logistic回归分析表明,BRAFV600E基因突变和被膜外侵犯是CLN转移的独立因素(P < 0.01) (见表 4)。

      分组 n 肿瘤多灶性 被膜外侵犯 超声回声性质 钙化 边界 BRAFV600E突变
      单灶 多灶 高中 界清 不清 + -
      CLN有转移 54 19(35.2) 35(64.8) 38(70.4) 16(29.6) 39(72.2) 15(27.8) 35(64.8) 19(35.2) 37(68.5) 17(31.5) 30(55.6) 24(44.4) 50(92.6) 4(7.4)
      CLN无转移 50 16(32.0) 34(68.0) 37(74.0) 13(26.0) 5(10.0) 45(90.0) 31(62.0) 19(38.0) 22(44.0) 28(56.0) 28(56.0) 22(44.0) 17(34.0) 33(66.0)
      χ2 0.12 0.17 41.18 0.09 6.36 0.00 38.89
      P >0.05 >0.05 < 0.01 >0.05 < 0.05 >0.05 < 0.01

      表 3  PTC CLN转移危险因素分析[n;构成比(%)]

      自变量 B SE Waldχ2 P OR(95%CI)
      钙化 1.080 0.659 2.686 >0.05 2.944(0.809~10.712)
      被膜外侵犯 2.770 0.673 16.940 < 0.01 15.965(4.268~59.722)
      BRAFV600E突变 2.100 0.687 9.361 < 0.01 8.170(2.127~31.376)

      表 4  PTC CLN转移的多因素logistic回归分析

    • Ras/Raf/MEK/ERK通路是细胞增殖、分化中重要的信号传导通路,任何异常激活都会影响细胞的增殖,进而导致肿瘤。RAF激酶是上述通路中重要的丝氨酸/苏氨酸激酶,包括三种蛋白亚型:ARAF、BRAF、CRAF,其中BRAF激酶的作用最重要,是下游MEK激酶强力的激活剂,BRAF基因突变模式涵盖65余种,大部分位于15外显子的催化激酶区,即V600E点突变,BRAFV600E基因突变导致的BRAF蛋白激酶过度表达,其通路异常激活,导致细胞增殖异常及肿瘤发生[7]。BRAFV600E基因突变是PTC最常见的分子遗传学事件,其突变率69%~85.3%,对PTC的良恶性鉴别诊断具有良好的应用价值,同时可作为独立的预后因子提示不良预后[5, 8]。BRAFV600E基因突变通过多种复杂途径影响肿瘤细胞增生外延,如抑制钠/碘共转运蛋白(NIS)的表达和放射性碘的摄取[9],改变细胞膜整合素受体及细胞外基质蛋白骨桥蛋白表达水平[10]等,BRAFV600E基因突变预示着肿瘤高侵袭潜能,是淋巴结转移的危险因素[11]

      PTC的复发与进展等不良预后往往与淋巴结转移相关,甲状腺淋巴结转移的第一站发生在中央区,因此若能及时清扫CLN可有效避免肿瘤进展转移。2009版美国甲状腺协会(ATA)指南建议,对cN0的T1或T2期PTC病例可不行CLN清扫,同时指南还提到对早期病例行预防性的CLN清扫可能减少局部复发[12]。目前临床评估术前CLN转移的方法并不完善,超声检查和术前及术中评估可以识别一部分明显的淋巴结转移,但敏感性较低,因此当淋巴结触诊和影像学检查均不能提示疑似淋巴结转移时,是否应行预防性CLN清扫仍存在争议。一些临床医生认为预防性CLN清扫会增加初次手术并发症的风险,如伤及喉返神经、甲状旁腺乃至颈总动脉,对于低风险PTC病人的长期生存没有明显的益处[13]。然而相反的观点认为应该进行预防性CLN清扫,理由是区域淋巴结受累大大增加了肿瘤复发的风险,可能会导致再次手术和/或过量的放射性碘暴露[14]。有文献报道发现BRAFV600E基因突变可能是CLN转移的危险因素,术前甲状腺细针穿刺标本能可靠检测BRAFV600E基因突变,因此BRAFV600E基因突变可以作为一种有价值的检测指标[6, 15]。本研究发现BRAFV600E基因突变与与肿瘤钙化、被膜外侵犯及CLN转移相关,且BRAFV600E基因突变、被膜外侵犯是CLN转移的独立因素(P < 0.01),故BRAFV600E基因突变可为PTC手术中CLN清扫提供基因依据。

      然而,这种横断面研究不能完整评价BRAFV600E基因突变对PTC的长期预后影响,且本研究选用的临床病理参数有限,可能有与CLN转移相关的其他因素未被全面分析,将在后续研究中探讨。

参考文献 (15)

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