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瓜蒌用于胸癖症的治疗始见于汉代名医张仲景所著的《金匮要略》[1]。瓜蒌滴丸是在瓜蒌片(国药准字Z31020173)剂型的基础上[2],经提取溶剂和瓜蒌皮、子配比优化等,制备瓜蒌提取物[3],进一步添加聚乙二醇辅料制备而成,用于冠心病、心绞痛等预防与治疗。本研究采用HPLC-PDAD法建立10批瓜蒌滴丸[4]的化学指纹图谱,利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(国家药典委员会,2012.130723版本)计算瓜蒌滴丸的相似度,采用标准曲线法测定瓜蒌滴丸中尿嘧啶、次黄嘌呤、鸟苷、腺苷的含量[5],以期为瓜蒌滴丸的质量控制提供理论依据。现作报道。
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岛津LC-20A型高效液相色谱仪(含GDU 20A真空在线脱气机,LC-20AT四元泵,CTO-10AS柱温箱,SPD-M20 A检测器),AUW-220D型电子天平(日本岛津公司),UV2550型紫外-可见分光光度计(日本岛津公司),DZF-6030A型真空干燥箱(上海恒一科技有限公司)。
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瓜蒌滴丸(课题组自制,规格25 mg/丸,每丸相当于原瓜蒌生药0.167 g,批号20170701~20170710);尿嘧啶(国药集团化学试剂有限公司,纯度≥98%,批号20150417),次黄嘌呤(国药集团化学试剂有限公司,纯度≥98%,批号20140928);鸟苷(国药集团化学试剂有限公司,纯度≥98%,批号20140522),腺苷(国药集团化学试剂有限公司,纯度≥98%,批号20150528),甲醇为色谱纯,水为娃哈哈纯净水,其他试剂均为分析纯。
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(1) 对照品溶液制备:取尿嘧啶、次黄嘌呤、鸟苷、腺苷对照品,于硅胶干燥器中干燥12 h。分别取适量,精密称定,加15%甲醇制得质量浓度分别为66.6、31.25、133.3、200 μg/mL的混合对照品溶液。(2)瓜蒌滴丸供试品溶液制备:取瓜蒌滴丸适量,精密称定,置于容量瓶中,加15%甲醇定容至刻度,制得75 mg/mL供试品溶液,0.45 μm微孔滤膜过滤后,备用。
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YMC-Pack ODS-A色谱柱(250 mm×4.6 mm,I.D.S-5 μm),以甲醇-水为流动相梯度洗脱:0~30 min,甲醇0%;30~50 min,甲醇0%~2%;50~80 min,甲醇2%~6%;80~200 min,甲醇6%~15%;200~250 min,甲醇15%~15%。总流速:1.0 mL/min;柱温:25 ℃;DAD检测器,检测波长为254 nm。
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瓜蒌滴丸及对照品色谱图见图 1。根据《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》,设置1号样品色谱图为参照图谱,经多点校正,Mark峰及全谱峰匹配,生成对照图谱,得到共有峰的数目为29个。其中2、5、13、19号峰分别为尿嘧啶、次黄嘌呤、鸟苷、腺苷。计算10批瓜蒌滴丸的指纹图谱与共有模式的相似度。
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精密吸取混合对照品溶液,稀释1、2、4、8倍,按“1.3.2 ”项下色谱条件进样。以对照品溶液质量浓度X(μg/mL)为横坐标,峰面积Y为纵坐标进行线性回归,结果见表 1。
对照品 回归方程 r 线性范围/(μg/mL) 尿嘧啶 Y=24 934.12X-250.95 1.000 0 4.16~66.60 次黄嘌呤 Y=21 044.13X+104.21 1.000 0 1.95~31.25 鸟苷 Y=17 676.15X-37 084.32 0.999 5 8.33~133.30 腺苷 Y=21 741.68X-28 602.50 0.999 9 12.50~200.00 表 1 瓜蒌滴丸中4种成分的线性回归方程建立
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取瓜蒌滴丸(批号20170701)适量,按“1.3.1 ”项下方法制备供试品溶液,按“1.3.2”项下色谱条件,连续进样5次。尿嘧啶、次黄嘌呤、鸟苷、腺苷峰面积的RSD分别为0.55%、2.24%、2.32%、1.49%,表明仪器精密度良好[6]。
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取瓜蒌滴丸(批号为20170701)适量,按“1.3.1 ”项下方法制备供试品溶液,按“1.3.2”项下色谱条件,分别在0、6、12、18、24 h进行测定。尿嘧啶、次黄嘌呤、鸟苷、腺苷峰面积的RSD分别为1.22%、0.89%、1.18%、4.23%,表明样品溶液在24 h内稳定性良好。
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取同批瓜蒌滴丸6份,按“1.3.1 ”项下方法制备供试品溶液,按“1.3.2”项下色谱条件测定。尿嘧啶、次黄嘌呤、鸟苷、腺苷平均含量的RSD分别为3.55%、1.56%、0.95%、1.85%,表明方法重复性良好。
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取已知尿嘧啶、次黄嘌呤、鸟苷、腺苷含量的瓜蒌滴丸(批号为20170701)供试品溶液9份(每份10 mL),分为3组,每组3份,每份1 mL,每组分别按尿嘧啶、次黄嘌呤、鸟苷、腺苷已知含量的80%、100%、120%精密加入对照品。按“1.3.2 ”项下色谱条件进样测定。尿嘧啶、次黄嘌呤、鸟苷、腺苷平均含量的RSD分别为3.17%、4.44%、4.15%、3.32%,满足分析要求(见表 2)。
对照品 样品中量/
μg加入量/
μg测得量/
μg回收率/
%平均
回收率/%RSD/% 15.24 34.71 102.7 15.24 34.28 99.9 15.24 33.36 93.8 19.05 38.63 102.7 尿嘧啶 19.05 19.05 37.60 97.3 100.3 3.17 19.05 38.39 101.5 22.86 42.86 104.1 22.86 42.24 101.4 22.86 41.78 99.4 11.45 9.16 21.03 9.16 20.38 97.5 9.16 20.87 102.9 次黄嘌呤 11.45 11.45 22.91 100.1 11.45 22.77 98.9 98.5 4.44 11.45 21.97 91.9 13.74 24.01 91.4 13.74 24.99 98.5 13.74 25.24 100.4 28.58 22.86 52.89 22.86 53.77 110.1 22.86 51.40 99.8 28.58 58.87 105.9 鸟苷 28.58 28.58 57.51 101.2 104.4 4.15 28.58 56.54 97.8 34.30 66.10 109.3 34.30 64.73 105.3 34.30 64.23 103.9 45.80 36.64 83.97 36.64 84.70 106.1 36.64 81.73 98.1 45.80 93.55 104.2 腺苷 45.80 45.80 91.33 99.4 101.2 3.32 45.80 92.59 102.1 54.96 99.55 97.8 54.96 99.00 96.8 54.96 102.32 102.8 表 2 瓜蒌滴丸中4种成分的加样回收率试验结果
瓜蒌滴丸的化学指纹特征及4种成分的定量分析
Study on the chemical fingerprint features and quantitative analysis of 4 components of Trichosanthis Fructus dropping pills
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摘要:
目的研究瓜蒌滴丸的化学指纹特征及4种成分的定量分析方法。 方法采用HPLC-PDAD法建立10批瓜蒌滴丸的化学指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算瓜蒌滴丸的相似度;采用标准曲线法对瓜蒌滴丸中尿嘧啶、次黄嘌呤、鸟苷、腺苷进行定量分析。 结果10批瓜蒌滴丸的相似度为0.99(Mark峰匹配)和0.97(全谱峰匹配)。瓜蒌滴丸中尿嘧啶、次黄嘌呤、鸟苷、腺苷的含量分别为0.06%、0.03%、0.11%、0.17%,该方法的精密度、稳定性、重复性和加样回收率的RSD最高值分别为2.24%、3.55%、4.23%和4.44%,可满足分析要求。 结论建立了瓜蒌滴丸的化学指纹特征及4种成分的定量分析方法,可用于瓜蒌滴丸的质量控制。 Abstract:ObjectiveTo study on the chemical fingerprint characteristics of Trichosanthis Fructus dropping pills, and quantitative analysis of 4 components. MethodsThe chemical fingerprints of 10 batches of Trichosanthis Fructus dropping pills were established by HPLC-PDAD, and the similarity of Trichosanthis Fructus dropping pills was calculated using the similarity evaluation system of chromatographic fingerprint of TCM.The contents of uracil, hypoxanthine, guanosine and adenosine in Trichosanthis Fructus dropping pills were quantitatively analyzed using the standard curve method. ResultsThe similarity of 10 batches of Trichosanthis Fructus dropping pills were 0.99(Mark peak matching) and 0.97(full spectrum peak matching).The contents of uracil, hypoxanthine, guanosine and adenosine in Trichosanthis Fructus dropping pills were 0.06%, 0.03%, 0.11% and 0.17%, respectively.The maximum RSD values of precision, stability, repeatability and sample recovery rate were 2.24%, 3.55%, 4.23% and 4.44%, respectively, which could meet the requirements of analysis. ConclusionThe established analysis methods of the chemical fingerprint features and quantitative analysis of 4 components of Trichosanthis Fructus dropping pills can be used in the quality control of Trichosanthis Fructus dropping pills. -
表 1 瓜蒌滴丸中4种成分的线性回归方程建立
对照品 回归方程 r 线性范围/(μg/mL) 尿嘧啶 Y=24 934.12X-250.95 1.000 0 4.16~66.60 次黄嘌呤 Y=21 044.13X+104.21 1.000 0 1.95~31.25 鸟苷 Y=17 676.15X-37 084.32 0.999 5 8.33~133.30 腺苷 Y=21 741.68X-28 602.50 0.999 9 12.50~200.00 表 2 瓜蒌滴丸中4种成分的加样回收率试验结果
对照品 样品中量/
μg加入量/
μg测得量/
μg回收率/
%平均
回收率/%RSD/% 15.24 34.71 102.7 15.24 34.28 99.9 15.24 33.36 93.8 19.05 38.63 102.7 尿嘧啶 19.05 19.05 37.60 97.3 100.3 3.17 19.05 38.39 101.5 22.86 42.86 104.1 22.86 42.24 101.4 22.86 41.78 99.4 11.45 9.16 21.03 9.16 20.38 97.5 9.16 20.87 102.9 次黄嘌呤 11.45 11.45 22.91 100.1 11.45 22.77 98.9 98.5 4.44 11.45 21.97 91.9 13.74 24.01 91.4 13.74 24.99 98.5 13.74 25.24 100.4 28.58 22.86 52.89 22.86 53.77 110.1 22.86 51.40 99.8 28.58 58.87 105.9 鸟苷 28.58 28.58 57.51 101.2 104.4 4.15 28.58 56.54 97.8 34.30 66.10 109.3 34.30 64.73 105.3 34.30 64.23 103.9 45.80 36.64 83.97 36.64 84.70 106.1 36.64 81.73 98.1 45.80 93.55 104.2 腺苷 45.80 45.80 91.33 99.4 101.2 3.32 45.80 92.59 102.1 54.96 99.55 97.8 54.96 99.00 96.8 54.96 102.32 102.8 -
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