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长链非编码RNA LINC00173在紫杉醇耐药乳腺癌细胞中的作用

杨硕 陈天天 王文锐 杨清玲 陈昌杰

引用本文:
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长链非编码RNA LINC00173在紫杉醇耐药乳腺癌细胞中的作用

    作者简介: 杨硕(1989-), 男, 硕士研究生
    通讯作者: 杨清玲, yqlmimi@163.com
  • 基金项目:

    安徽省教育厅自然科学研究重大项目 KJ2019ZD2

    蚌埠医学院创新项目 Byycxz1917

    安徽省学术与技术带头人后备人选资助项目 2017H110

    安徽省高校学科(专业)拔尖人才学术资助重点项目 gxbjZD2016069,gxbjZD27

  • 中图分类号: R737.9

Role of long non-coding RNA LINC00173 in paclitaxel-resistant breast cancer cells

    Corresponding author: YANG Qing-ling, yqlmimi@163.com ;
  • CLC number: R737.9

  • 摘要: 目的探讨长链非编码RNA LINC00173对紫杉醇耐药乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并探讨其可能的作用机制。方法利用qRT-PCR方法检测LINC00173在乳腺癌细胞株(MCF-7、MDA-MB-231和SKBR-3)和正常乳腺癌上皮细胞系(MCF-10A)的表达水平;构建LINC00173过表达载体和干扰片段,各自转染到乳腺癌细胞株中,利用qRT-PCR方法检测转染后LINC00173的表达水平;采用CCK8实验检测乳腺癌细胞的增殖能力;Transwell侵袭和划痕实验,检测细胞的侵袭和迁移能力;Western blotting方法检测CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白的表达。结果与MCF-10A细胞相比,LINC00173在乳腺癌细胞株中低表达;MCF-7细胞转染干扰片段及MCF-7/PR耐药细胞株转染过表达LINC00173载体后,与阴性对照(si-NC)组相比,si-LINC00173的表达降低;而与LV-NC组相比,过表达LV-LINC00173后的表达增加,且差异有统计学意义(P < 0.01);干扰LINC00173的表达后,MCF-7细胞的增殖及迁移能力增强(P < 0.01);过表达LINC00173后,MCF-7/PR细胞的增殖、侵袭及迁移能力减弱(P < 0.01);干扰LINC00173后,MCF-7细胞CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白的表达水平明显增加(P < 0.01);过表达LINC00173后,MCF-7/PR的CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白表达水平明显下降(P < 0.01)。结论LINC00173在乳腺癌细胞中表达降低并可能通过调控β-catenin表达参与紫杉醇耐药过程且与其发生、发展及侵袭有关,是涉及到乳腺癌发展的一种新的分子,可为临床诊断、治疗乳腺癌提供新的理论依据。
  • 图 1  si- LINC00173对乳腺癌MCF-7细胞迁移能力的促进作用

    图 2  si-LINC00173对乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力的促进作用

    图 3  LV-LINC00173对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/PR细胞迁移能力的抑制作用

    图 4  LV-LINC00173对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/PR细胞侵袭能力的抑制作用

    图 5  si-LINCO01 73对乳腺癌MCF-7细胞株CyclinD1、β -catenin、P-gp蛋白水平的影响

    图 6  LV-LINC00173对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/PR的CyclinD1、β -catenin、P-gp蛋白水平的影响

    表 1  引物序列

    基因名称 上游序列 下游序列
    LINC00173 GGA ATG TTG CGA TCC TCT GG CAG CCA TGT CTC AGA GGT GA
    CyclinD1 ACC TGA GGA GCC CCA ACA AC GCT TCG ATC TGC TCC TCC G
    P-gp GTA CCC ATC ATT GCA ATA GC CAA ACT TCT GCT CCT GAG TC
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    表 2  在MCF-10A、MCF-7、MDA-MB-231和SKBR-3细胞中LINC00173表达水平比较(ni=3;x±s)

    分组 LINC00173 F P MS组内
    MCF-10A组 1.04±0.05
    MCF-7组 0.37±0.01** 196.96 < 0.01 0.002
    MDA-MB-231组 0.21±0.07**##
    SKBR-3组 0.50±0.02**##△△
          q检验:与MCF-10A组比较**P < 0.01;与MDA-7组比较##P < 0.01;与MDA-MB-231组△△P < 0.01
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    表 3  si-LINC00173对MCF-7细胞LINC00173表达的影响(ni=3;x±s)

    分组 LINC00173 t P
    si-NC组 1.00±0.18 8.03 < 0.01
    si-LINC00173组 0.16±0.02
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    表 4  LV-LINC00173对MCF-7/PR细胞LINC00173表达的影响(ni=3;x±s)

    分组 LINC00173 t P
    LV-NC组比较 1.00±0.11 12.56 < 0.01
    LV-LINC00173组 2.53±0.18
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    表 5  si-LINC00173对MCF-7细胞的增殖促进作用(ni=3;x±s)

    分组 增殖率/% F P MS组内
    24 h 48 h 72 h
    si-NC 0.75±0.04 1.20±0.04** 1.60±0.03**## 396.95 < 0.01 0.001
    si-LINC00173 0.75±0.13 1.50±0.07** 1.99±0.11**## 103.55 < 0.01 0.011
    t 0.00 4.45 5.92
    P >0.05 < 0.01 < 0.01
          q检验:与24 h比较**P < 0.01;与48 h比较##P < 0.01
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    表 6  LV-LINC00173对MCF-7/PR细胞的增殖抑制作用(ni=3;x±s)

    分组 24 h 48 h 72 h F P MS组内
    LV-NC 0.92±0.04 1.85±0.06** 2.43±0.13**## 236.29 < 0.01 0.007
    LV-LINC00173 0.67±0.02 1.04±0.02** 1.79±0.11**## 227.19 < 0.01 0.004
    t 9.68 22.18 6.51
    P < 0.01 < 0.01 < 0.01
          q检验:与24 h比较**P < 0.01;与48 h比较##P < 0.01
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    表 7  si-LINC00173对MCF-7细胞迁移能力的影响(ni=3;x±s)

    分组 细胞数 迁移率/%
    si-NC组 181±6.18 0.46±0.02
    si-LINC00173组 298±9.39 0.64±0.01
    t 18.03 13.94
    P < 0.01 < 0.01
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    表 8  LV-LINC00173对MCF-7/PR细胞迁移能力的影响(ni=3;x±s)

    分组 n 细胞数 迁移率/%
    LV-NC组 3 295±8.60 0.53±0.04
    LV-LINC00173组 3 125±5.31 0.29±0.02
    t 29.13 9.30
    P < 0.01 < 0.01
    下载: 导出CSV

    表 9  si-LINC00173对MCF-7细胞的CyclinD1、β-catenin、P-gp的影响(ni=3;x±s)

    分组 β-catenin P-gp CyclinD1
    si-NC 1.00±0.07 1.00±0.01 1.00±0.03
    si-LINC00173 1.57±0.02 1.49±0.06 1.35±0.01
    t 13.56 13.95 19.17
    P < 0.01 < 0.01 < 0.01
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    表 10  LV-LINC00173对MCF-7/PR细胞的CyclinD1、β-catenin、P-gp的影响(ni=3;x±s)

    分组 β-catenin P-gp CyclinD1
    LV-NC 1.00±0.10 1.00±0.09 1.00±0.07
    LV-LINC00173 0.45±0.05 0.58±0.04 0.67±0.04
    t 8.52 7.39 7.09
    P < 0.01 < 0.01 < 0.01
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出版历程
  • 收稿日期:  2020-05-20
  • 录用日期:  2020-08-21
  • 刊出日期:  2020-09-15

长链非编码RNA LINC00173在紫杉醇耐药乳腺癌细胞中的作用

    通讯作者: 杨清玲, yqlmimi@163.com
    作者简介: 杨硕(1989-), 男, 硕士研究生
  • 1. 蚌埠医学院 癌症转化医学安徽省重点实验室, 安徽 蚌埠 233030
  • 2. 蚌埠医学院 生物化学与分子生物学教研室, 安徽 蚌埠 233030
基金项目:  安徽省教育厅自然科学研究重大项目 KJ2019ZD2蚌埠医学院创新项目 Byycxz1917安徽省学术与技术带头人后备人选资助项目 2017H110安徽省高校学科(专业)拔尖人才学术资助重点项目 gxbjZD2016069,gxbjZD27

摘要: 目的探讨长链非编码RNA LINC00173对紫杉醇耐药乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并探讨其可能的作用机制。方法利用qRT-PCR方法检测LINC00173在乳腺癌细胞株(MCF-7、MDA-MB-231和SKBR-3)和正常乳腺癌上皮细胞系(MCF-10A)的表达水平;构建LINC00173过表达载体和干扰片段,各自转染到乳腺癌细胞株中,利用qRT-PCR方法检测转染后LINC00173的表达水平;采用CCK8实验检测乳腺癌细胞的增殖能力;Transwell侵袭和划痕实验,检测细胞的侵袭和迁移能力;Western blotting方法检测CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白的表达。结果与MCF-10A细胞相比,LINC00173在乳腺癌细胞株中低表达;MCF-7细胞转染干扰片段及MCF-7/PR耐药细胞株转染过表达LINC00173载体后,与阴性对照(si-NC)组相比,si-LINC00173的表达降低;而与LV-NC组相比,过表达LV-LINC00173后的表达增加,且差异有统计学意义(P < 0.01);干扰LINC00173的表达后,MCF-7细胞的增殖及迁移能力增强(P < 0.01);过表达LINC00173后,MCF-7/PR细胞的增殖、侵袭及迁移能力减弱(P < 0.01);干扰LINC00173后,MCF-7细胞CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白的表达水平明显增加(P < 0.01);过表达LINC00173后,MCF-7/PR的CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白表达水平明显下降(P < 0.01)。结论LINC00173在乳腺癌细胞中表达降低并可能通过调控β-catenin表达参与紫杉醇耐药过程且与其发生、发展及侵袭有关,是涉及到乳腺癌发展的一种新的分子,可为临床诊断、治疗乳腺癌提供新的理论依据。

English Abstract

  • 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤[1],也是女性恶性肿瘤病人第二大死亡原因,化疗耐药是造成病人生存期逐渐缩短的重要原因。长链非编码RNA(long non-coding RNA, LncRNA)是本身不具有编码蛋白质功能的RNA分子,早期发现时被认为是“转录噪音”。近年来随着非编码RNA研究领域的拓展,人们逐渐认识到LncRNA在越来越多的癌症中发挥重要的原癌基因或抑癌基因作用[2-3]。其通过与各种生物大分子如DNA、蛋白质和RNAs相互作用,参与多种细胞或者生物进程。近年来的研究[4]表明,LncRNA在人类多种癌症中异常表达,具有细胞和组织特异性。LncRNA参与调控肿瘤的发生、增殖、凋亡和侵袭及转移等过程[5-6]。目前越来越多的研究[7-9]发现LINC00173在不同癌症中发挥着不同的调控作用,如LncRNA LINC00173在宫颈癌、结直肠癌及乳腺癌中发挥着抑癌的作用,而在黑素瘤中充当着癌基因的角色。有研究[10]表明LINC00173在调控细胞的耐药性及血管生成方面产生重要作用,但是对其细胞的增殖、侵袭等研究较少。本研究就LINC00173在乳腺癌细胞株中的表达及相关机制进行研究,为进一步提供化疗预后评估生物标志物提供实验依据。

    • 正常乳腺上皮细胞株MCF-10A和乳腺癌细胞株MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231购自中国科学院细胞库;胎牛血清和DMEM高糖培养基购自Hyclone公司;Trizol试剂和Lipofectamine2000购自Invitrogen公司;荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)试剂购自Takara公司;LncRNA LINC00173慢病毒过表达载体及干扰片段购自上海吉玛公司;所有引物由南京金斯瑞生物科技有限公司合成;一抗CyclinD1、β-catenin、P-gp及二抗购自Proteintech公司;CCK8试剂盒购自吉玛公司;Transwell小室购自Corning公司。

    • 用紫杉醇诱导MCF-7细胞耐药性的产生,使MCF-7细胞处于10 μg/mL的浓度中稳定生长。乳腺癌细胞株均接种于含10%胎牛血清的DMEM培养基中,在37 ℃、5% CO2和95%饱和湿度条件下的培养箱中培养,待细胞生长至融合度80%左右后进行传代培养。所有实验均取对数生长期细胞。

    • 采用Trizol法提取各乳腺癌细胞株总RNA,根据逆转录试剂说明书进行逆转录,按照荧光定量试剂盒说明书进行PCR实验。GAPDH作为内参,所用的引物序列见表 1。qRT-PCR反应参数为95 ℃预变性10 min,95 ℃ 15 s, 60 ℃ 30 s,72 ℃ 34 s,40个循环。获得的数据运用2-ΔΔCt计算表达量。

      基因名称 上游序列 下游序列
      LINC00173 GGA ATG TTG CGA TCC TCT GG CAG CCA TGT CTC AGA GGT GA
      CyclinD1 ACC TGA GGA GCC CCA ACA AC GCT TCG ATC TGC TCC TCC G
      P-gp GTA CCC ATC ATT GCA ATA GC CAA ACT TCT GCT CCT GAG TC

      表 1  引物序列

    • 收集对数生长期细胞,胰酶消化后接种(3~5)×103个细胞于96孔板,设置不同梯度的感染复数(MOI)值,分别为1、5、10、50、100,加入相应的病毒量后放入5% CO2、37 ℃培养箱中培养;24 h后更换新鲜培养基;96 h后观察荧光表达情况,以确认目的细胞的感染方法和感染指数。取对数生长期细胞消化后重悬,取2×105/mL细胞接种至6孔板中,37 ℃培养箱中培养;取阴性对照和目的病毒按照相应MOI值的病毒量与培养基混合,加入终浓度5 μg/mL的Polybrene,37 ℃培养;24 h后加入新鲜培养基,48 h后荧光倒置显微镜下观察并记录结果。

    • 收集对数生长期细胞,制成单细胞悬液均匀接种于6孔板中,放入5% CO2、37 ℃培养箱中培养24 h,当细胞汇合度达到70%~90%时分别加入5 μL阴性对照组和干扰片段组和250 μL Opti-MEM轻柔混匀,室温放置5 min,5 μL Lipofectamine2000稀释于250 μLOpti-MEM轻柔混匀,室温放置5 min,将稀释后的Lipofectamine2000与干扰片段混匀,室温放置20 min,用PBS洗涤,加入1.5 mL无血清的培养基,将混合物缓慢加到6孔板中,24~48 h后筛选出效果最佳的干扰片段。LINC00173干扰片段序列为5′-CUC CUA UUC ACC CUU CAG ATT-3′;5′-UCU GAA GGG UGA AUA GGA GTT-3′。

    • 按照Cell-Counting Kit-8细胞增殖检测的说明书进行,细胞消化接种至6孔板(1×105个/孔)),分别将实验组、对照组的质粒转染至细胞中,培养48 h后,细胞消化离心至96孔板(2 000个/孔),每组设立3个复孔。分别在0、24、48、72 h时,加入CCK-8试剂(10 μL/孔),2 h后分别检测各孔的吸光度(450 nm)。

    • 胰酶消化对数生长期细胞,离心将细胞制成单细胞悬液接种于6孔板中,置于5% CO2、37 ℃培养箱中培养。当细胞生长至80%左右汇合时,用10 μL无菌枪头在细胞板中央轻轻划出一道伤口,注意保持各组划出的伤口宽度基本一致,用PBS清洗2次,加入无血清培养基继续放于5% CO2、37 ℃培养箱中培养,24 h后在低倍镜下观察各组细胞的迁移结果。

    • 胰酶消化对数生长期细胞,用无血清培养基将每组的细胞调整到相同细胞密度。按照实验分组,各组配置100 μL加入Transwell小室的上室。Transwell小室的下室加入600 μL含10%胎牛血清的DMEM培养基,5% CO2、37 ℃培养箱中培养24 h。取出Transwell小室,用棉签小心擦去Transwell小室上室的培养基以及膜上部未穿过的细胞,4%多聚甲醇固定20 min,吉姆萨染液染色,倒置显微镜随机计数5个高倍镜视野下细胞数目并拍照记录。

    • 收集转染干扰片段的MCF-7细胞及过表达LINC00173处于对数生长期的MCF-7/PR耐药细胞,加入RIPA裂解液,冰浴30 min,4 ℃条件下经12 000 r/min离心30 min,提取细胞总蛋白。采用BCA法测定蛋白浓度。取30 μg蛋白样品与上样缓冲液充分混匀后点样进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),转膜、封闭,加入CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白一抗稀释液(1:1 000),4 ℃孵育24 h,洗膜,加入二抗稀释液(1:2 000)室温孵育2 h,ECL显影,应用ImageJ软件分析蛋白条带灰度值。

    • 采用方差分析、q检验和t(或t′)检验。

    • MCF-10A、MCF-7、MDA-MB-231和SKBR-3中LINC00173表达水平比较qRT-PCR结果显示,相对于正常人乳腺上皮细胞系MCF-10A,LINC00173在3种乳腺癌细胞系中相对低表达,差异均有统计学意义(P < 0.01)(见表 2)。

      分组 LINC00173 F P MS组内
      MCF-10A组 1.04±0.05
      MCF-7组 0.37±0.01** 196.96 < 0.01 0.002
      MDA-MB-231组 0.21±0.07**##
      SKBR-3组 0.50±0.02**##△△
            q检验:与MCF-10A组比较**P < 0.01;与MDA-7组比较##P < 0.01;与MDA-MB-231组△△P < 0.01

      表 2  在MCF-10A、MCF-7、MDA-MB-231和SKBR-3细胞中LINC00173表达水平比较(ni=3;x±s)

    • MCF-7中LINC00173水平为进一步研究LINC00173在乳腺癌中的作用,特异性的si-LINC0013被转入到MCF-7中,非特异性的siRNA作为阴性对照(si-NC)。与si-NC组相比,si-LINC00173组的LINC00173表达量明显降低(P < 0.01)(见表 3)。

      分组 LINC00173 t P
      si-NC组 1.00±0.18 8.03 < 0.01
      si-LINC00173组 0.16±0.02

      表 3  si-LINC00173对MCF-7细胞LINC00173表达的影响(ni=3;x±s)

    • 对乳腺癌耐药细胞MCF-7/PR中LINC00173表达的影响为评估LINC00173在乳腺癌细胞中的作用,LV-LINC00173载体转入到MCF-7/PR细胞中,以阴性对照(LV-NC)组为对照。与阴性对照组相比,过表达LV-LINC00173载体组LINC00173的表达量升高(P < 0.01)(见表 4)。

      分组 LINC00173 t P
      LV-NC组比较 1.00±0.11 12.56 < 0.01
      LV-LINC00173组 2.53±0.18

      表 4  LV-LINC00173对MCF-7/PR细胞LINC00173表达的影响(ni=3;x±s)

    • 为探讨LINC00173在乳腺癌细胞中的生物学作用,利用CCK8法检测细胞的增殖能力,结果显示,与si-NC转染组相比,si-LINC00173转染组明显促进MCF-7细胞的增殖(P < 0.01)(见表 5);与LV-NC组相比,LV-LINC00173组明显抑制细胞的增殖(P < 0.01)(见表 6)。

      分组 增殖率/% F P MS组内
      24 h 48 h 72 h
      si-NC 0.75±0.04 1.20±0.04** 1.60±0.03**## 396.95 < 0.01 0.001
      si-LINC00173 0.75±0.13 1.50±0.07** 1.99±0.11**## 103.55 < 0.01 0.011
      t 0.00 4.45 5.92
      P >0.05 < 0.01 < 0.01
            q检验:与24 h比较**P < 0.01;与48 h比较##P < 0.01

      表 5  si-LINC00173对MCF-7细胞的增殖促进作用(ni=3;x±s)

      分组 24 h 48 h 72 h F P MS组内
      LV-NC 0.92±0.04 1.85±0.06** 2.43±0.13**## 236.29 < 0.01 0.007
      LV-LINC00173 0.67±0.02 1.04±0.02** 1.79±0.11**## 227.19 < 0.01 0.004
      t 9.68 22.18 6.51
      P < 0.01 < 0.01 < 0.01
            q检验:与24 h比较**P < 0.01;与48 h比较##P < 0.01

      表 6  LV-LINC00173对MCF-7/PR细胞的增殖抑制作用(ni=3;x±s)

    • 与si-NC组相比,通过划痕实验结果发现,si-LINC00173的迁移率明显上升(见图 1)。Transwell实验结果表明, si-LINC00173侵袭的细胞数明显增加(P < 0.01)(见图 2表 7)。而上调LINC00173表达后,LV-NC组相比,LV-LINC00173侵袭的细胞与迁移能力明显降低(见图 34表 8)。

      图  1  si- LINC00173对乳腺癌MCF-7细胞迁移能力的促进作用

      图  2  si-LINC00173对乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力的促进作用

      分组 细胞数 迁移率/%
      si-NC组 181±6.18 0.46±0.02
      si-LINC00173组 298±9.39 0.64±0.01
      t 18.03 13.94
      P < 0.01 < 0.01

      表 7  si-LINC00173对MCF-7细胞迁移能力的影响(ni=3;x±s)

      图  3  LV-LINC00173对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/PR细胞迁移能力的抑制作用

      图  4  LV-LINC00173对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/PR细胞侵袭能力的抑制作用

      分组 n 细胞数 迁移率/%
      LV-NC组 3 295±8.60 0.53±0.04
      LV-LINC00173组 3 125±5.31 0.29±0.02
      t 29.13 9.30
      P < 0.01 < 0.01

      表 8  LV-LINC00173对MCF-7/PR细胞迁移能力的影响(ni=3;x±s)

    • Western blotting结果显示,与si-NC组相比,si-LINC00173的CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白水平明显升高(见图 5表 9)。而相对于阴性对照(LV-NC)组,过表达LINC00173后,乳腺癌耐药细胞株MCF-7/PR的CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白表达量显著降低(P < 0.01)(见图 6表 10)。

      图  5  si-LINCO01 73对乳腺癌MCF-7细胞株CyclinD1、β -catenin、P-gp蛋白水平的影响

      分组 β-catenin P-gp CyclinD1
      si-NC 1.00±0.07 1.00±0.01 1.00±0.03
      si-LINC00173 1.57±0.02 1.49±0.06 1.35±0.01
      t 13.56 13.95 19.17
      P < 0.01 < 0.01 < 0.01

      表 9  si-LINC00173对MCF-7细胞的CyclinD1、β-catenin、P-gp的影响(ni=3;x±s)

      图  6  LV-LINC00173对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/PR的CyclinD1、β -catenin、P-gp蛋白水平的影响

      分组 β-catenin P-gp CyclinD1
      LV-NC 1.00±0.10 1.00±0.09 1.00±0.07
      LV-LINC00173 0.45±0.05 0.58±0.04 0.67±0.04
      t 8.52 7.39 7.09
      P < 0.01 < 0.01 < 0.01

      表 10  LV-LINC00173对MCF-7/PR细胞的CyclinD1、β-catenin、P-gp的影响(ni=3;x±s)

    • LncRNA是一类长约200个核苷酸的非编码RNA,在非编码RNA中所占比例最高,广泛存在于人体正常组织中[11-12],在转录或转录后水平发挥基因调控作用,参与细胞的增殖、分化、凋亡、转移等多种生物学行为[13-14]。近年来的研究[15-17]表明,越来越多的lncRNA,如SOX2OT、BCRT1、AFAP1-AS1等与乳腺癌的发生发展相关,涉及细胞中的多种分子和信号通路。LINC00173在乳腺癌中的作用研究报道目前尚少。

      LINC00173位于细胞核内的12号染色体,参与了肿瘤的形成与发展,LINC00173在许多肿瘤中发挥着抑癌作用,调控肿瘤的发生与发展。ZENG等[18]研究证明,LINC00173在非小细胞肺癌中的表达显著降低,与肿瘤的大小和分化程度有关,体外过表达LINC00173后抑制了癌细胞的转移[19]。FAN等[20]研究指出,在肿瘤细胞中,上调LINC00173后,乳腺癌细胞增殖活性显著降低,β-catenin、P-gp、CyclinD1蛋白水平降低,提示LINC00173的表达可能通过下调β-catenin的表达从而抑制乳腺癌细胞的增殖。虽然对LINC00173的研究很多,但其在乳腺癌中的作用研究较少。

      LINC00173可能通过多种方式在肿瘤的发生与发展中发挥作用。有研究[21]表明,在粒细胞分化和早期髓系祖细胞或前体与EZH2的相互作用中产生作用,进而促进肿瘤的形成;YU等[8]研究发现LINC00173可以与PLP2蛋白相互作用,下调LINC00173,降低PLP2蛋白,减少对细胞周期的阻断作用,从而促进细胞增殖;ZHAO等[22]研究表明,LINC00173可能通过一些靶基因调控癌症的进展和耐药,比如FBXW7、Ekt等。另有报道[23]LINC00173在肿瘤的增殖、侵袭及转移中的作用,但在乳腺癌中与增殖、转移的关系报道很少。

      为进一步阐明LINC00173在乳腺癌中的作用机制,本研究比较了3株乳腺癌细胞株LINC00173的表达量。结果发现LINC00173在乳腺癌细胞株中相对低表达,根据数据库分析LINC00173在MCF-7细胞中主要分布于细胞核内,因此在后续实验中用MCF-7细胞及MCF-7/PR耐药细胞株进行研究。在MCF-7细胞中下调LINC00173的表达,乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力明显增加。相反,在MCF-7/PR细胞中上调LINC00173的表达,乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力明显下降,表明LINC00173可能会调控乳腺癌细胞的发展进程。这些结果表明LINC00173在乳腺癌的发生发展过程中起着抑癌的作用,它的缺失与过表达可能引起乳腺癌。综上所述,上调LINC00173在乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移中发挥重要作用;可能通过β-catenin信号通路,抑制乳腺癌耐药细胞的侵袭和转移能力。但目前的研究较浅,LINC00173在肿瘤的转移中的调控作用还需进一步研究,为临床开发肿瘤标志物及靶向药物提供新的方向。

参考文献 (23)

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