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新生儿溶血病(hemolytic disease of the newborn，HDN)的主要病因是胎母血型不相容，致母亲对胎儿红细胞发生同种免疫反应而引起的一种免疫性溶血性疾病[1]。临床上部分HDN患儿会出现比较明显的贫血、水肿和肝脾肿大，黄疸严重者可能并发核黄疸，危害患儿健康生长[2]。检测母婴的血液标本，能够对患儿的病情进行及时评估和HDN的及时诊断，从而为患儿争取时间，避免错失最佳治疗时机[3]，利于改善患儿预后。本文以安徽省阜阳市人民医院收治的高胆红素血症(neonatal hyperbilirubinemia，NHB)新生儿215例作为研究对象，开展血型鉴定和溶血三项试验检测，现将结果作一报道。
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2019年安徽省阜阳市人民医院收治的疑为NHB住院患儿215例，其中男111例，女104例，日龄1~3 d，平均日龄(2±0.42)d。母亲送检血型均为O型Rh阳性，患儿在出生3 d内经检测被确诊为NHB。
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血型专用低速离心机(BASO2005-1型)，全自动血型分析仪(瑞士Hamilton Bonaduz AG), 血型卡离心机(长沙英泰TXK4型)，专用孵育器(长春博研FYQ型)，ABODE血型检测卡、新生儿ABO RhD血型检测卡、HDN不完全抗体检测卡及酸放散试剂盒(长春博迅)，人ABO血型标准红细胞试剂(上海血液生物)。
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血液标本负压采血管以EDTA-K2抗凝(紫色帽)，采集静脉血≥2 mL。母亲及患儿血型选择Hamilton全自动血型分析仪项目“血型检测”及“新生儿ABO、RhD血型检测”进行血型鉴定试验。(1)游离试验：通过检测卡1、2、3孔分次加入50 μL血浆，后加入50 μL A1、B、O标准红细胞悬混液，37 ℃孵化15 min后再离心5 min，判定凝集强度。(2)血清学释放试验：通过检测卡4、5、6孔分次注入50 μL A1、B、O标准红细胞悬混液，各加入50 μL红细胞放散液37 ℃孵化15 min后离心5 min判定凝集强度。(3)直抗试验：用抗人球蛋白检测卡(与新生儿血型卡合一)对患儿进行检测，并加入50 μL患儿红细胞标准悬混液，5 min离心之后，判定凝集强度。
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参照所用新生儿溶血微柱凝胶卡试剂说明，溶血三项试验中：三项阳性或者二项阳性(包括释放试验)或者释放试验阳性，三种结果均为确诊[4]。
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采用χ2检验和χ2分割检验。
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215例NHB患儿检出HDN 97例，HDN确诊率为45.12%(97/215)，释放试验阳性97例，游离试验阳性111例(合并释放试验阳性76例)，直抗试验阳性21例(合并释放试验阳性16例)，检出率分别为100%(97/97)、78.35%(76/97)、16.50%(16/97)，3种方法检出率差异有统计学意义(χ2=160.04，P＜0.01)，释放试验>游离试验>直抗试验(见表 1)。
释放试验 游离试验 直抗试验 结果 检出率
[n; 百分率(%)]- - - 阴性 84(39.06) - + + 可疑 3 (1.40) + + + 阳性 16(7.44) + - - 阳性 18(8.37) - - + 可疑 2(0.93) + + - 阳性 63(29.30) - + - 可疑 29(13.49) 表 1 215例NHB患儿血清学抗体检查结果
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HDN患儿A、B、O型占比分别为52.58%(51/97)、45.36%(44/97)和2.20%(2/97)，且HDN组和非HDN组A型、B型与O型构成比差异有统计学意义(P＜0.01)(见表 2)。
分组 n A型Rh(+) B型Rh(+) O型Rh(+) χ2 P HDN组
非HDN组97
11851(52.58)
26(22.03)44(45.36)
3(27.97)2(2.20)
59(50)61.49 ＜0.01 表 2 215例NHB患儿血清学检查结果[n；构成比(%)]
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HDN是儿科比较常见的一种免疫性溶血疾病，形成原因主要是母体中的IgG通过胎盘与新生儿红细胞发生作用而导致溶血反应的发生[5]。如果患儿本身红细胞在这样的胎儿循环当中被大量破坏，则容易导致患儿出现HDN，部分重症患儿发病时，会导致非常明显的多器官脏器衰竭、神经系统损伤等，临床当中如果治疗不及时，致死率与致残率非常高，晚期患儿会遗留比较明显的神经系统疾病[6]。且有研究[7]指出，神经系统核黄疸的发生率与胆红素的高低成正相关，临床干预时间越晚，胆红素持续增加风险越高。因而，在临床治疗过程中，对患儿进行有效血清筛查，可以提高患儿的生存率，避免患儿遭受严重神经系统伤害以及各脏器损害，改善患儿预后。HDN国内以ABO型为主，其他类型少见，张泉等[8]报道非ABO型占1.91%，秦华等[9]研究发现非ABO型占0.44%，本研究中送检母亲标本均为O型Rh阳性，患儿血型中有2例O型，疑似Rh系统，由于缺乏试剂，没有进一步做其他血型分型(Rh、MN分型等)，将来可申购相应试剂对此类试验加以证实。本研究中非ABO型占比为2.20%，高于上述研究结果，可能与近期二胎政策放开，部分稀有血型孕妇从县级医院转入我院待产，亦可能与标本量选取不足有关。在ABO-HDN中，A型高于B型患儿, 原因可能是A型红细胞婴儿遗传的抗原数量高于B型，且与IgG抗体的结合力增强有关[10]。但有国外报道[11]指出，ABO-HDN中母A、B血型对新生儿黄疸的强度没有重大影响，而如果母O-子B不相容，则发生溶血的风险更大，此反应可能与种群有关，提示临床加以关注。
目前，检测HDN的方法主要有试管法和微柱凝胶卡抗人球蛋白技术，运用传统试管法抗人球蛋白技术对NHB患儿进行溶血病种筛查，难度非常大[12]，随着医疗诊断技术的进步，尤其是微柱凝胶卡技术的进步，患儿的溶血病血清检测通过离心机可直接判读，适合在临床治疗中推广[13]。本文通过HDN微柱凝胶卡检测，送检NHB患儿样本215例，确诊97例，其中A型51例、B型44例。发生ABO-HDN的新生儿主要见于A、B型，因为O型孕妇的抗A、抗B多为IgG抗体，这与以往报道[14]相符。A、B型孕妇的抗A、抗B多为IgM, 不能通过胎盘，本试验选取NHB患儿母亲送检标本均为O型，说明我院临床医生在检查三项试验前已做过初步筛除，检测标本更加合理。且患儿标本通过微柱凝胶卡检测，既可适当批量检测，离心后又可直接观察结果，以实现对HDN的及时筛查，从而对其进行更加有效的控制。当前国内有研究[15]显示，NHB联合HDN的血清学检测，尤其是释放试验，对HDN检出率可以显著提高，早期确诊率在45%~59%之间，同时，3种检测方式有所差异，整体上检出率准确性为释放试验>游离试验>直抗试验，这与本文研究结果基本一致。
综上所述，NHB新生儿联合HDN三项试验, 通过微柱凝胶卡快速检测，能及时确诊，从而进行相应的对症治疗，如轻症者可以通过中药、光照、静脉丙球、白蛋白或者血浆提前预防，重症者可采取换血治疗，降低病死率，三项试验值得借鉴与推广。
高胆红素血症新生儿215例抗体检测情况分析
Analysis of the antibody detection in 215 neonates with hyperbilirubinemia
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摘要:
目的对高胆红素血症（NHB）新生儿溶血三项试验抗体检测情况进行分析，探究早期检测的临床意义。 方法对出生3 d内被确诊为NHB的新生儿215例采集静脉血进行血型检测、直抗试验、游离试验和释放试验，并对检测结果进行分析。 结果215例NHB患儿中，共有97例确诊为新生儿溶血病（HDN），其中HDN组A、B、O型占比分别为52.58%（51/97）、45.36%（44/97）和2.20%（2/97），且HDN组和非HDN组A型、B型与O型构成比差异有统计学意义（χ2=61.49，P＜0.01）。三项试验中，释放试验阳性率100%（97/97），游离试验阳性率78.35%（76/97），直抗试验阳性率16.50%（16/97），3种方法检出率差异有统计学意义（χ2=160.04，P＜0.01），释放试验>游离试验>直抗试验。 结论通过HDN微柱凝胶卡快速检测，能及时确诊，从而选取适当方法积极对症治疗。 Abstract:ObjectiveTo analyze the antibody detection results of three hemolysis tests in 215 neonates with hyperbilirubinemia(NHB), and explore the clinical significance of early detection. MethodsThe venous blood in 215 neonates diagnosed with NHB within 3 days after birth were collected, the blood group test, direct resistance test, free test and release test were performed, and the results were analyzed. ResultsAmong 215 children with NHB, 97 cases were diagnosed with hemolytic disease of the newborn(HDN).The percentages of type A, type B and type O in the HDN group were 52.58%(51/97), 45.36%(44/97) and 2.20%(2/97), respectively, and the differences of composition ratio of type A, type B and type O between HDN group and non-HDN group were statistically significant(χ2=61.49, P < 0.01).The positive rates of the release test, free test and direct resistance test were 100%(97/97), 78.35%(76/97) and 16.50%(16/97), respectively.The differences of the detection rates among three methods were statistically significant(χ2=160.04, P < 0.01), and which in release test, free test and direct resistance test gradually decreased in turn. ConclusionsThrough rapid detection of HDN microcolumn gel card, the timely diagnosis can be made, so as to select appropriate methods for positive symptomatic treatment. -
Key words:
- hyperbilirubinemia /
- hemolytic disease of the newborn /
- newborn /
- three hemolysis test
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表 1 215例NHB患儿血清学抗体检查结果
释放试验 游离试验 直抗试验 结果 检出率
[n; 百分率(%)]- - - 阴性 84(39.06) - + + 可疑 3 (1.40) + + + 阳性 16(7.44) + - - 阳性 18(8.37) - - + 可疑 2(0.93) + + - 阳性 63(29.30) - + - 可疑 29(13.49) 
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表 2 215例NHB患儿血清学检查结果[n；构成比(%)]
分组 n A型Rh(+) B型Rh(+) O型Rh(+) χ2 P HDN组
非HDN组97
11851(52.58)
26(22.03)44(45.36)
3(27.97)2(2.20)
59(50)61.49 ＜0.01
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