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丙型肝炎是一种由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)感染引起的病毒性肝炎。据世界卫生组织统计，截至2005年，全球约有1.85亿人感染HCV(约占全球人口的2.8%)，每年新发感染者高达300~400万[1-4]。作为世界上HCV感染人数最多的国家，中国一直面临来自HCV的挑战，包括对HCV认识不全面、早期诊断率和治疗普及率低等问题[5-6]。据有关报道[7]，丙型肝炎已成为继乙型肝炎、肺结核、痢疾之后我国第四大常见感染性疾病。随着医学检验水平的逐步提高，HCV的相关检测技术也取得了很大进步。目前用于丙型肝炎病人的病毒检测方法主要有HCV抗体(anti-HCV antibodies，HCV-Ab)检测、HCV-RNA检测以及HCV核心抗原(hepatitis C core antigen，HCV-cAg)检测等[8]。HCV-cAg检测是20世纪90年代发展起来的新型技术，在丙型肝炎早期诊断中的作用已引起了人们的关注。但HCV-cAg检测能否替代HCV核酸检测成为诊断丙肝的确诊指标尚不清楚。本研究通过分析我院就诊的HCV感染或疑似感染病人血清样本的临床实验结果，以期阐明不同检测指标在丙型肝炎诊断中的临床价值，提高初期检出HCV感染的准确度。现作报道。
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选取2018年8月至2020年3月于我院就诊的门诊和住院疑似丙型肝炎病人，以HCV抗体检测试剂盒(ELISA法)检测其血清样本，共收集初筛结果呈阳性(S/COV≥1.0)的血清样本78例作为观察组，其中男46例，女32例，年龄24~82岁。同期选取健康体检者20名作为对照组，其中男11名，女9名，年龄42~70岁。2组年龄和性别具有可比性。
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所有受检者空腹采集静脉血5 mL，置于促凝管中，1 h内3 000 r/min离心5 min，分离血清，置于-80 ℃冰箱保存。
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HCV-RNA荧光定量PCR试剂盒来自厦门安普利公司，HCV-Ab和HCV-cAg检测采用ELISA法，检测试剂盒分别来自上海科华生物工程股份有限公司和湖南康润药业股份有限公司，丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)水平检测采用底物法，检测试剂盒来自宁波美康；荧光定量PCR仪(GeneLight 2400型，厦门安普利生物工程有限公司)，酶标仪(VRANUS AE95型，深圳爱康)，全自动生化分析仪(DXC800型，贝克曼)，低速离心机(sc-2546型，安徽中科中佳)，超净工作台(Bioaer，航天生物科技有限公司)。
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采用ELISA法检测，按照试剂盒说明书进行操作。HCV-Ab：当S/COV(待测样本和COV比值)≥1.0时，待测样本判定为阳性；HCV-cAg：待测样品的吸光度(OD值)≥阳性判断值(cut off=阴性对照平均OD值+0.06，阴性对照≤0.06时按0.06计算)判定为阳性。
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采用荧光定量PCR法检测，按照丙型肝炎病毒核酸检测试剂盒说明书提取病人血清HCV-RNA，由PCR仪进行扩增。HCV-RNA：待测样本定量值>500 IU/mL判定为阳性。
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血清酶浓度采用底物法检测，标本由全自动生化分析仪检测(操作均按照SOP标准进行，当日室内质控在控，标本在4 h内完成检测)。
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采用t检验、χ2检验和相关分析。
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78例HCV-Ab初筛结果呈阳性病人中，检出HCV-cAg阳性32例(41.0%)，HCV-RNA阳性42例(53.8%)，二者检测结果差异有统计学意义(χ2=10.00，P < 0.01)，有较好的一致性(κ=0.747)(见表 1)。
HCV-cAg HCV-RNA 阳性阴性 合计 阳性 32 0 32 阴性 10 36 46 合计 42 36 78 表 1 观察组病人HCV-cAg与HCV-RNA阳性检出率(n)
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观察组血清ALT、AST和GGT水平均明显高于对照组(P < 0.01)(见表 2)。
分组 n ALT/(IU/L) AST/(IU/L) GGT/(U/L) 对照组 20 11.25±6.04 16.75±3.40 19.25±6.56 观察组 78 50.88±38.64 54.05±46.75 88.74±110.74 t — 4.56 3.55 2.72 P — < 0.01 < 0.01 < 0.01 表 2 2组ALT、AST和GGT水平比较(x±s)
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HCV-RNA阳性病人定量检测结果与ALT、AST和GGT水平均无明显相关性(r=0.062、0.132、0.011，P>0.05)。
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丙型肝炎作为一个全球性的健康安全卫生问题，是导致肝脏疾病的重要原因之一，有较高的致死率，全球每年死于丙型肝炎的人数约有70万[9]。相比公众较为熟知的乙型肝炎，大多数HCV感染者并未表现出明显的临床症状，起病隐匿，容易被忽视，因此早期检测出HCV感染，具有重要意义。
HCV-Ab是HCV感染的常用指标，目前临床常用的检测方法有胶体金法、ELISA法和化学发光免疫分析法。随着抗体检测技术的不断革新，HCV-Ab在早期筛选常规临床丙型肝炎样本方面的表现，特别是敏感性和特异性都有了很大的进步。然而研究[10]证明，现行的抗体检测技术仍有一定的局限性，需要其他检测方法进行补充。HCV作为一种单股正链RNA病毒，属黄病毒科丙型肝炎属，在人体感染HCV 7~14 d后，血清中即可检出HCV-RNA[11]。众所周知，PCR法核酸检测特异性高、窗口期短，能够直接反映HCV在体内的活动性和复制情况，作为丙型肝炎早期诊断和预后的金标准，为HCV病人的病情诊断和治疗监测提供依据。但因核酸检测技术复杂，人员环境等要求较高, 不易大规模推广。HCV-cAg检测是近年来被认为最具潜力和应用前景的检测HCV感染的检测手段之一，通常可在感染的2~3周内检测到，在HCV-RNA出现后即可检出，与HCV-RNA均可以作为丙型肝炎的早期检测指标，与核酸检测相比，HCV-cAg检测耗时短，方法简单，价格便宜，不用添加特殊仪器设备，在常温条件下检测结果稳定，不受环境、人员的影响，便于常规检测，可以弥补抗体及核酸检测的局限性[12-16]。
本研究对78例HCV-Ab初筛结果均呈阳性病人血清样本分别进行HCV-cAg和HCV-RNA检测，得到的阳性检出率分别是41.0%(32/78)和53.8%(42/78)，可见HCV-Ab检测存在一定的假阳性，需要采用HCV-cAg和HCV-RNA检测进行补充实验分析。本研究结果显示，HCV-cAg和HCV-RNA检测结果有较好一致性(κ=0.747)，提示HCV-cAg检测可代替或补充HCV-RNA检测作为早期检出HCV感染的一个实验室指标，这与RUJIPAT等[17]研究相符。
大多数肝脏疾病往往涉及多种肝功能血清指标的异常，如血清总蛋白、白蛋白、ALT、AST、碱性磷酸酶、GGT、总胆红素、直接胆红素等，肝酶的异常表达常提示肝细胞有损伤。本研究中，78例病人中血清ALT、AST和GGT水平均明显高于对照组，且ALT、AST和GGT的异常率分别为51.3%、47.4%和60.3%，提示肝酶可以作为临床医生评估肝功能检查的实验指标。有研究[18-19]表明，血清HCV-RNA病毒载量与ALT、AST和GGT水平呈正相关关系，提示肝细胞损害与HCV病毒血症水平有关。但本研究结果显示，HCV-RNA阳性病人定量检测结果与ALT、AST和GGT均无明显相关性，这可能与样本量不足和所选病例、仪器、试剂等不同有关，因此，有待收集大量样本来确定这种联系。
综上，为提高早期丙型肝炎检测结果的准确率和可靠性，可对肝酶指标异常病人标本采用HCV-Ab与HCV-cAg联合检测，其中可疑样本可再进行HCV-RNA检测，这样不仅可以对早期丙型肝炎进行诊断，及时控制丙型肝炎传播，还可对丙型肝炎不同感染阶段表现作出分析与判断，为丙型肝炎临床分期和病情监测提供有利的技术手段和理论支持。
HCV-cAg与HCV-Ab、HCV-RNA及肝功能之间的关系探讨
Study on the relationship between HCV-cAg, and HCV-Ab, HCV-RNA and liver function
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摘要:
目的探讨丙型肝炎病毒核心抗原（hepatitis C virus core antigen，HCV-cAg）与丙型肝炎病毒RNA（hepatitis C virus RNA，HCV-RNA）关系以及丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酰转肽酶（GGT）水平与HCV-RNA病毒载量之间的相关性。 方法选取78例HCV抗体检测阳性的丙型肝炎或疑似丙型肝炎病人作为观察组，另选取同期健康体检者20名作为对照组。采用ELISA法和荧光定量PCR法等对2组血清样本进行HCV-cAg、HCV-RNA和ALT、AST、GGT水平测定，并比较各参数之间的关系。 结果观察组HCV-cAg阳性检出率为41.0%（32/78），HCV-RNA阳性检出率为53.8%（42/78），差异有统计学意义（P < 0.01），且二者之间具有较好一致性（κ=0.747）。观察组ALT、AST和GGT水平均明显高于对照组（P < 0.01），但与HCV-RNA病毒载量均无明显相关性（P>0.05）。 结论HCV-cAg和HCV-RNA在检测丙型肝炎方面有较好一致性和相关性，可为丙型肝炎的临床诊断提供有价值的依据。 -
关键词:
- 丙型肝炎 /
- 丙型肝炎病毒核心抗原 /
- 丙型肝炎病毒RNA /
- 病毒载量
Abstract:ObjectiveTo investigate the relationship between hepatitis C virus core antigen(HCV-cAg) and hepatitis C virus RNA(HCV-RNA), and association between levels of alanine aminotransferase(ALT), aspartate aminotransferase(AST) and glutamyl transpeptidase(GGT), and HCV-RNA viral load. MethodsSeventy-eight patients with positive HCV antibody or suspected hepatitis C were divided into the observation group, and another 20 healthy examinees were set as the control group during the same period.The serum levels of HCV-cAg, HCV-RNA, ALT, AST and GGT in two groups were determined by ELISA and fluorescence quantitative PCR, and the relationship among the above parameters were compared. ResultsIn the observation group, the positive detection rate of HCV-cAg was 41.0%(32/78), the positive detection rate of HCV-RNA was 53.8%(42/78), the difference of which was statistically significant(P < 0.01), and there was a good consistency between the two groups(κ=0.747).The levels of ALT, AST and GGT levels in observation group were significantly higher than those in control group(P < 0.01), but there was no significant correlation with HCV RNA viral load(P>0.05). ConclusionsThe HCV-cAg and HCV-RNA have good consistency and correlation in the detection of hepatitis C, and can provide valuable basis for the clinical diagnosis of hepatitis C. -
Key words:
- hepatitis C /
- hepatitis C virus core antigen /
- hepatitis C virus RNA /
- viral load
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表 1 观察组病人HCV-cAg与HCV-RNA阳性检出率(n)
HCV-cAg HCV-RNA 阳性阴性 合计 阳性 32 0 32 阴性 10 36 46 合计 42 36 78 
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表 2 2组ALT、AST和GGT水平比较(x±s)
分组 n ALT/(IU/L) AST/(IU/L) GGT/(U/L) 对照组 20 11.25±6.04 16.75±3.40 19.25±6.56 观察组 78 50.88±38.64 54.05±46.75 88.74±110.74 t — 4.56 3.55 2.72 P — < 0.01 < 0.01 < 0.01
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