病理确诊为上皮性卵巢癌的病人70例，其中 < 50岁28例，≥50岁42例；临床分期：Ⅰ~Ⅱ期31例，Ⅲ~Ⅳ期39例；病理类型：高级别浆液性乳头状癌44例，非高级别浆液性乳头状癌26例；具有家族遗传性16例，无家族遗传性54例；铂敏感病人59例，铂耐药病人11例。

人类BRCA1/2基因突变检测试剂盒(HANDLE System)，DNA提取试剂盒(厦门艾德生物医药科技股份有限公司生产)、Illumina测序试剂、普通PCR仪、磁力架、片段分析仪、凝胶电泳系统、核酸定量仪、掌上离心机、漩涡混合仪。

采取上皮性卵巢癌病人外周血2 mL，严格按照《DNA提取操作规程》进行DNA分离，分离完毕后按照Qubit.2.0 Fluorometer标准操作规程，对DNA样本的dsDNA浓度进行检测，并记录浓度。

首先将引物(厦门艾德生物医药科技股份有限公司生产)涡旋混匀，短暂离心，然后将PCR反应管置于PCR仪上进行扩增，PCR设置体积为50 μL，98 ℃ 30 s预变性，98 ℃ 10 s变性，61 ℃ 10 s退火，72 ℃ 20 s延伸，25个循环，后72 ℃延伸5 min，4 ℃保存。最后运用磁力架对PCR产物进行纯化。

首先对纯化后的文库进行浓度质控和质量质控，然后使用illumina公司的Cartridge和Flow cell对文库进行二代测序，使用厦门艾德生物信息分析系统对测序结果进行分析，得到BRCA1基因和BRCA2基因的突变结果，最后对测序结果进行人工复核。

采用t′检验和χ²检验。

70例上皮性卵巢癌病人中，出现BRCA1/2基因致病性突变的病人共计20例，总占比28.5%。BRCA1突变16例占22.85%(16/70)，BRCA2突变4例占5.71%(4/70)。其中移码突变12例，无义突变8例。外显子11突变8例占40%，在BRCA1中11号外显子突变7例，其中2例为981-982位删除AT后出现一个终止密码子，翻译终止(序号6)，2例1504-1508位删除TTAAA后，502位的L(亮氨酸)突变为A(丙氨酸)，并在突变位点之后2个氨基酸处终止翻译(序号11)，1例2138位的C(半胱氨酸)突变为G(丙氨酸)，并形成了终止密码，翻译终止(序号11)，2例为c.4801A>T的无义突变(序号14)。在BRCA2中11号外显子突变1例，为4065-4068位删除TACC后，1355位的N(天冬氨酸)突变为K(赖氨酸)，并在突变位点之后10个氨基酸处终止翻译(序号10)。临床数据表明，在BRCA1/2突变的病人中，BRCA1基因中11号外显子突变频率较高，该外显子或许是一个潜在的突变热点区域。20种BRCA1、BRCA2基因致病突变情况见表 1及图 1~4。

图  1  BRCA1外显子11:C.981_ 982delAT: P.C328*无义突变

图  2  BRCA2外显子23 : c.9097_ 9098insA: p.T3033nfs*11移码突变

图  3  BRCA1外显子24:c. 5470_ 5477del8:p.I1824Dfs*3移码突变

图  4  BRCA2外显子14:c.7389_ 7392delTCAA: P.N2463Kfs*3移码突变

研究结果发现BRCA1/2致病性突变组高级别浆液性乳头状癌发生率、对铂类治疗药物敏感率、有家族史率均高于未突变组(P < 0.05~P < 0.01)，2组年龄和临床分期比较差异无统计学意义(P>0.05)(见表 2)。

1990年和1994年，研究者先后发现了2种与乳腺癌存在密切相关性的基因。这两种基因，根据发现的先后，分别命名为乳腺癌1号和2号基因，即本文研究的BRCA1/2；2种基因均属于抑癌基因，其编码的蛋白通过同源重组通路参与DNA双链损伤的修复，控制DNA损伤应答、调节DNA转录和染色体重组以诱发凋亡等方式从而抑制肿瘤^[5-6]。当2种基因发生突变，它们会产生无效蛋白，导致细胞发生变性及恶化。

在与此基因突变的相关人群当中，其罹患卵巢癌的风险明显增加。正常妇女罹患卵巢癌的风险为1.4%，BRCA1基因突变携带者到70岁时发生卵巢癌的机率为40%~60%, BRCA2基因携带者的概率为10%~20%^[7]。卵巢癌的传统治疗模式为手术、化疗、复发、再治疗、再复发，最后多线治疗直至病人死亡。超过80%的晚期卵巢癌病人在经过一线治疗后会复发，且每次复发后，病人的疾病无进展生存时间(progression-free survival，PFS)会不断缩短^[8]。卵巢癌病人复发与铂耐药密切相关，化疗缓解至复发的时间越长，再次铂化疗反应率越高^[9]。人们在能否延长无铂间期的问题上付出了较多努力，并且提出了癌症的维持治疗^[10]。所谓的维持治疗，主要是指癌症病人在通过合理的方式，接受初始治疗以后，相关的症状已经得到一定程度的缓解，但是为了能够进一步抑制其日后复发，而采取的系列维持治疗^[11-12]。

经过长期的探索及实验，PARP抑制剂翻开了卵巢癌维持治疗的新篇章。奥拉帕利是全球第一个获批上市的PARP抑制剂^[13]，著名两大Ⅲ期临床实验SOLO1^[14]、SOLO2^[15]，发现奥拉帕利作为一线及二线维持治疗药物可明显延长BRCA突变的初治及铂敏感复发卵巢癌病人的PFS，降低疾病进展或死亡风险。这两项著名研究的提出为卵巢癌病人的治疗提供了新的方向，但是也指出了PARP抑制剂的准确受益人群依赖BRCA基因检测。PARP抑制剂对BRCA基因突变的上皮性卵巢癌病人表现出了显著的效果，并在2020年NCCN指南中提出了完善BRCA检测将有宜于卵巢癌整个一线治疗模式的选择。

本研究选择蚌埠医学院第一附属医院自2018年1月至2019年1月收治经手术确诊的70例上皮性卵巢癌病人，通过二代测序方法，对每个病人进行BRCA1/2基因检测，了解相关的突变情况。探究病人是否在年龄、临床分期、病理类型、家族遗传性、铂敏感性之间有相关性。结果显示上皮性卵巢癌病人中，BRCA1/2突变占有较高比例，占28.5%，其中BRCA1 16例，BRCA2 4例，提示了对BRCA1/2基因检测可评估罹患卵巢癌风险程度。ROY等^[16]指出，BRCA1/2为乳腺癌的易感基因，其最常见的突变类型是无义突变和移码突变，而且会以常染色体显性遗传的方式传给子代；本研究中，20例卵巢癌致病突变病人移码突变12例，无义突变8例，与之研究结果一致。HALL等^[17]指出，BRCA1/2在不同人种间突变率及突变位点具有明显差异，本研究中外显子11突变8例，突变率较高占40%，说明11号外显子可能为卵巢癌BRCA1/2基因突变的突变热点。有研究^[18]指出，BRCA基因突变的卵巢癌病人普遍比未突变病人年轻，并且与种族有关，犹太女性BRCA突变的可能性是普通人群的10倍。在本研究中，BRCA1/2突变组的年龄普遍低于未突变组，但差异并无统计学意义。YOU等^[19]对172例中国上皮性卵巢癌病人的BRCA1/2突变进行检测，研究了BRCA突变状态对中国上皮性卵巢癌病人生存结果的影响。研究中表明与其他病理类型病人相比，高级别浆液性癌病人存在更多的致病性突变，本研究结果与之显示一致，此项结果代表了BRCA1/2突变卵巢癌病人肿瘤的恶性程度及复发风险可能相对较高。但BRCA1/2突变的病人表现出了对铂类药物治疗的敏感性，与PENNINGTON等^[20]的研究结果相同，这一结果对卵巢癌的治疗效果评价具有指导作用。另外BRCA1/2卵巢癌病人基因突变与否与病人家族史有关，基因突变的病人具有一定的家族遗传性，通过BRCA检测，能够有效地筛查和评估病人的家族遗传性突变情况。同时，可以对病人家属的卵巢癌的患病风险情况进行评估。随着针对BRCA基因突变病人治疗方法的出现，精准治疗会越来越普及，对所有患有高级别浆液性卵巢癌病人进行基因检测，该人群的治疗效果将会有所改善，因此，了解BRCA状况有助于为治疗决策提供依据。