microRNA-34a与乳腺癌的临床病理相关性研究

赵艳丽; 刘钊; 张家新; 王人颢; 刘志毅; 田子路; 刘斌

doi:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2021.10.022

留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名

邮箱

手机号码

标题

留言内容

验证码

microRNA-34a与乳腺癌的临床病理相关性研究

徐州医科大学研究生院, 江苏徐州 221004

徐州医科大学附属医院普通外科, 江苏徐州 221006

作者简介: 赵艳丽(1990-), 女, 硕士, 主治医师

通讯作者: 刘斌, xyfyzlwk@163.com

中图分类号: R737.9

Study on the correlation between microRNA-34a level and clinicopathology of breast cancer

School of Graduate, Xuzhou Medical University, Xuzhou Jiangsu 221004

Department of General Surgery, The Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University, Xuzhou Jiangsu 221006, China

Corresponding author: LIU Bin, xyfyzlwk@163.com

CLC number: R737.9

摘要: 目的检测microRNA-34a（miR-34a）在乳腺癌与相应正常组织中的表达情况，研究miR-34a与乳腺癌的临床病理相关性。方法应用qRT-PCR技术检测67例乳腺癌标本中miR-34a的表达，同时分析其和临床病理因素之间的相关性。结果乳腺癌组织中miR-34a的表达量明显低于配对的癌旁组织（P < 0.01）；年龄、性别、月经状况、孕激素受体水平、Ki67表达与人类表皮生长因子受体水平对病人癌组织miR-34a的表达影响均无统计学意义（P>0.05）；肿块直径、淋巴结转移、病理类型、临床分期、雌激素受体水平、是否三阴性对对病人癌组织miR-34a的表达影响均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01），肿块直径≤2 cm组的表达高于直径>2 cm组（P < 0.05），淋巴结无转移组的表达高于有转移组（P < 0.05），非浸润性组的表达高于浸润性（P < 0.05），Ⅰ期组和Ⅱ期组的表达均高于Ⅲ+Ⅳ期组（P < 0.01），雌激素受体阳性组的表达高于阴性（P < 0.01），三阴性组的表达低于非三阴性组（P < 0.01）。结论乳腺癌中miR-34a呈现低表达，与各临床病理因素分析后表明其可能在乳腺癌的发生发展及预后中起重要作用。

Abstract: Objective To detect the expression levels of microRNA-34a(miR-34a) in breast cancer and corresponding normal tissues, and study the correlation between miR-34a and clinicopathology of breast cancer. Methods The expression levels of miR-34a in 67 breast cancer specimens were detected using qRT-PCR technology, and analyze the correlation between it and clinicopathological factors. Results The expression level of miR-34a in breast cancer tissue was significantly lower than that in matched adjacent tissue(P < 0.01).The differences of the expression levels of miR-34a in cancer tissues among the patients with different ages, sex, menstrual status, progesterone receptor levels, Ki67 expression and human epidermal growth factor receptor levels were not statistically significant(P>0.05).The differences of the expression levels of miR-34a in cancer tissues tumor among the patients with different tumor diametec lymph node metastasis, pathological type, clinical stage, estrogen receptor(ER) level and triple negative were statistically significant(P < 0.05 to P < 0.01).The expression level of miR-34a in tumor diameter ≤ 2 cm group was higher than that in tumor diameter >2 cm group(P < 0.05), the expression level of miR-34a in lymph node without metastasis group was higher than that in lymph node with metastasis group(P < 0.05), and the expression level of miR-34a in non-invasive group was higher than that in invasive group(P < 0.05).The expression level of miR-34a in stage Ⅰ and Ⅱ groups were higher than that in Ⅲ+Ⅳ group(P < 0.01).The expression level of miR-34a in positive ER group was higher than that in negative ER group(P < 0.01), and the expression level of miR-34a in triple negative group was lower than that in non-triple negative group(P < 0.01). Conclusions The expression level of miR-34a in breast cancer is low, and the analysis results of various clinical and pathological factors indicates that it may play an important role in the development and prognosis of breast cancer.

Key words:

breast neoplasms /
microRNA-34a /
real-time fluorescent quantitative PCR /
Ki67

分组

miR-34a的表达

年龄/岁

≤50
>50

41
26

0.376(0.191~0.737)
0.587(0.359~0.962)

0.63

>0.05

性别

女
男

66
1

0.423(0.267~0.824)
4.112

0.39

>0.05

月经状况

绝经前
绝经后

45
21

0.868(0.642~0.940)
0.901(0.792~0.993)

0.81

>0.05

肿块直径/cm

≤2
>2

33
34

0.908(0.800~0.954)
0.835(0.516~0.936)

2.08

< 0.05

淋巴结转移

有
无

21
46

0.732(0.531~0.901)
0.904(0.761~0.959)

2.91

< 0.05

病理分型

非浸润性癌

0.812(0.584~4.955)

2.36

< 0.05

浸润性癌

0.384(0.246~0.793)

黏液腺癌

0.853

临床分期

Ⅰ

0.920(0.824~0.956)

2.19

< 0.01

Ⅱ

0.865(0.697~0.993)

Ⅲ+Ⅳ

0.617(0.404~0.880)

阳
阴

56
11

0.898(0.688~0.946)
0.603(0.441~0.841)

2.15

< 0.01

阳
阴

51
16

0.895(0.732~0.953)
0.834(0.466~0.924)

0.79

>0.05

Ki67

低表达(≤15%)
高表达(>15%)

29
38

0.895(0.750~0.943)
0.838(0.589~0.948)

0.84

>0.05

HER-2

阳
阴

16
51

0.895(0.835~0.940)
0.859(0.688~0.946)

0.73

>0.05

三阴性

是
否

8
59

0.463(0.289~0.603)
0.895(0.749~0.951)

2.25

< 0.01

microRNA-34a与乳腺癌的临床病理相关性研究

通讯作者: 刘斌, xyfyzlwk@163.com

作者简介: 赵艳丽(1990-), 女, 硕士, 主治医师

1. 徐州医科大学研究生院, 江苏徐州 221004

2. 徐州医科大学附属医院普通外科, 江苏徐州 221006

收稿日期: 2020-04-25

录用日期: 2020-10-04

网络出版日期: 2021-10-15

关键词:

Study on the correlation between microRNA-34a level and clinicopathology of breast cancer

Corresponding author: LIU Bin, xyfyzlwk@163.com

1. School of Graduate, Xuzhou Medical University, Xuzhou Jiangsu 221004

2. Department of General Surgery, The Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University, Xuzhou Jiangsu 221006, China

Received Date: 2020-04-25

Accepted Date: 2020-10-04

Available Online: 2021-10-15

全文HTML

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，到2030年，我国的女性乳腺癌发病人数预计达到23.4万，而因患乳腺癌致死的人数将达到7万人以上^[1]。据2019年美国癌症协会的最新报道称，乳腺癌在女性恶性肿瘤中发病率仍为最高^[2]，因此，对于寻找乳腺癌的特异分子指标尤为重要。microRNA(miRNA)主要通过与靶基因结合抑制其表达，进而参与调节细胞的增殖及迁移侵袭能力^[3]，由此miRNA受到人们的关注，同时也是对miRNA功能深入研究的开端^[4-5]。目前在几乎所有恶性肿瘤中都发现miRNA的表达异常，认为其在肿瘤的发生发展中扮演重要的角色^[6]。miR-34基因最早被发现于秀丽隐杆线虫中^[7]，miR-34a可以靶向和调节Fra-1、LMTK3、Bcl-2、Notch等许多乳腺癌病人体内的基因，提示miR-34a与乳腺癌的发病机制可能有关，miR-34a的失活或缺失可能与肿瘤的发生有关。因此，研究miR-34a在乳腺癌中的表达及其与临床病理的关系，可以进一步探讨其临床意义，为乳腺癌的预后及治疗提供依据。

1. 资料与方法

1.1. 一般资料

确诊为乳腺癌并实施手术治疗的67例病人的标本组织，其中非浸润性癌5例、浸润性癌61例和特殊类型癌1例；根据2017年美国癌症联合委员会(AJCC)第8版癌症分期系统TNM分期标准，临床分期分为Ⅰ期24例，Ⅱ期32例，Ⅲ期10例，Ⅳ期1例。

1.2. 技术路线

以确诊为乳腺癌的67例病人的癌组织和癌旁正常组织标本为研究对象，应用qRT-PCR检测miR-34a的表达，最后检测miR-34a与乳腺癌临床病理参数的相关性。

1.3. 标本收集

根据术前彩超结果，疑似乳腺癌者，取肿瘤组织以及相应的距肿瘤边缘5 cm以上的正常组织，放存液氮中，病理结果确诊后，舍弃不能入组者，入组标本置入-80 ℃冰箱冻存，同时记录临床资料备病理査询和后续统计分析。入组标准：(1)手术病理明确诊断为乳腺癌；(2)临床病理资料完整；(3)未合并其他恶性肿瘤；(4)术前未行新辅助化疗、放疗、内分泌及靶向治疗。排除标准：(1)手术病理非乳腺癌；(2)临床病理资料不完整；(3)术前已经行新辅助化疗、放疗、内分泌及靶向治疗。

1.4. 方法

Trizol一步法提取RNA，用紫外线分光光度计测量RNA的纯度，采取纯度比率在1.8~2.0之间的样本进行逆转录反应、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)。U6作为内参对照，ΔCt＝Ct(miR-34a)-Ct(U6)，ΔΔCt=ΔCt(乳腺癌)-ΔCt(正常组织), 利用公式F=2^-ΔΔCt计算得出组织中miR-34a的差异倍数。

三阴性乳腺癌判断标准：根据免疫组织化学的结果，癌组织免疫组织化学检查结果中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人类表皮生长因子受体(HER-2)均呈阴性的乳腺癌，其中HER-2阳性定义为免疫组织化学结果为3+或ISH检测阳性。

1.5. 统计学方法

采用Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallis H检验和配对设计的Wilcoxon符号秩和检验。

2. 结果

2.1. 乳腺组织中miR-34a的表达

比较2^-△Ct癌和2^-△Ct正常组织，其中ΔCt癌＝[Ct(miR-34a)-Ct(U6snRNA)]癌，ΔCt正常组织=[(Ct(miR-34a)-Ct(U6snRNA)]正常组织，癌组织的中位数0.042，四分位间距0.024~0.095；正常组织的中位数为0.114，四分位间距0.058~0.155；乳腺癌组织中的miR-34a的表达量明显低于相应正常组织中的表达量(t=4.26，P < 0.01)。

2.2. miR-34a的表达与临床病理联系

年龄、性别、月经状况、PR水平、Ki67表达与HER-2水平对病人癌组织miR-34a的表达影响均无统计学意义(P>0.05);肿块直径、淋巴结转移、病理类型、临床分期、ER水平、是否三阴性对对病人癌组织miR-34a的表达影响均有统计学意义(P < 0.05~P < 0.01)，肿块直径≤2 cm组的表达高于直径>2 cm组(P < 0.05)，淋巴结无转移组的表达高于有转移组(P < 0.05)，非浸润性组的表达高于浸润性(P< 0.05)，Ⅰ期和Ⅱ期组的表达均高于Ⅲ+Ⅳ期组(P < 0.01)，ER阳性组的表达高于阴性(P < 0.01)，三阴性组的表达低于非三阴性组(P < 0.01)(见表 1)。

分组	n	miR-34a的表达	Z	P
年龄/岁
≤50 >50	41 26	0.376(0.191~0.737) 0.587(0.359~0.962)	0.63	>0.05
性别
女男	66 1	0.423(0.267~0.824) 4.112	0.39	>0.05
月经状况
绝经前绝经后	45 21	0.868(0.642~0.940) 0.901(0.792~0.993)	0.81	>0.05
肿块直径/cm
≤2 >2	33 34	0.908(0.800~0.954) 0.835(0.516~0.936)	2.08	< 0.05
淋巴结转移
有无	21 46	0.732(0.531~0.901) 0.904(0.761~0.959)	2.91	< 0.05
病理分型
非浸润性癌	5	0.812(0.584~4.955)	2.36	< 0.05
浸润性癌	61	0.384(0.246~0.793)
黏液腺癌	1	0.853
临床分期
Ⅰ	24	0.920(0.824~0.956)	2.19	< 0.01
Ⅱ	32	0.865(0.697~0.993)
Ⅲ+Ⅳ	11	0.617(0.404~0.880)
ER
阳阴	56 11	0.898(0.688~0.946) 0.603(0.441~0.841)	2.15	< 0.01
PR
阳阴	51 16	0.895(0.732~0.953) 0.834(0.466~0.924)	0.79	>0.05
Ki67
低表达(≤15%) 高表达(>15%)	29 38	0.895(0.750~0.943) 0.838(0.589~0.948)	0.84	>0.05
HER-2
阳阴	16 51	0.895(0.835~0.940) 0.859(0.688~0.946)	0.73	>0.05
三阴性
是否	8 59	0.463(0.289~0.603) 0.895(0.749~0.951)	2.25	< 0.01

表 1 miR-34a表达与乳腺癌临床病理参数之间关系[M，(P₂₅~P₇₅)]

3. 讨论

乳腺癌早期多表现为乳房肿块、乳头和乳晕改变，晚期癌细胞可发生远处转移，引起多器官病变，严重危害病人的身心健康，因此深入研究乳腺癌的分子机制，找到有效的检测指标，为治疗提供依据，可以延缓病人的生命甚至达到治愈。近年随着分子生物学研究的深入，越来越多的与肿瘤发生发展相关的信号分子被发现，研究报道几种特定的miRNA可以作为潜在的预测性生物标志物^[8]。肿瘤抑制因子p53是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因，因此也一直作为研制抗癌药的靶点^[9]，肿瘤抑制因子p53可以直接调控miR-34a^[10]，并且研究证明miR-34a是可以通过靶向调节与细胞周期停滞和凋亡相关的一系列基因，在决定细胞命运中起关键作用^[11]。因此，miR-34a可以作为一种新的生物指标，为乳腺癌在临床中的诊断及治疗进提供依据。

本研究中，miR-34a的表达与肿瘤病理分型、直径、淋巴结转移、TNM分期、ER及三阴性表达有关(P < 0.05~P < 0.01)，表明miR-34a的表达与乳腺癌的发生、发展及预后有关，并且可作为一种新的生物标志物，为乳腺癌的治疗提供新的方案和依据，甚至是靶向治疗提供分子基础。miR-34a在男、女中表达出现明显差异，但由于病例数少，差异无统计学意义，但可为后续实验提供实验思路，分析男性、女性乳腺癌病人中miR-34的表达情况，从而找出性别中表达差异，为乳腺癌的预防和治疗提供帮助。

参考文献 (11)

[1]	DESANTIS CE, MA J, GAUDET MM, et al. Breast cancer statistics, 2019[J]. CA, 2019, 69(6): 438.
[2]	何明艳. 乳腺癌流行趋势分析与术后放疗效应研究[D]. 衡阳: 南华大学, 2019.
[3]	SIEMENS H, JACKSTADT R, KALLER M, et al. Repression of c-Kit by p53 is mediated by miR-34 and is associated with reduced chemoresistance, migration and stemness[J]. Oncotarget, 2016, 4(9): 1399.
[4]	LEE RC, FEINBAUM RL, AMBROS V. The C. elegans heterochronic gene lin-4 encodes small RNAs with antisense complementarity to lin-14[J]. Cell, 2015, 75(5): 843.
[5]	LEWIS BP, BURGE CB, BARTEL DP. Conserved seed pairing, often flanked by adenosines, indicates that thousands of human genes are microRNA targets[J]. Cell, 2015, 120(1): 15.
[6]	MISSO G, DI MARTINO MT, DE ROSA G, et al. Mir-34: a new weapon against cancer?[J]. Mol Ther Nucleic Acids, 2014, 3(9): 194.
[7]	ZENG L, FEE BE, RIVAS MV, et al. Adherens junctional associated protein-1: a novel 1p36 tumor suppressor candidate in gliomas (Review)[J]. Int J Oncol, 2014, 45(1): 13. doi: 10.3892/ijo.2014.2425
[8]	CAMPOS-PARRA AD, MITZNAHUATL GC, PEDROZA-TORRES A, et al. Micro-RNAs as potential predictors of response to breast cancer systemic therapy: future clinical implications[J]. Int J Mol Sci, 2017, 18(6): 1182. doi: 10.3390/ijms18061182
[9]	SHIMADA S, AKIYAMA Y, MOGUSHI K, et al. Identification of selective inhibitors for diffuse-type gastric cancer cells by screening of annotated compounds in preclinical models[J]. Br J Cancer, 2018, 118(7): 972. doi: 10.1038/s41416-018-0008-y
[10]	ROKAVEC M, LI H, JIANG L, et al. The p53/miR-34 axis in development and disease[J]. J Mol Cell Biol, 2015, 6(3): 214.
[11]	HERMEKING H. The miR-34 family in cancer and apoptosis[J]. Cell Death Differ, 2016, 17(2): 193.

[1]	阳宁静 , 任静 , 李吉满 . 乳腺癌Ⅰ、Ⅱ组淋巴结Ki67定性、定量表达差异及相关分析. 蚌埠医学院学报, 2018, 43(9): 1125-1128,1133. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2018.09.002
[2]	于东红 , 周蕾 , 郭冰沁 , 承泽农 , 王萍 . MMP-2、Ki67在食管癌中的表达及与肿瘤增殖、转移的关系. 蚌埠医学院学报, 2005, 30(5): 383-385.
[3]	叶国柳 , 席玉玲 , 凌斌 , 赵卫东 , 承泽农 . Skp2和Ki67在子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义. 蚌埠医学院学报, 2011, 36(4): 350-353.
[4]	傅晓艳 . 乳腺癌Ki-67抗原表达与腋淋巴结转移和组织学分级的关系. 蚌埠医学院学报, 2005, 30(1): 17-19.
[5]	李婷婷 , 江浩 . KISS1基因激活ERK1/2磷酸化通路抑制鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的研究. 蚌埠医学院学报, 2018, 43(10): 1343-1350. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2018.10.018
[6]	阮吟 , 石彦 , 宁艳 , 孙医学 . 常规超声BI-RADS分类结合实时剪切波弹性成像对三阴性乳腺癌的诊断价值. 蚌埠医学院学报, 2020, 45(5): 630-633. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2020.05.020
[7]	胡会华 , 周士福 . 乳腺X线与高频彩色多普勒超声术前评估乳腺肿瘤大小的应用价值. 蚌埠医学院学报, 2016, 41(10): 1350-1352. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.10.029
[8]	谢坤杰 . 肿瘤标志物联合检测诊断乳腺癌58例. 蚌埠医学院学报, 2013, 37(8): 1028-1029.
[9]	刘臣彪 , 陈昌杰 , 章尧 , 章菊 , 杨清玲 , 王惠 . 葡萄籽提取物抑制乳腺癌细胞生长的实验研究. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(4): 277-280.
[10]	沈中一 . 乳腺癌患者血清癌抗原153与恶性肿瘤特异性生长因子的检测分析. 蚌埠医学院学报, 2012, 36(2): 198-199.
[11]	许涛 , 章锐 . 不同手术入路对乳腺癌改良根治术后肿瘤控制效果及安全性的影响研究. 蚌埠医学院学报, 2021, 46(3): 320-324. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2021.03.011
[12]	张琼 , 朱玉兆 . c-erbB-2、p53、PCNA、ER、PR及TopoⅡ在乳腺癌的表达及其临床意义. 蚌埠医学院学报, 2006, 31(5): 447-450.
[13]	年峰 , 彭开桂 . 乳腺癌转移抑制基因在肿瘤中的研究进展. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(3): 318-321.
[14]	王玲玲 , 顾素英 , 杨菊萍 , 高之振 . 乳腺叶状肿瘤的临床及数字化X线征象分析. 蚌埠医学院学报, 2012, 36(1): 77-79.
[15]	任云 , 黄广岩 , 宋兴广 , 葛畅 . 肿瘤标志物联合检测在乳腺癌临床诊断中的应用. 蚌埠医学院学报, 2017, 42(7): 871-874. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2017.07.010
[16]	李艳 , 崔珍 , 李玲玲 , 王效静 , 李多杰 . 乳腺癌病人循环肿瘤细胞检测的临床意义. 蚌埠医学院学报, 2017, 42(10): 1318-1320,1323. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2017.10.007
[17]	单宏杰 , 肖迎利 , 马骖 , 谢长华 , 封杨 , 夏艳 . 肿瘤间质比在乳腺癌预后评估中的价值研究. 蚌埠医学院学报, 2019, 44(12): 1631-1633. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2019.12.015
[18]	陈结云 , 汤庆 . 超声弹性成像技术与彩色多普勒血流显像结合诊断乳腺肿瘤的对比评价. 蚌埠医学院学报, 2015, 40(6): 784-786. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2015.06.028
[19]	胡敏 , 吴强 , 汤华阳 . 乳腺恶性肌上皮瘤的病理诊断. 蚌埠医学院学报, 2007, 32(5): 595-596.
[20]	孟祥荣 , 孙海岩 . 乳腺癌钼靶X线征象分析. 蚌埠医学院学报, 2007, 32(5): 609-611.

留言板