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结肠癌是世界上最高发的恶性肿瘤之一,尽管外科手术治疗取得一定进展,但其死亡率一直居高不下,对于晚期及转移性结肠癌,多学科的综合治疗是其重要手段,其中靶向治疗越来越受到关注[1-3]。研究[4]表明circRNA参与调控结肠癌的进展,可作为潜在的生物标志物,为结肠癌提供潜在的治疗靶点。circ_0000515位于chr14:20811305-20811534,又名circRPPH1,circ_0000515低表达与宫颈癌病人预后良好相关;circ_0000515充当miR-326海绵通过上调ELK1促进宫颈癌的进展[5]。circRPPH1在体内促进乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和血管生成以及肿瘤生长[6]。然而circ_0000515对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响及机制尚不清楚。研究[7-8]报道上调的miR-1258可抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移。miR-1258上调显著抑制骨肉瘤细胞增殖,并促进细胞周期停滞在G0/G1[9]。circ_0101432通过靶向miR-1258和miR-622并上调MAPK1表达来抑制肝癌细胞凋亡,促进细胞增殖,侵袭能力和肿瘤生长[10]。然而circ_0000515是否通过调控miR-1258影响结肠癌细胞增殖和凋亡尚不清楚。
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与癌旁组织比较,结肠癌组织中circ_0000515表达水平升高,miR-1258表达水平降低,差异均有统计学意义(P < 0.01)(见表 1)。
分组 n circ_0000515 miR-1258 癌旁组织 41 1.00±0.07 1.00±0.07 结肠癌组织 41 3.90±0.24 0.33±0.03 t — 78.17 67.49 P — < 0.01 < 0.01 表 1 circ_0000515和miR-1258在结肠癌组织中的表达(x±s)
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与si-NC组比较,si-circ_0000515组circ_0000515表达水平降低,SW620细胞活性降低,SW620细胞的凋亡率升高,SW620细胞中Ki-67、Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平升高,差异均有统计学意义(P < 0.01)(见图 1、表 2)。
分组 n circ_0000515 OD值(450 nm) 凋亡率/% Ki-67蛋白 Bcl-2蛋白 Bax蛋白 si-NC 9 1.00±0.07 0.84±0.06 7.16±0.65 0.72±0.05 0.61±0.04 0.16±0.02 si-circ_0000515 9 0.36±0.03 0.48±0.04 25.90±2.08 0.32±0.03 0.26±0.03 0.59±0.04 t — 25.21* 14.98 25.80* 20.58 21.00 28.85 P — < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 *示t′值 表 2 抑制circ_0000515表达对结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响(x±s)
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Circular RNA Interactome预测显示circ_0000515的序列中含有与miR-1258互补的核苷酸序列(见图 2);miR-1258与WT-circ_0000515共转染的SW620细胞荧光素酶活性降低,差异有统计学意义(P < 0.01),而与MUT-circ_0000515共转染的SW620细胞荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)(见表 3)。过表达circ_0000515后miR-1258表达水平降低,抑制circ_0000515表达后miR-1258表达水平升高,差异均有统计学意义(P < 0.05)(见表 4)。
分组 n WT-circ_0000515 MUT-circ_0000515 miR-NC 9 0.99±0.05 0.97±0.06 miR-1258 9 0.42±0.04 1.00±0.07 t — 26.71 0.98 P — < 0.01 >0.05 表 3 双荧光素酶报告实验(x±s)
分组 n miR-1258 pcDNA 9 1.00±0.06 pcDNA-circ_0000515 9 0.33±0.03* si-NC 9 0.99±0.06 si-circ_0000515 9 2.74±0.21# F — 734.64 P — < 0.01 MS组内 — 0.013 q检验:与pcDNA组比较*P < 0.05;与si-NC组比较#P < 0.05 表 4 circ_0000515调控miR-1258的表达(x±s)
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与miR-NC组比较,miR-1258组miR-1258表达水平升高,SW620细胞活性降低,SW620细胞的凋亡率升高,SW620细胞中Ki-67、Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平升高,差异均有统计学意义(P < 0.01)(见图 3、表 5)。
分组 n miR-1258 OD值(450 nm) 凋亡率/% Ki-67蛋白 Bcl-2蛋白 Bax蛋白 miR-NC 9 1.00±0.06 0.87±0.05 6.87±0.55 0.74±0.05 0.64±0.05 0.13±0.02 miR-1258 9 3.40±0.29 0.53±0.04 19.98±1.89 0.39±0.03 0.33±0.03 0.52±0.04 t — 24.31* 15.93 19.98* 18.01 15.95 26.16 P — < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 *示t′值 表 5 过表达miR-1258对结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响(x±s)
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与si-circ_0000515+anti-miR-NC组比较,si-circ_0000515+anti-miR-1258组miR-1258表达水平降低,SW620细胞活性升高,SW620细胞的凋亡率降低,SW620细胞中Ki-67、Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低,差异均有统计学意义(P < 0.01)(见图 4、表 6)。
分组 n miR-1258 OD值(450 nm) 凋亡率/% Ki-67蛋白 Bcl-2蛋白 Bax蛋白 si-circ_0000515+anti-miR-NC 9 1.00±0.05 0.46±0.04 27.35±2.23 0.30±0.02 0.25±0.02 0.60±0.04 si-circ_0000515+anti-miR-1258 9 0.29±0.03 0.73±0.06 11.84±1.17 0.64±0.05 0.48±0.04 0.27±0.02 t — 36.53 11.23 18.48 18.94 15.43 22.14 P — < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 表 6 干扰miR-1258表达逆转了抑制circ_0000515表达对结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的作用(x±s)
circ_0000515靶向miR-1258调控结肠癌细胞增殖和凋亡的机制研究
Effect of circ_0000515 targeting miR-1258 on the proliferation and apoptosis in the colon cancer cells
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摘要:
目的探讨circ_0000515调控结肠癌细胞增殖和凋亡的分子机制。 方法选取41例结肠癌病人癌组织及癌旁组织标本,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circ_0000515和miR-1258的表达水平;结肠癌细胞SW620分为si-circ_0000515组、si-NC组、miR-1258组、miR-NC组、si-circ_0000515+anti-miR-NC组、si-circ_0000515+anti-miR-1258组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测SW620细胞活性;流式细胞术检测SW620细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测circ_0000515和miR-1258的靶向关系。 结果与癌旁组织比较,结肠癌组织中circ_0000515表达水平升高,miR-1258表达水平降低(P < 0.01)。抑制circ_0000515表达或过表达miR-1258,SW620细胞活性降低,SW620细胞的凋亡率升高(P < 0.01)。circ_0000515靶向调控miR-1258;干扰miR-1258表达逆转了抑制circ_0000515表达对结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的作用。 结论抑制circ_0000515表达通过靶向上调miR-1258抑制结肠癌细胞增殖,促进凋亡。 -
关键词:
- 结肠肿瘤 /
- circ_0000515 /
- miR-1258 /
- 增殖 /
- 凋亡
Abstract:ObjectiveTo explore the molecular mechanism of circ_0000515 regulating the proliferation and apoptosis of colon cancer cells. MethodsA total of 41 cases of colon cancer patients with cancer tissue and adjacent tissue samples were selected.Real-time fluorescent quantitative PCR was used to detect the expression of circ_0000515 and miR-1258.Colon cancer cells SW620 were divided into si-circ_0000515 group, si-NC group, miR-1258 group, miR-NC group, si-circ_0000515+anti-miR-NC group, si-circ_0000515+anti-miR-1258 group.Tetramethylazolium salt colorimetric assay(MTT) was used to detect the cell viability.Flow cytometry was used to detect apoptosis.The targeting relationship of circ_0000515 and miR-1258 was detected by dual-luciferase reporter assay. ResultsCompared with the adjacent tissues, the expression of circ_0000515 in colon cancer tissues was increased, and the expression of miR-1258 was decreased(P < 0.01).After the inhibition of circ_0000515 expression or overexpression of miR-1258, the viability of SW620 cells was decreased, the apoptosis rate was increased(P < 0.01).Circ_0000515 targeted and regulated the expression of miR-1258.Interference with miR-1258 expression reversed the effect of inhibiting circ_0000515 expression on the proliferation and apoptosis of colon cancer SW620 cells. ConclusionsInhibiting the expression of circ_0000515 by up-regulation of miR-1258 can inhibit the proliferation and promote the apoptosis in colon cancer cells. -
Key words:
- colon neoplasms /
- circ_0000515 /
- miR-1258 /
- proliferation /
- apoptosis
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表 1 circ_0000515和miR-1258在结肠癌组织中的表达(x±s)
分组 n circ_0000515 miR-1258 癌旁组织 41 1.00±0.07 1.00±0.07 结肠癌组织 41 3.90±0.24 0.33±0.03 t — 78.17 67.49 P — < 0.01 < 0.01 表 2 抑制circ_0000515表达对结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响(x±s)
分组 n circ_0000515 OD值(450 nm) 凋亡率/% Ki-67蛋白 Bcl-2蛋白 Bax蛋白 si-NC 9 1.00±0.07 0.84±0.06 7.16±0.65 0.72±0.05 0.61±0.04 0.16±0.02 si-circ_0000515 9 0.36±0.03 0.48±0.04 25.90±2.08 0.32±0.03 0.26±0.03 0.59±0.04 t — 25.21* 14.98 25.80* 20.58 21.00 28.85 P — < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 *示t′值 表 3 双荧光素酶报告实验(x±s)
分组 n WT-circ_0000515 MUT-circ_0000515 miR-NC 9 0.99±0.05 0.97±0.06 miR-1258 9 0.42±0.04 1.00±0.07 t — 26.71 0.98 P — < 0.01 >0.05 表 4 circ_0000515调控miR-1258的表达(x±s)
分组 n miR-1258 pcDNA 9 1.00±0.06 pcDNA-circ_0000515 9 0.33±0.03* si-NC 9 0.99±0.06 si-circ_0000515 9 2.74±0.21# F — 734.64 P — < 0.01 MS组内 — 0.013 q检验:与pcDNA组比较*P < 0.05;与si-NC组比较#P < 0.05 表 5 过表达miR-1258对结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响(x±s)
分组 n miR-1258 OD值(450 nm) 凋亡率/% Ki-67蛋白 Bcl-2蛋白 Bax蛋白 miR-NC 9 1.00±0.06 0.87±0.05 6.87±0.55 0.74±0.05 0.64±0.05 0.13±0.02 miR-1258 9 3.40±0.29 0.53±0.04 19.98±1.89 0.39±0.03 0.33±0.03 0.52±0.04 t — 24.31* 15.93 19.98* 18.01 15.95 26.16 P — < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 *示t′值 表 6 干扰miR-1258表达逆转了抑制circ_0000515表达对结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的作用(x±s)
分组 n miR-1258 OD值(450 nm) 凋亡率/% Ki-67蛋白 Bcl-2蛋白 Bax蛋白 si-circ_0000515+anti-miR-NC 9 1.00±0.05 0.46±0.04 27.35±2.23 0.30±0.02 0.25±0.02 0.60±0.04 si-circ_0000515+anti-miR-1258 9 0.29±0.03 0.73±0.06 11.84±1.17 0.64±0.05 0.48±0.04 0.27±0.02 t — 36.53 11.23 18.48 18.94 15.43 22.14 P — < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 -
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