-
鼻咽癌是中国的高发恶性肿瘤之一,尤其多发于南部地区如广东、广西、福建等省份。流行病学研究[1]显示,中国的鼻咽癌发病率达(30~50)/10万,病人数量约占世界总病人数的50%。放疗、化疗是当前鼻咽癌的共识性治疗方法,但常常难以避免地伴随治疗损伤,甚至致使部分病人不能耐受并终止治疗,影响病人的生活质量[2]。故此研究新型辅助抗肿瘤治疗药物以减少放化疗治疗的剂量、降低放化疗损伤,对于提升鼻咽癌病人的生存预期与生活质量显示出重要的意义。中药是中国传统医疗的知识瑰宝,其在现当代研究中显示出多靶点、多层次、多效应的药效特点,中药的抗肿瘤作用逐渐成为当前研究的新浪潮,近年来如木鳖子[3]、高丽参[4]、尖尾芋[5]的提取物等抗肿瘤作用也逐渐得到相关研究证实。因此探寻中药的抗肿瘤作用,有望改善鼻咽癌的传统治疗方式,提升治疗效果。皂角刺是传统医籍中具有行气化痰、散结消癥功效的药物,多项研究[6-8]表明皂角刺及其提取物对肝癌、肺癌、结肠癌均有一定的的抗肿瘤作用。本研究主要探索皂角刺提取液对鼻咽癌CNE-2细胞增殖与凋亡的影响,为鼻咽癌治疗探寻新型辅助抗肿瘤药物提供理论基础与依据。
-
通过进行MTT比色法检测,结果显示,不同浓度(0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8、25.6 mg/mL)的皂角刺溶液作用于鼻咽癌CNE-2细胞12、24、48 h后,较低浓度药物组(0.2、0.4、0.8、1.6 mg/mL)在作用12、24 h后均对细胞增殖产生抑制效应,在作用48 h后仅0.2 mg/mL浓度药物对细胞增殖产生抑制效应。较高浓度药物组(3.2、6.4、12.8、25.6 mg/mL)作用12、24、48 h后均可显著抑制细胞增殖,其增殖抑制率均高于阴性对照组,差异有统计学意义(P < 0.05)。其中3.2、6.4、12.8 mg/mL浓度药物作用48 h后对细胞增殖的抑制效应较为明显。根据6次重复实验的结果计算,计算皂角刺提取液作用于鼻咽癌细胞48 h后的半数抑制浓度(IC50)为(2.53±0.25)mg/mL (见表 1)。
分组 n 增殖抑制率/% F P MS组内 12 h 24 h 48 h 阴性对照组 5 0 0 0 — — — 0.2 mg/mL 5 34.54±1.03** 19.39±1.57**## 0.97±4.60**##▽▽ 171.87 < 0.01 0.141 0.4 mg/mL 5 26.81±5.55** 13.36±1.31**## -6.30±0.77**##▽▽ 125.85 < 0.01 0.139 0.8 mg/mL 5 20.62±4.67** 8.50±0.85**## -19.31±4.14**##▽▽ 158.42 < 0.01 0.212 1.6 mg/mL 5 18.59±4.88** 13.34±2.53**## -0.18±3.85**##▽▽ 31.22 < 0.01 0.047 3.2 mg/mL 5 52.89±3.26** 55.04±0.80**## 89.61±1.88**##▽▽ 428.78 < 0.01 0.212 6.4 mg/mL 5 91.02±1.04** 93.81±1.46**## 96.99±0.66**##▽▽ 36.76 < 0.01 0.004 12.8 mg/mL 5 89.45±1.06** 91.09±0.89** 93.88±1.24**##▽ 21.68 < 0.01 0.003 25.6 mg/mL 5 81.22±2.72** 82.79±0.43** 84.15±0.86** 3.88 < 0.05 0.001 F — 448.20 3 798.40 1 737.54 — — — P — < 0.01 < 0.01 < 0.01 — — — MS组内 — 0.547 0.714 1.303 — — — q检验:与阴性对照组比较**P < 0.01;与12 h比较##P < 0.01;与24 h比较▽▽P < 0.01 表 1 不同浓度皂角刺提取液作用于鼻咽癌CNE-2细胞的增殖抑制率(x±s)
-
流式细胞仪检测结果显示,将浓度分别为2、2.5、3 mg/mL的皂角刺提取液分别作用于鼻咽癌CNE-2细胞48 h后,其总凋亡率分别为(15.61±1.21)%、(22.08±1.70)%、(37.62±2.07)%,结果均高于阴性对照组,差异有统计学意义(P < 0.01)(见表 2)。
分组 凋亡率/% 早期凋亡 晚期凋亡 总凋亡 阴性对照组 0.74±0.52 3.91±0.08 4.64±0.60 2 mg/mL 3.64±0.25** 11.95±1.20** 15.61±1.21** 2.5 mg/mL 4.30±0.42** 17.77±1.34** 22.08±1.70** 3 mg/mL 8.32±1.84** 29.31±2.14** 37.62±2.07** F 20.03 116.8 168.91 P < 0.01 < 0.01 < 0.01 MS组内 0.973 1.955 2.249 q检验:与阴性对照组比较**P < 0.01 表 2 不同浓度皂角刺提取液作用于鼻咽癌CNE-2细胞的凋亡率(x±s)
皂角刺提取液对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响
Effect of the extract of Gleditsia sinensis thorns on the proliferation and apoptosis of human nasopharyngeal carcinoma CNE-2 cells
-
摘要:
目的探讨皂角刺提取液对鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响。 方法体外培养人鼻咽癌CNE-2细胞,予不同的浓度皂角刺提取液作用于细胞,分别作用12、24、48 h后,通过MTT比色法检测细胞的增殖抑制情况。予不同浓度的皂角刺提取液作用于鼻咽癌CNE-2细胞48 h后,通过流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。 结果较高浓度皂角刺提取液组(3.2、6.4、12.8、25.6 mg/mL)作用于细胞48 h的增殖抑制率分别为(89.61±1.88)%、(96.99±0.66)%、(93.88±1.24)%、(84.15±0.86)%,均高于阴性对照组(P < 0.05)。2、2.5、3 mg/mL皂角刺提取液作用于细胞48 h后,细胞凋亡率分别为(15.61±1.21)%、(22.08±1.70)%、(37.62±2.07)%,均高于阴性对照组(P < 0.01)。 结论皂角刺提取液可抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖并诱导其凋亡。 Abstract:ObjectiveTo explore the effect of the extract of Gleditsia sinensis thorns on the proliferation and apoptosis of nasopharyngeal carcinoma CNE-2 cells. MethodsNasopharyngeal carcinoma CNE-2 cells were cultured in vitro.The CNE-2 cells with different concentrations of the extract of Gleditsia sinensis thorns extract, Complete cell culture medium was used as the negative control group.The cell proliferation was detected by MTT assay.Treating nasopharyngeal carcinoma CNE-2 cells with different concentrations of the extract of Gleditsia sinensis thorns, Apoptosis of the cells was detected by flow cytometry. ResultsThe cell proliferation inhibition rates of the higher concentration groups(3.2, 6.4, 12.8, 25.6 mg/mL) were (89.61±1.88)%, (96.99±0.66)%, (93.88±1.24)%, (84.15±0.86)%, respectively, the apoptosis rate of each concentration group was significantly higher than the negative control group's(P < 0.05).After treating nasopharyngeal carcinoma CNE-2 cells with 2, 2.5, 3 mg/mL the extract of Gleditsia sinensis thorns, the apoptosis rate were(15.61±1.21)%, (22.08±1.70)%, (37.62±2.07)%, respectively, the apoptosis rate of each concentration group was significantly higher than the negative control group's(P < 0.01). ConclusionsThe extract of Gleditsia sinensis thorns can inhibit the proliferation and induce the apoptosis of nasopharyngeal carcinoma CNE-2 cells. -
Key words:
- nasopharyngeal neoplasms /
- Gleditsia sinensis thorns /
- proliferation /
- apoptosis
-
表 1 不同浓度皂角刺提取液作用于鼻咽癌CNE-2细胞的增殖抑制率(x±s)
分组 n 增殖抑制率/% F P MS组内 12 h 24 h 48 h 阴性对照组 5 0 0 0 — — — 0.2 mg/mL 5 34.54±1.03** 19.39±1.57**## 0.97±4.60**##▽▽ 171.87 < 0.01 0.141 0.4 mg/mL 5 26.81±5.55** 13.36±1.31**## -6.30±0.77**##▽▽ 125.85 < 0.01 0.139 0.8 mg/mL 5 20.62±4.67** 8.50±0.85**## -19.31±4.14**##▽▽ 158.42 < 0.01 0.212 1.6 mg/mL 5 18.59±4.88** 13.34±2.53**## -0.18±3.85**##▽▽ 31.22 < 0.01 0.047 3.2 mg/mL 5 52.89±3.26** 55.04±0.80**## 89.61±1.88**##▽▽ 428.78 < 0.01 0.212 6.4 mg/mL 5 91.02±1.04** 93.81±1.46**## 96.99±0.66**##▽▽ 36.76 < 0.01 0.004 12.8 mg/mL 5 89.45±1.06** 91.09±0.89** 93.88±1.24**##▽ 21.68 < 0.01 0.003 25.6 mg/mL 5 81.22±2.72** 82.79±0.43** 84.15±0.86** 3.88 < 0.05 0.001 F — 448.20 3 798.40 1 737.54 — — — P — < 0.01 < 0.01 < 0.01 — — — MS组内 — 0.547 0.714 1.303 — — — q检验:与阴性对照组比较**P < 0.01;与12 h比较##P < 0.01;与24 h比较▽▽P < 0.01 表 2 不同浓度皂角刺提取液作用于鼻咽癌CNE-2细胞的凋亡率(x±s)
分组 凋亡率/% 早期凋亡 晚期凋亡 总凋亡 阴性对照组 0.74±0.52 3.91±0.08 4.64±0.60 2 mg/mL 3.64±0.25** 11.95±1.20** 15.61±1.21** 2.5 mg/mL 4.30±0.42** 17.77±1.34** 22.08±1.70** 3 mg/mL 8.32±1.84** 29.31±2.14** 37.62±2.07** F 20.03 116.8 168.91 P < 0.01 < 0.01 < 0.01 MS组内 0.973 1.955 2.249 q检验:与阴性对照组比较**P < 0.01 -
[1] CAO SM, SIMONS MJ, QIAN CN. The prevalence and prevention of nasopharyngeal carcinoma in China[J]. Chin J Cancer, 2011, 30(2): 114. doi: 10.5732/cjc.010.10377 [2] 邱元正, 刘超, 李果. 鼻咽癌放射治疗的现状与对策[J]. 中国耳鼻咽喉颅底外科杂志, 2015, 21(6): 435. [3] SHEN Y, MENG L, SUN H, et al. Cochinchina momordica seed suppresses proliferation and metastasis in human lung cancer cells byRegulating multiple molecular targets[J]. Am J Chinese Med, 2015, 43(1): 149. doi: 10.1142/S0192415X1550010X [4] LEE DG, JANG SI, KIM YR, et al. Anti-proliferative effects of ginsenosides extracted from mountain ginseng on lung cancer[J]. Chin J Integr Med, 2016(5): 1. [5] WEI P, ZHIYU C, XU T, et al. Antitumor effect and apoptosis induction of Alocasia cucullata (Lour. ) G. Don in human gastric cancer cells in vitro and in vivo[J]. BMC Complement Altern Med, 2015, 15(1): 1. doi: 10.1186/s12906-015-0520-z [6] 何光志, 邓树轩, 何前松, 等. 皂角刺总黄酮对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭能力影响的实验研究[J]. 湖南师范大学自然科学学报, 2012, 35(1): 77. doi: 10.3969/j.issn.1000-2537.2012.01.017 [7] 刘伟杰. 皂角刺对肺癌的防治作用及其机制初步探讨[D]. 开封: 河南大学, 2014. [8] 刘明华, 姚健, 李荣, 等. 皂角刺总黄酮诱导结肠癌HCT116细胞凋亡的作用[J]. 肿瘤防治研究, 2011, 38(6): 643. doi: 10.3971/j.issn.1000-8578.2011.06.009 [9] 于金倩, 李岗, 仙云霞, 等. 皂角刺的高效液相指纹图谱分析及多组分测定[J]. 中草药, 2017, 48(7): 1416. [10] 李岗, 王召平, 仙云霞, 等. 皂角刺中黄酮类成分及其抗肿瘤活性研究[J]. 中草药, 2016, 47(16): 2812. doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.16.005 [11] 曹冉冉, 高嘉屿, 刘华清, 等. 皂角刺中二氢黄酮醇类化合物及其细胞毒活性研究[J]. 中草药, 2016, 47(5): 707. [12] YI JM, PARK JS, OH SM, et al. Ethanol extract of Gleditsia sinensisthorn suppresses angiogenesisin vitro andin vivo[J]. BMC Complement Altern Med, 2012, 12: 243. doi: 10.1186/1472-6882-12-243 [13] 龙玲, 耿果霞, 李青旺. 皂角刺抑制小鼠宫颈癌U14的生长及对增殖细胞核抗原和p53表达的影响[J]. 中国中药杂志, 2006, 31(2): 150. doi: 10.3321/j.issn:1001-5302.2006.02.019 [14] RAYCHAUDHURI SP, SANYAL M, WELTMAN H, et al. K252a, a high-affinity nerve growth factor receptor blocker, improves psoriasis: an in vivo study using the severe combined immunodeficient mouse-human skin model[J]. J Invest Dermatol, 2004, 122(3): 812. doi: 10.1111/j.0022-202X.2003.12602.x [15] RALAINIRINA N, BRONS NH, AMMERLAAN W, et al. Mouse natural killer (NK) cells express the nerve growth factor receptor TrkA, which is dynamically regulated[J]. PLoS One, 2010, 5(12): e15053. doi: 10.1371/journal.pone.0015053 [16] 李哲, 刘树佳, 陈进杰, 等. 熟地黄多糖靶向TNF-α/STAT3通路抑制鼻咽癌增殖转移的机制[J]. 广东医学, 2018, 39(22): 3305. doi: 10.3969/j.issn.1001-9448.2018.22.003 [17] 何峰, 何光志, 张利新, 等. 皂角刺含药血清诱导直肠癌细胞SW-480凋亡及其对Bcl-2/Bax mRNA表达的影响[J]. 中国实验方剂学杂志, 2013, 19(19): 217.