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大肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，严重危害人类健康，多数病人在就诊时已处于进展期，治疗效果差[1]。大肠腺瘤性息肉是大肠癌最主要的癌前病变，早期切除可使大肠癌的发病风险降低85%~90%[2]，目前有关腺瘤性息肉癌变的确切机制不明。盘状大同源物(discs large homolog，DLG)蛋白家族包括DLG1~DLG5等5个成员[3]，主要功能是调节细胞极性，其减少或缺失可引起细胞极性丧失，导致肿瘤发生。DLG1、DLG5作为DLG家族重要成员，已被证明与肿瘤的发生发展有关，但其在大肠息肉中研究鲜有报道。本研究采用免疫组织化学法检测不同病理类型大肠息肉及大肠癌中DLG1、DLG5蛋白的表达情况，分析其与临床病理特征的关系及这两种蛋白在腺瘤性息肉中表达的相关性，探讨其在大肠息肉癌变发生、发展过程中的作用。现作报道。
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选取2018-2019年在皖西卫生职业学院附属医院消化内科诊治的大肠息肉病人83例，男45例，女38例，年龄15~77岁，平均(46±11.4)岁；结肠镜下切除或活检息肉标本经病理证实：大肠腺瘤性息肉45例，炎性增生息肉38例。同时选取36例正常大肠黏膜组织及31例大肠癌组织进行检测。本研究经皖西卫生职业学院附属医院伦理委员会批准(0126)，病人均签署知情同意书。
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采用免疫组织化学SP法检测正常大肠组织、大肠息肉组织及大肠癌中DLG1和DLG5蛋白的表达。DLG1、DLG5抗体、二氨基联苯胺试剂等均购于美国Santa Cruz公司，所有操作按试剂说明进行，抗原修复均采用微波修复，以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照，采用已知阳性切片作为阳性对照。结果判定：DLG1、DLG5的阳性染色结果为细胞质和/或核内出现棕黄色颗粒，由2名病理学专家随机选取5个高倍镜视野进行双盲评分。根据染色强度和阳性细胞数对标本进行评分：染色强度无显色0分、弱显色1分、中等程度显色2分、高强度显色3分；着色细胞数 < 5%为0分，5%~25% 为1分、>25%~50%为2分，>50%~75%为3分，>75%~100%为4分。每张切片平均着色程度与平均着色细胞百分率相加为最后得分: 0~1分(-)；2分(+)；3~4分(2+)；≥5分(3+)。
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采用χ2检验、χ2分割检验和Spearman相关性分析。
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DLG1、DLG5在正常大肠组织、炎性增生息肉、腺瘤性息肉及大肠癌组织中阳性表达率差异有统计学意义(P < 0.01)，两两比较结果显示，腺瘤性息肉和大肠癌组织DLG1和DLG5阳性率均低于正常大肠组织，大肠癌组DLG1和DLG5阳性率均低于炎性增生息肉组，大肠癌组DLG5阳性率低于腺瘤性息肉组(P < 0.05)(见表 1和图 1~2)。
组织 n DLG1 DLG5 正常大肠组织 36 30(83.3) 27(75.0) 炎性增生息肉 38 26(68.4) 24(63.2) 腺瘤性息肉 45 22(48.9)* 19(42.2)* 大肠癌 31 3(9.7)*△# 5(16.1)*△ χ2 — 40.64 26.96 P — < 0.01 < 0.01 χ2分割检验：与正常大肠组织组比较*P < 0.05；与炎性增生息肉组比较△P < 0.05；与腺瘤性息肉组比较#P < 0.05 表 1 4种大肠组织中DLG1、DLG5的阳性表达情况比较[n; 百分率(%)]
图 1 不同大肠组织中DLG1蛋白表达的免疫组织化学染色结果
图 2 不同大肠组织中DLG5蛋白表达的免疫组织化学染色结果
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DLG1在管状腺瘤中的阳性率为64.3%、混合性腺瘤64.3%、绒毛状腺瘤为23.5%，3组间差异有统计学意义(P < 0.05)；DLG5在管状腺瘤中的阳性表达率为57.1%、混合性腺瘤50.0%、绒毛状腺瘤为23.5%，3组间差异无统计学意义(P>0.05)(见表 2)。
类型 n DLG1 DLG5 管状腺瘤 14 9(64.3) 8(57.1) 混合性腺瘤 14 9(64.3) 7(50.0) 绒毛状腺瘤 17 4(23.5) 4(23.5) χ2 — 7.03 4.06 P — < 0.05 >0.05 表 2 DLG1、DLG5在不同病理类型大肠腺瘤性息肉的表达情况[n; 百分率(%)]
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DLG1、DLG5蛋白在大肠腺瘤性息肉组织中的表达在不同大肠息肉直径、息肉部位、有无蒂、年龄、性别及息肉数量等表达阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)(见表 3)。
指标 n DLG1 χ2 P DLG5 χ2 P 年龄/岁 ≤50
>5015
308(53.3)
14(46.7)0.18 >0.05 7(46.7)
12(40.0)0.18 >0.05 性别 男
女24
2111(45.8)
11(52.4)0.19 >0.05 10(41.7)
9(42.9)0.01 >0.05 息肉直径/cm ≤1
>121
2413(61.9)
9(37.5)2.67 >0.05 12(57.1)
7(29.2)3.59 >0.05 是否带蒂 有
无22
2314(63.6)
8(34.8)3.75 >0.05 12(54.5)
7(30.4)2.68 >0.05 是否多发 是
否20
2510(50.0)
12(48.0)0.02 >0.05 8(40.0)
11(44.0)0.07 >0.05 表 3 DLG1、DLG5的阳性表达情况与大肠腺瘤性息肉的临床病理特点[n; 百分率(%)]
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DLG1和DLG5蛋白在大肠腺瘤性息肉组织中表达呈正相关关系(rs=0.784，P < 0.01)(见表 4)。
DLG1 DLG5 rs P 阳性 阴性 阳性
阴性18
14
220.784 < 0.01 表 4 腺瘤性息肉组织中DLG1、DLG5表达的相关性
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2020年全球新发大肠癌病例数已居恶性肿瘤第三位[4]，早期大肠癌通过超声内镜进行临床分期并实施内镜下治疗后获得较好诊治效果[5]，但很多大肠癌病人就诊时常伴有远处转移, 预后较差[6]，因此需要寻找新的治疗靶点和预后指标。DLG1、DLG5高度同源，两者在正常组织中高度表达，在不同癌组织中表达差异明显，参与肿瘤的发生发展[7-10]。DLG1是潜在的肿瘤抑制因子，肿瘤晚期由于Snai1基因触发上皮间质转化重新激活导致其表达减少；DLG5的表达水平与肿瘤分期及预后有关，车娟娟等[11]研究发现肺腺癌组织中DLG5的阳性表达率明显减少，且与淋巴结转移、TNM分期和肿瘤复发呈负相关，而另一项有关肺癌的研究[12]发现，与正常组织相比，DLG5在癌组织中表达增加，且表达水平与总生存时间和无复发生存等均呈负相关。故DLG1、DLG5与肿瘤的发生发展密切相关，由于DLG1、DLG5在不同肿瘤中的表达、生存和预后表现出多样性，因此检测DLG1、DLG5基因在大肠肿瘤中的确切功能至关重要，它们可能是大肠肿瘤分子治疗的潜在靶标。
大肠腺瘤性息肉是大肠肿瘤发生发展过程中的重要阶段[13]，为研究DLG1、DLG5在息肉发生癌变中的作用，本研究运用免疫组织化学法检测了83例大肠息肉及31例大肠癌组织中DLG1、DLG5的表达情况，发现不同病理类型的大肠息肉及大肠癌组织中DLG1、DLG5阳性表达率差异有统计学意义，说明DLG1、DLG5与大肠息肉的发生、发展关系密切。DLG1、DLG5在腺瘤性息肉中的阳性表达率显著低于炎性增生息肉和正常大肠组织，提示DLG1、DLG5表达减少可能在息肉上皮内瘤变至癌变过程中起重要作用。DLG1、DLG5在绒毛状腺瘤中的阳性表达率显著低于管状腺瘤和混合性腺瘤，其阳性表达率有随绒毛含量增多而逐渐减少趋势，这与绒毛状腺瘤更易癌变观点一致。本研究中>1 cm息肉和无蒂息肉中DLG1、DLG5表达量有明显减少趋势，但差异无统计学意义，可能与样本量少及样本来源单一有关。相关性分析结果显示，在腺瘤性息肉中DLG1和DLG5表达呈正相关，二者随着大肠病变恶性程度升高呈递减趋势，且与息肉的不同病理类型有关，提示其可能在息肉癌变过程中作为抑癌因子发挥作用。明确结肠息肉的病理类型并检测DLG1、DLG5的表达情况对防治大肠腺瘤性息肉癌变具有重要意义。
综上所述，不同病理类型的大肠息肉及大肠癌组织中DLG1、DLG5的阳性表达率不同，DLG、DLG5的表达情况与大肠息肉的病理类型及病变严重程度显著相关，推测DLG1、DLG5可能参与了大肠息肉向大肠癌的发生发展，但所涉及的相关机制尚不明确，有待进一步研究。
DLG1、DLG5在大肠腺瘤性息肉组织中的表达及临床意义
Expression and clinical significance of DLG1 and DLG5 in colorectal adenomatous polyps
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摘要:
目的探讨DLG1、DLG5在大肠腺瘤性息肉组织中的表达及临床意义。 方法根据病理学检测结果，选取36例正常大肠组织、38例炎性增生息肉组织、45例腺瘤性息肉组织及31例大肠癌组织，采用免疫组织化学法分别检测DLG1、DLG5蛋白在各组织中的表达情况。 结果DLG1、DLG5在正常大肠组织、炎性增生息肉、腺瘤性息肉及大肠癌组织中阳性表达率差异有统计学意义（P < 0.01）；DLG1、DLG5蛋白在大肠腺瘤性息肉组织中的表达，在不同大肠息肉直径、息肉部位、有无蒂、年龄、性别及息肉数量等表达阳性率差异均无统计学意义（P>0.05）；DLG1和DLG5蛋白在大肠腺瘤性息肉中的表达呈正相关关系（rs=0.784，P < 0.01）。 结论DLG1、DLG5的低表达在调节大肠息肉发生癌变过程中起一定作用。 Abstract:ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of DLG1 and DLG5 in colorectal adenomatous polyps. MethodsAccording to histopathologic findings, 36 cases of normal colorectal tissues, 38 cases of inflammatory hyperplastic polyps, 45 cases of adenomatous polyps and 31 cases of colorectal cancer tissues were selected, and the expressions of DLG1 and DLG5 proteins in each group were detected by immunohistochemistry. ResultsThe positive expression rates of DLG1 and DLG5 in normal colorectal tissues, inflammatory hyperplastic polyps, adenomatous polyps and colorectal cancer tissues were significantly different (P < 0.01);the expressions of DLG1 and DLG5 protein in colorectal adenomatous polyps had no significant difference in the positive rate of different colorectal polyps diameter, location, pedicle, age, sex and number of polyps (P>0.05);there was a positive correlation between the expression of DLG1 and DLG5 protein in colorectal adenomatous polyps(rs=0.784, P < 0.01). ConclusionsLow expression of DLG1 and DLG5 plays a role in regulating carcinogenesis of colon polyps. -
表 1 4种大肠组织中DLG1、DLG5的阳性表达情况比较[n; 百分率(%)]
组织 n DLG1 DLG5 正常大肠组织 36 30(83.3) 27(75.0) 炎性增生息肉 38 26(68.4) 24(63.2) 腺瘤性息肉 45 22(48.9)* 19(42.2)* 大肠癌 31 3(9.7)*△# 5(16.1)*△ χ2 — 40.64 26.96 P — < 0.01 < 0.01 χ2分割检验：与正常大肠组织组比较*P < 0.05；与炎性增生息肉组比较△P < 0.05；与腺瘤性息肉组比较#P < 0.05 
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表 2 DLG1、DLG5在不同病理类型大肠腺瘤性息肉的表达情况[n; 百分率(%)]
类型 n DLG1 DLG5 管状腺瘤 14 9(64.3) 8(57.1) 混合性腺瘤 14 9(64.3) 7(50.0) 绒毛状腺瘤 17 4(23.5) 4(23.5) χ2 — 7.03 4.06 P — < 0.05 >0.05
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表 3 DLG1、DLG5的阳性表达情况与大肠腺瘤性息肉的临床病理特点[n; 百分率(%)]
指标 n DLG1 χ2 P DLG5 χ2 P 年龄/岁 ≤50
>5015
308(53.3)
14(46.7)0.18 >0.05 7(46.7)
12(40.0)0.18 >0.05 性别 男
女24
2111(45.8)
11(52.4)0.19 >0.05 10(41.7)
9(42.9)0.01 >0.05 息肉直径/cm ≤1
>121
2413(61.9)
9(37.5)2.67 >0.05 12(57.1)
7(29.2)3.59 >0.05 是否带蒂 有
无22
2314(63.6)
8(34.8)3.75 >0.05 12(54.5)
7(30.4)2.68 >0.05 是否多发 是
否20
2510(50.0)
12(48.0)0.02 >0.05 8(40.0)
11(44.0)0.07 >0.05
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[1] FERLAY J, COLOMBET M, SOERJOMATARAM I, et al. Estimating the global cancer incidence and mortality in(2018): GLOBOCAN sources and methods[J]. Int J Cancer, 2019, 144(8): 1941. doi: 10.1002/ijc.31937 [2] 房静远, 李延青, 陈萦晅, 等. 中国结直肠肿瘤综合预防共识意见[J]. 胃肠病学, 2021, 26(5): 279. doi: 10.3969/j.issn.1008-7125.2021.05.004 [3] RASMUSSEN AH, RASMUSSEN HB, SILAHTAROGLU A. The DLGAP family: neuronal expression, function and role in brain disorders[J]. Mol Brain, 2017, 10: 43. doi: 10.1186/s13041-017-0324-9 [4] SUNG H, FERLAY J, SIEGEL RL, et al. Global cancer statistics 2020 GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J]. CA Cancer J Clin, 2021, 71(3): 209. doi: 10.3322/caac.21660 [5] 王小明, 余珊, 陈欣, 等. 早期结直肠癌超声内镜检查及内镜黏膜下剥离术的临床价值[J]. 蚌埠医学院学报, 2022, 47(8): 1034. [6] FEI F, LIU K, LI CY, et al. Molecular mechanisms by which S100A4 regulates the migration and invasion of PGCCs with their daughter cells in human colorectal cancer[J]. Front Oncol, 2020, 10: 182. doi: 10.3389/fonc.2020.00182 [7] YOUNG MA, MAY S, DAMO A, et al. Epigenetic regulation of Dlg1, via Kaiso, alters mitotic spindle polarity and promotes intestinal tumorigenesis[J]. Mol Cancer Res, 2019, 17(3): 686. doi: 10.1158/1541-7786.MCR-18-0280 [8] ZHU GD, OUYANG S, LIU F, et al. Elevated expression of DLG1 is associated with poor prognosis in patients with colorectal cancer[J]. Ann Clin Lab Sci, 2017, 47(6): 657. [9] SHI YX, YIN JY, SHEN Y, et al. Genome-scale analysis identifes NEK2, DLGAP5 and ECT2 as promising diagnostic and prognostic biomarkers in human lung cancer[J]. Sci Rep, 2017, 7: 8072. doi: 10.1038/s41598-017-08615-5 [10] SCHNEIDER MA, CHRISTOPOULOS P, MULEY T, et al. AURKA, DLGAP5, TPX2, KIF11 and CKAP5: fve specifc mitosis-associated genes correlate with poor prognosis for non-small cell lung cancer patients[J]. Int J Oncol, 2017, 50(2): 365. doi: 10.3892/ijo.2017.3834 [11] 车娟娟, 甄洪超, 王婧, 等. 盘状大同源物5在肺腺癌中的表达及其临床意义[J]. 中国中西医结合外科杂志, 2019, 25(3): 257. [12] SHI YX, YIN JY, SHEN Y, et al. Genome-scale analysis identifes NEK2, DLGAP5 and ECT2 as promising diagnostic and prognostic biomarkers in human lung cancer[J]. Sci Rep, 2017, 7(1): 8072. doi: 10.1038/s41598-017-08615-5 [13] 钏莉雪, 常江, 赵锦涵. 代谢综合征与结直肠腺瘤性息肉的相关性研究[J]. 胃肠病学, 2019, 24(11): 699. doi: 10.3969/j.issn.1008-7125.2019.11.013 -
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