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刚地弓形虫作为严格细胞内寄生的一类机会致病性原虫，通过入侵温血动物有核细胞的方式引发弓形虫病[1-3]。家猫和野生猫科动物作为其唯一终宿主[4]，全球阳性率大约为35%和59%[5]。既往血清学研究[6-8]显示，全球人群的弓形虫感染率高达30%。一般情况下弓形虫的致病力取决于虫株毒力、增殖能力及宿主种类，宿主在感染早期的固有免疫对感染后的结局亦至关重要[9]。作为TORCH综合征的主要病因之一，弓形虫感染对孕产妇及胎儿有着流产、致畸等重大生命威胁[10-13]。由于弓形虫复杂的生物学特性，针对弓形虫病的治疗药物显得较为不足[14-15]。磺胺嘧啶、乙胺嘧啶等传统药物存在疗程长、停药后易复发以及产生耐药性等诸多问题，经长期临床应用药物不良反应较大[16-18]，因此研发低毒高效的抗弓形虫药物仍是弓形虫病治疗的重要任务。青蒿素作为我国自主研发的一线抗疟药物，有研究[19-21]显示，该类药物亦显现出较强的抗弓形虫作用。青蒿琥酯(Artesunate，Art)为双氢青蒿素半琥珀酸酯衍生物，是青蒿素主要衍生物之一。陈炘等[22]报道，Art在弓形虫脑病的治疗过程中发挥了积极作用。还有研究[23]表明，阿奇霉素(Azithromycin，Azm)与Art配伍使用取得了很好的体内抗弓形虫效果。但青蒿琥酯抗弓形虫相关的体外研究较少，且观察手段较为传统，主观性较大。本实验采用流式细胞术对药物作用后的转基因弓形虫进行检测分析，旨在为Art作为弓形虫病治疗药物提供线索。
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RH-GFP株系中国农业大学动物医学院索勋教授惠赠，本室液氮保种。
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BALB/c小鼠(雌性，6~8周，SPF级)和昆明小鼠(雌性，6~8周，SPF级)购于安徽医科大学实验动物中心，动物伦理批准文号：AMU26-08061。
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Art为桂林南药股份有限公司产品，Azm为东北制药集团沈阳第一制药有限公司产品，吉姆萨染液为美国Sigma公司产品，RPMI-1640培养液、小牛血清和PBS均购自上海生工公司。
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荧光显微镜(CX31)为日本OLMPUS公司产品。流式细胞仪(FACSVerse)为美国BD公司产品。CO2培养箱(SERIES 8000 DH)为Thermo Scientific Napco公司产品。
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虫株经复苏、连续传代3~4次后，取发病晚期小鼠乙醚麻醉处死，75%乙醇浸泡后沥干，充分暴露腹膜，用5 mL预冷的RPMI-1640冲洗小鼠腹腔并重复此操作2次收集腹腔灌洗液约10 mL，800 r/min离心3 min取上清液，再以3 000 r/min离心10 min，此时弃上清液重悬，分离纯化速殖子后取10 μL悬液光镜下计数，调整虫体密度备用。
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为便捷有效地观察药物对RH-GFP感染宿主巨噬细胞(Macrophage, Mφ)的影响，我们将新鲜收集的RH-GFP速殖子以(1~2)×106的量经腹腔感染BALB/c小鼠，感染后72 h将小鼠乙醚麻醉处死，冲洗小鼠腹腔，以RPMI-1640完全培养基重悬细胞并接种于24孔细胞培养板，调整其密度为1×106/孔。
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我们设置了对照组(0.9%氯化钠溶液阴性对照)；Art组，使其终浓度分别为1.562 5、3.125、6.25、12.5、25、50、100和200 μg/mL；Azm组(阳性对照)，终浓度分别为12.5、25、50、100、200、400、800和1 600 μg/mL；Art+Azm组，终浓度分别为：Art1.562 5+Azm12.5、Art3.125+Azm25、Art6.25+Azm50、Art12.5+Azm100、Art25+Azm200和Art50+Azm400 μg/mL。各组每浓度于细胞培养板中设5复孔，每孔定容1 mL。
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将24孔板置37 ℃、5%CO2细胞培养箱中孵育24 h，各孔常规制样以流式细胞仪检测感染体系中游离速殖子、感染Mφ以及未感染Mφ各组分比例变化，检测结果用FlowJoV10软件分析。
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按照前述方法加药孵育24 h后各孔轻柔混匀取样以1 500 r/min离心10 min，弃上清液取6 μL置无菌EP管, 加入6 μL小牛血清轻柔混匀并简短离心，此时取3 μL涂片以吉姆萨染液A液与B液以1∶9比例充分混匀后滴加染色，10 min后以细水流冲洗(勿直接冲洗涂膜)，晾干后油镜观察并拍照。
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采用单因素方差分析。
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根据前期检测结果，将提纯后的(1~2)×106个RH-GFP速殖子经腹腔感染小鼠的第2~3天，腹水中Mφ与游离虫体数目的比例约为1∶1，小鼠腹腔Mφ的感染率接近50%，感染第4天，腹腔Mφ的整体数量急剧下降，游离虫体数目迅速上升(见图 1)。为更加便捷，在反复预实验后确立选取感染后2~3 d的小鼠腹腔抽提物进行流式检测(见图 2)。
图 1 RH-GFP感染后第3, 4天小鼠腹腔抽提物组分比例流式细胞图
图 2 RH-GFP感染后第3天的腹腔抽提物涂片(同一视野，红色箭头示感染Mϕ)
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与对照组相比，Art组速殖子自3.125 μg/mL起呈梯度减少(P < 0.01)，50 μg/mL时，游离虫体比例已经低于0.3%(P < 0.01)，Mφ感染率自1.562 5 μg/mL逐渐下降，在6.25 μg/mL已明显低于对照组(P < 0.01)，至50 μg/mL时低于1.6%(见图 3、表 1)。Azm组随药物浓度递增，速殖子比例下降明显(P < 0.01)，在400 μg/mL时虫体比例低于0.6%，Mφ感染率低于3.5%(见图 4、表 2)。Art+Azm组速殖子随药物浓度升高明显减少(P < 0.01)，在Art12.5 +Azm100 μg/mL组，游离虫体的比例低于0.04%，此时Mφ感染率低于1.8%(见图 5与表 3)。
图 3 梯度浓度Art作用24h后感染体系各组分比例变化流式图
分组 未感染Mφ/% 感染Mφ/% 游离虫体/% Mφ感染率/% 对照组 2.37±0.16 2.38±0.07 82.98±2.33 50.09±2.30 Art/(μg/mL) 1.562 5 2.32±0.02 3.42±0.17 81.17±0.51 59.58±0.96 3.125 2.59±0.15 3.22±0.07 74.00±0.53 55.41±1.84 6.25 3.82±0.05 2.41±0.06 56.33±1.14 38.65±0.89 12.5 5.24±0.26 1.73±0.08 35.50±0.44 24.82±0.15 25 9.26±0.25 1.29±0.04 9.84±1.43 12.23±0.28 50 13.15±0.59 0.09±0.11 0.12±0.14 0.67±0.78 100 13.83±0.65 — — — 200 14.57±0.67 — — — F 568.60 864.30 3 603.00 1 421.00 P < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 MS组内 0.156 0.009 1.361 1.586 表 1 梯度浓度Art作用24 h后感染体系各组分比例变化(ni=3；x±s)
图 4 梯度浓度Azm作用24h后感染体系各组分比例变化流式图
分组 未感染Mφ/% 感染Mφ/% 游离虫体/% Mφ感染率/% 对照组 2.37±0.16 2.38±0.07 82.98±2.33 50.09±2.30 Azm/(μg/mL) 12.5 2.73±0.05 3.29±0.09 66.47±2.89 54.67±1.05 25 3.80±0.06 2.20±0.01 35.63±0.31 36.68±0.29 50 4.85±0.27 1.57±0.04 18.77±1.36 24.44±0.77 100 6.80±0.14 1.53±0.02 10.11±1.19 18.34±0.44 200 9.23±0.22 1.27±0.02 4.30±0.14 12.12±0.35 400 9.99±0.48 0.16±0.18 0.29±0.33 1.51±1.75 800 14.50±0.53 — — — 1 600 17.40±0.46 — — — F 869.30 668.90 1 692.00 1 021.00 P < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 MS组内 0.147 0.007 1.125 1.326 表 2 梯度浓度Azm作用24 h后感染体系各组分比例变化(ni=3；x±s)
图 5 梯度浓度Art+Azm作用24h后感染体系各组分比例变化流式图
分组 未感染Mφ/% 感染Mφ/% 游离虫体/% Mφ感染率/% 对照组 2.37±0.16 2.38±0.07 82.98±2.33 50.09±2.30 Art+Azm/(μg/mL) 1.562 5+12.5 4.24±0.15 1.61±0.07 26.63±0.51 27.53±1.33 3.125+25 6.84±0.60 1.32±0.05 8.57±1.41 16.26±1.73 6.25+50 8.32±0.97 1.13±0.06 3.21±1.42 12.02±1.61 12.5+100 9.33±0.08 0.16±0.02 0.03±0.01 1.65±0.15 25+200 13.70±0.17 — — — 50+400 14.43±0.21 — — — F 350.40 1 239.00 2 089.00 590.70 P < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 MS组内 0.204 0.005 1.263 1.358 表 3 梯度浓度Art+Azm作用24 h后感染体系各组分比例变化(ni=3；x±s)
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对照组速殖子呈新月形或香蕉状，形态没有非常明显的变化，经吉姆萨染色后胞质呈浅蓝色而胞核为紫红色。其余各组中虫体形态、结构随药物浓度上升而逐渐崩塌。低浓度组中虫体首先呈现外形肿胀，内部出现空泡；随药物浓度增加，虫体变形明显，弓状弧消失，体内空泡增多增大呈泡沫状，部分胞膜、核膜断裂，内容物溢出；至高浓度组，虫体破碎，胞核固缩深染，胞质溶解，视野中无完整虫体存在(见图 6)。
图 6 随药物浓度增加虫体形态结构的变化(吉姆萨染色)
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伴随宠物饲养的普遍性、畜牧业的发展以及饮食方式的多样化，人兽共患的弓形虫病仍是世界性的公共卫生问题。传统用药方案疗程长、根治率低、不良反应大[17-18]，抗弓形虫药物的筛选任重道远。Art由我国自主研制，为青蒿素衍生物，其药理作用广泛，药物活性显著，不仅是临床一线抗疟药物，在病毒、肿瘤及其他寄生虫领域也有较强作用。有研究[22, 24-25]提示，Art对弓形虫病有积极治疗作用。
本实验利用虫株胞质稳定表达绿色荧光蛋白的转基因弓形虫(RH-GFP)，以流式细胞仪检测分析，相比以往台盼蓝染色后以肉眼计数虫体存活率更为准确、客观。利用此方法分析药物的的抗弓形虫作用较为创新，且该虫株在运动能力、胞内增殖速度和致病性上与野生虫株无显著差异[26]。Mφ是弓形虫感染早期宿主固有免疫屏障中的重要成员之一，与感染结局息息相关，因此观察药物对Mφ感染弓形虫后的影响极具潜在临床应用价值。有研究[23, 27]显示，当Azm和Art配伍时亦获得了更好的抗虫效果。所以我们选择Azm作为阳性对照的同时又设置了Art+Azm组进行了联合用药的尝试。本实验中药物作用剂量参照以往文献报道(剂量大小较为参差宽泛)以及前期预实验结果自行设计，以10∶1→5∶1→2∶1倍比稀释梯度摸索，确立有效范围后以2∶1倍比稀释设立。为减小误差，每组每浓度设5个复孔，统计时舍去最高值和最低值，取其余三孔平均值，同时在每浓度梯度上进行了3次以上的流式检测，取3次检测结果代表。结果显示，50 μg/mL浓度Art 24 h后可达99%以上的攻虫效果，杀灭速殖子、降低Mφ感染率，而Azm在400 μg/mL时方接近此效果。联合组展现出一定优势，Art 12.5+Azm 100 μg/mL组统计结果与Art 50 μg/mL组或Azm 400 μg/mL组结果接近，同等效果下药物浓度梯度有所降低。吉姆萨染色显示，随着药物浓度的梯度上升，虫体由轻度肿胀到破裂，内部结构从轮廓模糊到深染固缩，该结果从形态学角度验证了药物的杀虫效果。
本实验结果表明，Art在体外具有较强的抗弓形虫作用，Art与Azm联合用药亦有较佳效果，这为其作为弓形虫病治疗药物提供了实验依据。Art杀伤速殖子的机制以及对组织内包囊的效果有待进一步研究。
青蒿琥酯体外抗弓形虫作用的实验研究
Anti-Toxoplasma Gondii effect of artesunate in vitro
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摘要:
目的观察青蒿琥酯(Artesunate, Art)对体外培养的弓形虫感染模型的抑制作用。 方法采用表达绿色荧光蛋白的转基因弓形虫RH株(RH-GFP)感染小鼠腹腔巨噬细胞(Macrophage, Mφ), 建立体外作用模型并分为对照组(0.9%氯化钠溶液阴性对照); Art组, 药物浓度分别为1.562 5、3.125、6.25、12.5、25、50、100和200 μg/mL; 阿奇霉素(Azithromycin, Azm)组(阳性对照), 药物浓度分别为12.5、25、50、100、200、400、800和1 600 μg/mL; Art+Azm组, 药物浓度分别为: Art1.562 5+Azm12.5、Art3.125+Azm25、Art6.25+Azm50、Art12.5+Azm100、Art25+Azm200和Art50+Azm400 μg/mL。各组孵育24 h后以流式细胞仪检测感染体系中虫体和细胞比例变化, 以吉姆萨染色观察速殖子形态和结构变化。 结果与对照组相比, Art组弓形虫速殖子比例自3.125 μg/mL起随着药物浓度的增加明显下降(P < 0.01), 50 μg/mL时游离虫体比例低于0.3%, Mφ感染率低于1.6%。Azm组速殖子在400 μg/mL时比例低于0.6%, Mφ感染率低于3.5%。Art+Azm组中Art12.5 +Azm100 μg/mL起速殖子比例低于0.04%, 此时Mφ感染率低于1.8%。吉姆萨染色显示, 各组随着药物浓度增加, 弓形虫速殖子由香蕉状逐渐肿胀变形, 细胞质内呈泡沫状, 内部结构崩塌瓦解, 直至细胞膜破裂内容物溢出, 视野内仅残留固缩深染的胞核或碎片。 结论体外实验中, Art可显著杀伤弓形虫游离速殖子, 降低宿主细胞感染率, 该抗虫效果在一定范围内与浓度呈正相关。 Abstract:ObjectiveTo explore the inhibitory effect of artesunate (Art) on an in vitro cultured model of Toxoplasma Gondii infection. MethodsAn in vitro infection model was established by infecting macrophages (Mφ) in the peritoneal cavity of mice with Toxoplasma Gondii RH strain expressing stable green fluorescent protein in the cytoplasm (RH-GFP).The experiment was divided into four groups: control group (0.9% sodiuom chloride solution), Art group (concentrations of 1.562 5, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100 and 200 μg/mL), Azithromycin (Azm) group (positive control, concentrations of 12.5, 25, 50, 100, 200, 400, 800 and 1 600 μg/mL), Art+Azm group (concentrations of Art 1.562 5+Azm 12.5, Art 3.125+Azm 25, Art 6.25+Azm 50, Art 12.5+Azm 100, Art 25+Azm 200 and Art 50+Azm 400 μg/mL.After 24 hours of incubation, the change in proportion of parasites and cells was detected by flow cytometry, and the morphology and structural changes of tachyzoites were observed by Giemsa staining. ResultsCompared with the control group, the proportion of tachyzoites in the Art group decreased significantly with the increase of concentration from 3.125 μg/mL (P < 0.01), the proportion of free parasites was less than 0.3% at 50 μg/mL, and the infection rate of Mφ was less than 1.6%.In Azm group, the proportion of tachyzoites was less than 0.6% at 400 μg/mL, and the infection rate of Mφ was less than 3.5%.In the Art+Azm group, the proportion of tachyzoites in the Art 12.5+Azm 100 μg/mL group was less than 0.04%, and the infection rate of Mφ was less than 1.8%.Giemsa staining showed that with the increase of concentration in each group, the Toxoplasma Gondii tachyzoites gradually swelled and transformed from a banana shape to one with foamy cytoplasm.The internal structure collapsed and disintegrated until the cell membrane ruptured and contents spilled out, and only the solidified and deeply stained nuclei or fragments remained in the field of view. ConclusionsArt can significantly kill the free tachyzoites of Toxoplasma Gondii in vitro experiment and reduce the infection rate of host cells, and the anti-Toxoplasma Gondii effect is positively correlated with the concentration within a certain range. -
Key words:
- artesunate /
- Toxoplasma Gondii /
- in vitro /
- macrophage /
- flow cytometry
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表 1 梯度浓度Art作用24 h后感染体系各组分比例变化(ni=3；x±s)
分组 未感染Mφ/% 感染Mφ/% 游离虫体/% Mφ感染率/% 对照组 2.37±0.16 2.38±0.07 82.98±2.33 50.09±2.30 Art/(μg/mL) 1.562 5 2.32±0.02 3.42±0.17 81.17±0.51 59.58±0.96 3.125 2.59±0.15 3.22±0.07 74.00±0.53 55.41±1.84 6.25 3.82±0.05 2.41±0.06 56.33±1.14 38.65±0.89 12.5 5.24±0.26 1.73±0.08 35.50±0.44 24.82±0.15 25 9.26±0.25 1.29±0.04 9.84±1.43 12.23±0.28 50 13.15±0.59 0.09±0.11 0.12±0.14 0.67±0.78 100 13.83±0.65 — — — 200 14.57±0.67 — — — F 568.60 864.30 3 603.00 1 421.00 P < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 MS组内 0.156 0.009 1.361 1.586 
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表 2 梯度浓度Azm作用24 h后感染体系各组分比例变化(ni=3；x±s)
分组 未感染Mφ/% 感染Mφ/% 游离虫体/% Mφ感染率/% 对照组 2.37±0.16 2.38±0.07 82.98±2.33 50.09±2.30 Azm/(μg/mL) 12.5 2.73±0.05 3.29±0.09 66.47±2.89 54.67±1.05 25 3.80±0.06 2.20±0.01 35.63±0.31 36.68±0.29 50 4.85±0.27 1.57±0.04 18.77±1.36 24.44±0.77 100 6.80±0.14 1.53±0.02 10.11±1.19 18.34±0.44 200 9.23±0.22 1.27±0.02 4.30±0.14 12.12±0.35 400 9.99±0.48 0.16±0.18 0.29±0.33 1.51±1.75 800 14.50±0.53 — — — 1 600 17.40±0.46 — — — F 869.30 668.90 1 692.00 1 021.00 P < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 MS组内 0.147 0.007 1.125 1.326
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表 3 梯度浓度Art+Azm作用24 h后感染体系各组分比例变化(ni=3；x±s)
分组 未感染Mφ/% 感染Mφ/% 游离虫体/% Mφ感染率/% 对照组 2.37±0.16 2.38±0.07 82.98±2.33 50.09±2.30 Art+Azm/(μg/mL) 1.562 5+12.5 4.24±0.15 1.61±0.07 26.63±0.51 27.53±1.33 3.125+25 6.84±0.60 1.32±0.05 8.57±1.41 16.26±1.73 6.25+50 8.32±0.97 1.13±0.06 3.21±1.42 12.02±1.61 12.5+100 9.33±0.08 0.16±0.02 0.03±0.01 1.65±0.15 25+200 13.70±0.17 — — — 50+400 14.43±0.21 — — — F 350.40 1 239.00 2 089.00 590.70 P < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 MS组内 0.204 0.005 1.263 1.358
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[1] DJURKOVIĆ-DJAKOVIĆ O, DUPOUY-CAMET J, VAN DER GIESSEN J, et al. Toxoplasmosis: overview from a one health perspective[J]. Food Waterborne Parasitol, 2019, 15: e00054. doi: 10.1016/j.fawpar.2019.e00054 [2] YAROVINSKY F. Innate immunity to Toxoplasma gondii infection[J]. Nat Rev Immunol, 2014, 14(2): 109. doi: 10.1038/nri3598 [3] MAHMOUD ME, UI F, SALMAN D, et al. Mechanisms of interferon-beta-induced inhibition of Toxoplasma gondii growth in murine macrophages and embryonic fibroblasts: role of immunity-related GTPase M1[J]. Cell Microbiol, 2015, 17(7): 1069. doi: 10.1111/cmi.12423 [4] MARTORELLI DI GENOVA B, WILSON SK, DUBEY JP, et al. Intestinal delta-6-desaturase activity determines host range for Toxoplasma sexual reproduction[J]. PLoS Biol, 2019, 17(8): e3000364. doi: 10.1371/journal.pbio.3000364 [5] MONTAZERI M, MIKAEILI GALEH T, MOOSAZADEH M, et al. The global serological prevalence of Toxoplasma gondii in felids during the last five decades (1967-2017): a systematic review and meta-analysis[J]. Parasit Vectors, 2020, 13(1): 82. doi: 10.1186/s13071-020-3954-1 [6] MOLAN A, NOSAKA K, HUNTER M, et al. Global status of Toxoplasma gondii infection: systematic review and prevalence snapshots[J]. Trop Biomed, 2019, 36(4): 898. [7] BEN-HARARI RR, GOODWIN E, CASOY J. Adverse event profile of pyrimethamine-based therapy in toxoplasmosis: a systematic review[J]. Drugs R D, 2017, 17(4): 523. doi: 10.1007/s40268-017-0206-8 [8] LASS A, PIETKIEWICZ H, MODZELEWSKA E, et al. Detection of Toxoplasma gondii oocysts in environmental soil samples using molecular methods[J]. Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2009, 28(6): 599. doi: 10.1007/s10096-008-0681-5 [9] 沈继龙, 余莉. 我国弓形虫病我国弓形虫病流行概况及防治基础研究进展[J]. 中国血吸虫病防治杂志, 2019, 31(1): 71. [10] YAO N, HE JK, PAN M, et al. In vitro evaluation of lavandula angustifolia essential oil on anti-toxoplasma activity[J]. Front Cell Infect Microbiol, 2021, 11: 755715. doi: 10.3389/fcimb.2021.755715 [11] PORTES JA, SOUZA TG, DOS SANTOS TA, et al. Reduction of Toxoplasma gondii development due to inhibition of parasite antioxidant enzymes by a dinuclear iron(Ⅲ) compound[J]. Antimicrob Agents Chemother, 2015, 59(12): 7374. doi: 10.1128/AAC.00057-15 [12] WOHLFERT EA, BLADER IJ, WILSON EH. Brains and brawn: Toxoplasma infections of the central nervous system and skeletal muscle[J]. Trends Parasitol, 2017, 33(7): 519. doi: 10.1016/j.pt.2017.04.001 [13] NEVILLE AJ, ZACH SJ, WANG X, et al. Clinically available medicines demonstrating anti-Toxoplasma activity[J]. Antimicrob Agents Chemother, 2015, 59(12): 7161. doi: 10.1128/AAC.02009-15 [14] BLADER IJ, COLEMAN BI, CHEN C, et al. Lytic cycle of Toxoplasma gondii: 15 years later[J]. Annu Rev Microbiol, 2015, 69: 463. doi: 10.1146/annurev-micro-091014-104100 [15] ROUGIER S, MONTOYA JG, PEYRON F. Lifelong persistence of Toxoplasma cysts: a questionable dogma[J]. Trends Parasitol, 2017, 33(2): 93. doi: 10.1016/j.pt.2016.10.007 [16] MONTAZERI M, MEHDI S, SHAHABEDDIN S, et al. A systematic review of in vitro and in vivo activities of anti-Toxoplasma drugs and compounds (2006-2016)[J]. Front Microbiol, 2017, 8: 25. [17] LIU Y, TANG Y, TANG X, et al. Anti-Toxoplasma gondii effects of a novel spider peptide XYP1 in vitro and in vivo[J]. Biomedicines, 2021, 9(8): 934. doi: 10.3390/biomedicines9080934 [18] HUFFMAN AM, AYARIGA JA, NAPIER A, et al. Inhibition of Toxoplasma gondii growth by dihydroquinine and its mechanisms of action[J]. Front Cell Infect Microbiol, 2022, 12: 852889. doi: 10.3389/fcimb.2022.852889 [19] 张雪飞, 王宏伟, 韩少杰, 等. 青蒿素及其衍生物抗寄生虫研究进展[J]. 动物医学进展, 2018, 39(7): 93. [20] DE OLIVEIRA TC, SILVA DA, ROSTKOWSKA C, et al. Toxoplasma gondii: effects of Artemisia annua L. on susceptibility to infection in experimental models in vitro and in vivo[J]. Exp Parasitol, 2009, 122(3): 233. doi: 10.1016/j.exppara.2009.04.010 [21] 李明, 刘洪江, 崔向军. 青蒿素类药物在非疟疾疾病中的研究进展[J]. 中国全科医学, 2018, 21(12): 1508. [22] 陈炘, 邓存良. 青蒿素衍生物治疗AIDS合并脑弓形虫感染2例[J]. 传染病信息, 2016, 29(6): 366. [23] 王卫群, 田春林, 申继清, 等. 阿奇霉素、乙酰螺旋霉素及青蒿琥酯抗小鼠弓形虫感染的研究[J]. 中国病原生物学杂志, 2013(2): 135. [24] NAGAMUNE K, BEATTY WL, SIBLEY LD, et al. Artemisinin induces calcium-dependent protein secretion in the protozoan parasite Toxoplasma gondii[J]. Eukaryot Cell, 2007, 6(11): 2147. [25] 郭海婷, 魏艳梅, 陈新亮, 等. 12种中草药水煎剂体外抑制弓形虫感染效果的real-time PCR评价[J]. 中国兽医科学, 2018, 48(12): 1569. [26] JI YS, SUN XM, LIU XY, et al. Exogenous nitricoxide could induce Toxoplasma gondii egress from infected macrophages[J]. Exp Parasitol, 2013, 133: 70. [27] 尹卫东, 高全成, 刘向东, 等. 双氢青蒿素和阿奇霉素对小鼠体内弓形虫速殖子超微结构的影响[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2009, 27(4): 325. -
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