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IL-34介导的NF-кB信号通路对根尖牙乳头干细胞增殖、迁移的调节作用

武峻捷 朱永娜 姜丽娜 武庆华 张伟健 石昕 刘茜

引用本文:
Citation:

IL-34介导的NF-кB信号通路对根尖牙乳头干细胞增殖、迁移的调节作用

    作者简介: 武峻捷(1998-),男,硕士研究生
    通讯作者: 刘茜, 871190697@qq.com
  • 基金项目:

    蚌埠医学院研究生创新创业自然科学项目 Byycx22146

    蚌埠医学院自然科学研究重点项目 2021byzd192

  • 中图分类号: R78

Regulation of IL-34-mediated NF-кB signaling pathway on proliferation and migration of stem cells from apical papilla

    Corresponding author: LIU Xi, 871190697@qq.com
  • CLC number: R78

  • 摘要: 目的探讨白细胞介素-34(IL-34)能否通过调控核因子-кB(NF-кB)影响根尖牙乳头干细胞(SCAPs)增殖、迁移。方法取小鼠中切牙根尖牙乳头组织, 酶消化法传代培养SCAPs; 流式细胞术鉴定SCAPs表面CD44、CD45、CD90以及CSF-1R的表达; 将SCAPs分为4组: 空白对照组、IL-34组(100 ng/mL IL-34)、CSF-1R组(100 ng/mL IL-34+25 ng/mL anti-CSF-1R)和NF-кB组(100 ng/mL IL-34+1 μmol/L BMS-345541);Western blotting分析各组中, 30、60、120 min时SCAPs细胞质、细胞核中p-IкBα、IкBα、p-P65及p65蛋白的相对表达量; Transwell实验分析各组SCAPs迁移能力; 将每组IL-34更换为50 ng/mL, CCK-8分析各组SCAPs增殖变化情况。结果流式细胞术鉴定SCAPs表达CD44、CD90阳性, CD45阴性; SCAPs表面表达CSF-1R;与对照组SCAPs相比, IL-34处理后的SCAPs细胞质、细胞核内p-IкBα、p-P65与细胞质、细胞核中p-P65相对表达量显著增加, SCAPs增殖、迁移能力增强。与IL-34组相比CSF-1R组、NF-кB组内SCAPs增殖、迁移能力降低, SCAPs细胞质、细胞核中p-IкBα、p-P65与胞核中p-P65蛋白表达明显减少。结论IL-34可调节SCAPs中NF-кB信号通路, 并通过NF-кB信号通路调节IL-34的增殖和迁移。
  • 图 1  SCAPs的培养

    图 2  流式细胞仪鉴定SCAPs

    图 3  流式细胞仪鉴定SCAPs表面CSF-1R的表达

    图 4  细胞培养不同时间点各组SCAPs胞质中IкBα、p-IкBα、p65及p-P65蛋白表达情况

    图 5  细胞培养不同时间点各组SCAPs胞核中p-P65蛋白表达情况

    表 1  各组SCAPs细胞浆中IкBα、p-IкBα、p65及p-P65蛋白的相对表达量(x±s)

    分组 n IкBα/β-actin p-IкBα/β-actin p65/β-actin p-P65/β-actin
    30 min
      对照组 3 0.980±0.014 0.452±0.123 0.987±0.025 0.447±0.031
      IL-34组 3 0.990±0.028 0.967±0.096** 1.008±0.015 0.975±0.035**
      CSF-1R组 3 1.021±0.016 0.825±0.039 1.006±0.014 0.754±0.119##
      NF-кB组 3 1.004±0.035 0.664±0.027## 0.956±0.004 0.666±0.065##
      F 3.11 43.95 12.37 54.71
      P >0.05 < 0.01 < 0.01 < 0.01
      MS组内 0.000 0.003 0.000 0.002
    60 min
      对照组 3 1.075±0.106 0.445±0.017 1.03±0.028 0.493±0.032
      IL-34组 3 1.062±0.149 0.971±0.042** 1.003±0.095 1.045±0.049**
      CSF-1R组 3 1.080±0.01 0.786±0.107## 1.004±0.03 0.795±0.002##
      NF-кB组 3 1.072±0.041 0.593±0.033## 1.012±0.013 0.646±0.035##
      F 12.37 84.57 0.05 277.60
      P >0.05 < 0.01 >0.05 < 0.01
      MS组内 0.004 0.001 0.001 0.000
    120 min
      对照组 3 1.045±0.081 0.495±0.004 0.986±0.012 0.467±0.001
      IL-34组 3 1.061±0.092 1.045±0.075** 1.03±0.064 1.04±0.016**
      CSF-1R组 3 1.089±0.057 0.763±0.042## 1.013±0.017 0.775±0.002##
      NF-кB组 3 1.007±0.007 0.568±0.100## 0.906±0.026## 0.587±0.063##
      F 1.52 82.62 15.62 352.80
      P >0.05 < 0.01 < 0.01 < 0.01
      MS组内 0.002 0.002 0.000 0.000
    q检验:与对照组相比较**P < 0.01;与IL-34组比较##P < 0.01
    下载: 导出CSV

    表 2  各组SCAPs胞核中p-P65蛋白的相对表达量(x±s)

    分组 n p-P65/H3
    30 min 60 min 120 min
    对照组 3 0.363±0.012 0.334±0.042 0.369±0.007
    IL-34组 3 0.889±0.097* 1.034±0.009* 0.992±0.027*
    CSF-1R组 3 0.688±0.060## 0.666±0.040## 0.615±0.037##
    NF-кB组 3 0.598±0.050## 0.516±0.026## 0.492±0.036##
    F 36.04 247.00 248.50
    P < 0.01 < 0.01 < 0.01
    MS组内 0.003 0.001 0.000
    q检验:与对照组相比较*P < 0.05;与IL-34组比较##P < 0.01
    下载: 导出CSV

    表 3  CCK-8检测IL-34组、CSF-1R组、NF-кB组对SCAPSs增殖的影响(OD值; x±s)

    分组 n 0 h 24 h 72 h 120 h 168 h 216 h
    对照组 3 0.309±0.020 0.486±0.011 0.828±0.013 1.102±0.016 1.35±0.012 1.608±0.023
    IL-34组 3 0.301±0.012 0.745±0.011** 1.129±0.013** 1.415±0.011** 1.831±0.026** 2.034±0.041**
    CSF-1R组 3 0.307±0.01 0.522±0.013## 0.991±0.018## 1.272±0.019## 1.526±0.014## 1.780±0.010##
    NF-кB组 3 0.307±0.012 0.513±0.014## 0.987±0.018## 1.229±0.018## 1.483±0.014## 1.696±0.014##
    F 0.58 789.70 512.30 538.00 1 186.00 467.40
    P >0.05 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01
    MS组内 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
    q检验:与对照组相比较**P < 0.01;与IL-34组比较##P < 0.01
    下载: 导出CSV

    表 4  Transwell检测IL-34组、CSF-1R组、NF-кB组迁移细胞数目(x±s)

    分组 n 下室细胞数/个 F P MS组内
    对照组 3 24.111±8.838 548.10 < 0.01 92.280
    IL-34组 3 195.000±13.171**
    CSF-1R组 3 84.555±8.889##
    NF-кB组 3 51.666±6.204##
    q检验:与对照组相比较**P < 0.01;与IL-34组比较##P < 0.01
    下载: 导出CSV
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出版历程
  • 收稿日期:  2022-11-06
  • 录用日期:  2023-06-16
  • 刊出日期:  2023-08-15

IL-34介导的NF-кB信号通路对根尖牙乳头干细胞增殖、迁移的调节作用

    通讯作者: 刘茜, 871190697@qq.com
    作者简介: 武峻捷(1998-),男,硕士研究生
  • 1. 蚌埠医学院第二附属医院 口腔科, 安徽 蚌埠 233040
  • 2. 蚌埠医学院 口腔医学院, 安徽 蚌埠 233030
基金项目:  蚌埠医学院研究生创新创业自然科学项目 Byycx22146蚌埠医学院自然科学研究重点项目 2021byzd192

摘要: 目的探讨白细胞介素-34(IL-34)能否通过调控核因子-кB(NF-кB)影响根尖牙乳头干细胞(SCAPs)增殖、迁移。方法取小鼠中切牙根尖牙乳头组织, 酶消化法传代培养SCAPs; 流式细胞术鉴定SCAPs表面CD44、CD45、CD90以及CSF-1R的表达; 将SCAPs分为4组: 空白对照组、IL-34组(100 ng/mL IL-34)、CSF-1R组(100 ng/mL IL-34+25 ng/mL anti-CSF-1R)和NF-кB组(100 ng/mL IL-34+1 μmol/L BMS-345541);Western blotting分析各组中, 30、60、120 min时SCAPs细胞质、细胞核中p-IкBα、IкBα、p-P65及p65蛋白的相对表达量; Transwell实验分析各组SCAPs迁移能力; 将每组IL-34更换为50 ng/mL, CCK-8分析各组SCAPs增殖变化情况。结果流式细胞术鉴定SCAPs表达CD44、CD90阳性, CD45阴性; SCAPs表面表达CSF-1R;与对照组SCAPs相比, IL-34处理后的SCAPs细胞质、细胞核内p-IкBα、p-P65与细胞质、细胞核中p-P65相对表达量显著增加, SCAPs增殖、迁移能力增强。与IL-34组相比CSF-1R组、NF-кB组内SCAPs增殖、迁移能力降低, SCAPs细胞质、细胞核中p-IкBα、p-P65与胞核中p-P65蛋白表达明显减少。结论IL-34可调节SCAPs中NF-кB信号通路, 并通过NF-кB信号通路调节IL-34的增殖和迁移。

English Abstract

  • 2006年SONOYAMA等[1]分离培养人第三磨牙根尖部组织后,发现一种具有高增殖、分化潜能的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs), 命名为根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAPs)。作为MSCs的一种,SCAPs具有较高的增殖潜能、迁移能力,且易获取[2-4]。因此SCAPs有望作为种子细胞用于牙组织再生,其相关研究在一定程度上可促进牙组织工程的发展。白细胞介素(IL)-34是LIN等[5]发现的一种炎症因子。本课题组前期研究发现,IL-34对SCAPS的增殖、迁移具有调节作用[6-8],但其调节机制尚不清楚。核因子-κB受体(nuclear factor-kappa B,NF-кB)是细胞内重要的核转录因子[9]。研究[10-11]发现,TNF-α、IL-1β等炎症因子可介导NF-кB信号通路,提高SCAPs的增殖、迁移能力。而抑制NF-кB信号通路后,SCAPs的增殖和迁移能力受到显著抑制[12]。此外IL-34也已被证明可以调节MSCs中NF-κB信号通路[13]。本课题组推测IL-34可能通过介导NF-кB信号通路从而调节SCAPs的增殖和迁移。本课题以小鼠SCAPs为研究对象,探讨体外条件下IL-34通过NF-кB信号通路对SCAPs增殖、迁移的影响,现作报道。

    • 离心机(上海卢湘仪离心机仪器有限公司);流式细胞仪(BD,美国);细胞培养板(TRUELINE,美国);CO2恒温培养箱(Thermo,美国);倒置显微镜(OLYMPUS,日本);胎牛血清(GIBCO,美国);DMEM(Hyclone,美国);胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)(Solarbio,美国);CCK-8(SAB,美国);酶标分析仪(北京普朗新技术有限公司)。

    • 取10只1周龄的小鼠麻醉处死后,将小鼠下颌中切牙在无菌条件下拔出,转入无菌超净工作台中,显微镜下用含双抗的磷酸缓冲液(PBS)冲洗分离小鼠根尖牙乳头组织,将其剪碎成约为1 mm3的小块。然后将组织块消化30~40 min,然后1 000 r/min离心5 min后弃上清液,加入含20%FBS和1%双抗的高糖DMEM培养基中,37 ℃,5%CO2培养。待细胞融合达到70%~80%时,用0.25%的胰蛋白酶按1∶3消化传代[14]。后续实验使用生长状态良好的P3代细胞。

    • 取P3代SCAPs,将其计数并以107个/孔接种于12孔培养板中,10%PBS洗涤2次后,离心弃上清液,吹打均匀细胞悬液,分别加入适量的CD44、CD45、CD90,同时设立阴性对照组,避光孵育1 h后,上流式细胞仪检测表面标志物。

    • 2.5 g/L胰蛋白酶消化SCAPs,离心收集生长状态良好的P3代细胞,调整细胞密度为107个/毫升。待细胞悬液吹打均匀后,每个EP管内加入100 μL细胞悬液,然后分别加入适量的APC-labeled anti-CSF-1R,同时设立阴性对照组。4 ℃环境中避光孵育30 min,加入200 μL PBS重悬,移入流式管内,上流式细胞仪,检测上述CSF-1R的表达情况。

    • 实验分为4组包括空白对照组、IL-34组(100 ng/mL IL-34)、CSF-1R组(100 ng/mL IL-34+25 ng/mL anti-CSF-1R,CSF-1R受体抑制剂)、NF-кB组(100 ng/mL IL-34+1μmol/L BMS-345541,NF-кB信号通路抑制剂)。

    • 取生长状态良好的P3代细胞,以2×105个/孔接种于6孔培养板,以10%FBS的α-MEM培养细胞。待细胞融合至70%时,饥饿24 h。在各组培养液中培养30、60、120 min时,根据相关文献[12]提取细胞质蛋白和细胞核蛋白的方法收集SCAPs细胞质和细胞核中的总蛋白,Western blotting分析各组中各时间点IкBα、p-IкBα、p65及p-P65的表达情况。实验重复3次。

    • 取生长状态良好的P3代细胞,以2×103个/孔接种到96孔板中培养,待细胞贴壁后饥饿培养24 h,更换无血清培养液进行同步化处理, 按照上述实验方法分为4组,IL-34的浓度更换为50 ng/mL。在培养1、3、5、7 d后,将CCK-8试剂添加到每个孔中,并在37 ℃下培养2 h,在450 nm波长处测量吸光度(OD)值。实验重复3次。

    • 取生长状态良好的P3代细胞,以2×105个/孔接种于24孔膜孔径8 μm的transwell培养板中,分别加入500 μL培养液。各组按照上述实验分组加入相应试剂后并加入0.1%FBS+α-MEM培养液。用酶消化法消化细胞,用0.1%FBS的α-MEM制成均匀的细胞悬液,将transwell小室放入24孔板,按照2×104个/孔在上层小室接种细胞,下层的24孔板中加入0.7 mL含10%FBS的RPMI-1640培养基,每组3复孔,将培养板放置在37 ℃含5%CO2的培养箱中,20 h后取出小室,棉签抹去上室中残余的细胞,用4%多聚甲醛固定,0.1%结晶紫染色,PBS洗3遍,400倍显微镜下随机5个视野观察细胞,记数。实验重复3次。

    • 采用t检验、方差分析及q检验。

    • 酶消化法原代培养小鼠根尖处SCAPs镜下可见梭形细胞,传代至第三代镜下可见SCAPs呈成纤维细胞样(见图 1)。

      图  1  SCAPs的培养

    • 流式细胞仪鉴定SCAPs表面间充质细胞表面标志物CD44(89.8%)、CD90(92.0%)表达阳性,造血干细胞表面标志物CD45(4.7%)表达阴性(见图 2)。

      图  2  流式细胞仪鉴定SCAPs

    • 流式细胞术鉴定SCAPs表面CSF-1R阳性(23.1%)(见图 3)。

      图  3  流式细胞仪鉴定SCAPs表面CSF-1R的表达

    • 在细胞培养各时间点SCAPs细胞质中,与对照组相比较,IL-34组p-P65、p-IκBα蛋白表达量均显著上调(P < 0.01)。细胞培养30 min时,与IL-34组相比,CSF-1R组中SCAPs细胞质中p-P65和NF-κB组中SCAPs细胞质中p-P65、p-IκBα显著降低(P < 0.01)。细胞培养60 min、120 min时,与IL-34组相比,CSF-1R组、NF-κB组中SCAPs细胞核中p65、IκBα磷酸化水平均显著降低(P < 0.01)。细胞核蛋白结果显示:在细胞培养各时间点,与对照组相比,IL-34组p-P65表达量显著上调(P < 0.05);细胞培养60 min后CSF-1R组、NF-кB组中p-P65表达量较IL-34组呈下降趋势(P < 0.01)(见表 1~2图 4~5)。

      分组 n IкBα/β-actin p-IкBα/β-actin p65/β-actin p-P65/β-actin
      30 min
        对照组 3 0.980±0.014 0.452±0.123 0.987±0.025 0.447±0.031
        IL-34组 3 0.990±0.028 0.967±0.096** 1.008±0.015 0.975±0.035**
        CSF-1R组 3 1.021±0.016 0.825±0.039 1.006±0.014 0.754±0.119##
        NF-кB组 3 1.004±0.035 0.664±0.027## 0.956±0.004 0.666±0.065##
        F 3.11 43.95 12.37 54.71
        P >0.05 < 0.01 < 0.01 < 0.01
        MS组内 0.000 0.003 0.000 0.002
      60 min
        对照组 3 1.075±0.106 0.445±0.017 1.03±0.028 0.493±0.032
        IL-34组 3 1.062±0.149 0.971±0.042** 1.003±0.095 1.045±0.049**
        CSF-1R组 3 1.080±0.01 0.786±0.107## 1.004±0.03 0.795±0.002##
        NF-кB组 3 1.072±0.041 0.593±0.033## 1.012±0.013 0.646±0.035##
        F 12.37 84.57 0.05 277.60
        P >0.05 < 0.01 >0.05 < 0.01
        MS组内 0.004 0.001 0.001 0.000
      120 min
        对照组 3 1.045±0.081 0.495±0.004 0.986±0.012 0.467±0.001
        IL-34组 3 1.061±0.092 1.045±0.075** 1.03±0.064 1.04±0.016**
        CSF-1R组 3 1.089±0.057 0.763±0.042## 1.013±0.017 0.775±0.002##
        NF-кB组 3 1.007±0.007 0.568±0.100## 0.906±0.026## 0.587±0.063##
        F 1.52 82.62 15.62 352.80
        P >0.05 < 0.01 < 0.01 < 0.01
        MS组内 0.002 0.002 0.000 0.000
      q检验:与对照组相比较**P < 0.01;与IL-34组比较##P < 0.01

      表 1  各组SCAPs细胞浆中IкBα、p-IкBα、p65及p-P65蛋白的相对表达量(x±s)

      分组 n p-P65/H3
      30 min 60 min 120 min
      对照组 3 0.363±0.012 0.334±0.042 0.369±0.007
      IL-34组 3 0.889±0.097* 1.034±0.009* 0.992±0.027*
      CSF-1R组 3 0.688±0.060## 0.666±0.040## 0.615±0.037##
      NF-кB组 3 0.598±0.050## 0.516±0.026## 0.492±0.036##
      F 36.04 247.00 248.50
      P < 0.01 < 0.01 < 0.01
      MS组内 0.003 0.001 0.000
      q检验:与对照组相比较*P < 0.05;与IL-34组比较##P < 0.01

      表 2  各组SCAPs胞核中p-P65蛋白的相对表达量(x±s)

      图  4  细胞培养不同时间点各组SCAPs胞质中IкBα、p-IкBα、p65及p-P65蛋白表达情况

      图  5  细胞培养不同时间点各组SCAPs胞核中p-P65蛋白表达情况

    • 实验各组SCAPs生长曲线均呈现逐渐增长趋势。与对照组相比,50 ng/mL IL-34刺激SCAPs后,细胞OD值显著增高(P < 0.01)。与IL-34组相比,经过anti-CSF-1R和NF-кB信号通路抑制剂处理后的CSF-1R组、NF-кB组,SCAPs增殖效率显著降低(P < 0.01)(见表 3)。

      分组 n 0 h 24 h 72 h 120 h 168 h 216 h
      对照组 3 0.309±0.020 0.486±0.011 0.828±0.013 1.102±0.016 1.35±0.012 1.608±0.023
      IL-34组 3 0.301±0.012 0.745±0.011** 1.129±0.013** 1.415±0.011** 1.831±0.026** 2.034±0.041**
      CSF-1R组 3 0.307±0.01 0.522±0.013## 0.991±0.018## 1.272±0.019## 1.526±0.014## 1.780±0.010##
      NF-кB组 3 0.307±0.012 0.513±0.014## 0.987±0.018## 1.229±0.018## 1.483±0.014## 1.696±0.014##
      F 0.58 789.70 512.30 538.00 1 186.00 467.40
      P >0.05 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01
      MS组内 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000
      q检验:与对照组相比较**P < 0.01;与IL-34组比较##P < 0.01

      表 3  CCK-8检测IL-34组、CSF-1R组、NF-кB组对SCAPSs增殖的影响(OD值; x±s)

    • 细胞培养20 h后检测Transwell下层细胞数,结果显示:IL-34组迁移细胞数目显著高于对照组(P < 0.01)。阻断IL-34与CSF-1R结合进而抑制NF-кB信号通路的路径后,CSF-1R组小室下方迁移细胞数目较IL-34组显著降低(P < 0.01)。直接通过BMS-345541抑制剂直接阻断NF-кB信号通路后,NF-кB组较IL-34组相比,SCAPs的迁移效率显著降低(P < 0.01)(见表 4)。

      分组 n 下室细胞数/个 F P MS组内
      对照组 3 24.111±8.838 548.10 < 0.01 92.280
      IL-34组 3 195.000±13.171**
      CSF-1R组 3 84.555±8.889##
      NF-кB组 3 51.666±6.204##
      q检验:与对照组相比较**P < 0.01;与IL-34组比较##P < 0.01

      表 4  Transwell检测IL-34组、CSF-1R组、NF-кB组迁移细胞数目(x±s)

    • SCAPs是外源性间充质干细胞的一种,通常位于未完全发育的牙根尖组织中。有研究[15]证实,相比于牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs),SCAPs具有更好的增殖、迁移效能。SCAPs同其他牙源性干细胞相比,表现出更强的增殖效率和迁移能力,且较易获取,因此被视为目前发现的最理想的牙源性种子细胞[16]。研究中通过酶消化法分离培养SCAPs,流式细胞仪检测显示SCAPs对造血干细胞特异性表面标志物CD45表达阴性,排除SCAPs是造血干细胞来源的可能性。同时SCAPs表达间充质干细胞标志物CD44、CD90,证实SCAPs的间充质来源。

      NF-кB、wnt/β-Catenin、cAMP/PKA等信号通路均可影响SCAPs增殖、迁移的过程[17]。NF-кB是细胞中重要的核转录因子,通常以p65:p50异二聚体的形式存在于细胞中。当受到微生物、真菌、病毒和致炎细胞因子等刺激物时,可激活该信号通路,促使NF-κB进入细胞核,与DNA结合继而进行各种基因的转录,进而调节各种细胞的生物功能。已有研究[18]证实氢氧化钙激活NF-κB信号通路可调节同为MSCs的DPSCs的增殖、迁移能力,促使受损的牙髓组织快速修复。此外LI等[12]研究发现,激活NF-κB信号通路后,SCAPs增殖效能、迁移速率显著增高,而通过BMS-345541抑制剂抑制NF-кB信号通路时,SCAPSs的增殖及迁移能力受到明显抑制。

      本实验发现IL-34可以刺激SCAPs细胞质中IκBα的磷酸化,继而引发了下游蛋白p65的入核后磷酸化。BMS-345541是NF-кB的信号通路抑制剂,可以有效抑制NF-кB蛋白的磷酸化,进而抑制NF-кB信号通路。实验中,当加入抑制剂BMS-345541后,p-IκBα、p-P65蛋白含量明显降低,此时细胞核内p-P65的含量同样呈下降趋势。由此进一步证实了IL-34可以调节SCAPs的NF-кB信号通路。

      MUÑOZ-GARCIA等[19]的研究发现炎症因子IL-34在MSCs中可与受体CSF-1R结合激活该细胞内的多种信号,其中包括NF-κB、JNK、JAK等发挥生物功能。通过在CSF-1R组中添加anti-CSF-1R阻断IL-34与受体CSF-1R结合,相比于IL-34组, CSF-1R组中NF-κB蛋白水平显著降低。SCAPs中的NF-кB蛋白磷酸化水平受到抑制,意味着anti-CSF-1R阻断了NF-κB信号通路。表明在SCAPs中,IL-34通过与受体CSF-1R结合进而激活NF-κB信号通路。

      IL-34作为髓系细胞(包括单核细胞、巨噬细胞和破骨细胞)增殖及存活的关键调节因子,通过巨噬细胞集落刺激因子受体发挥功能[20]。有研究[21]发现,IL-34促进关节炎成纤维细胞和类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的增殖、迁移[8]。基于IL-34对各类细胞增殖、迁移的影响,课题组前期通过MTT、划痕实验证实了,IL-34可以调节SCAPs的增殖与迁移。本实验通过CCK-8、Transwell检测方法再次设置适宜浓度的IL-34刺激SCAPs,证实IL-34可以调节SCAPs的增殖效能和迁移细胞数目。

      通过NF-κB组CCK-8、Transwell实验结果可知,抑制NF-κB信号通路后,与对照组相比,SCAPs的增殖、迁移能力显著降低。结合Western Blotting实验结果,证实了IL-34可以通过介导NF-κB信号通路,从而促进SCAPs的增殖、迁移能力。相关研究[7]显示,IL-34通过其他信号通路调节MSCs增殖和迁移。本实验发现同时加入IL-34和NF-κB抑制剂后,SCAPs的增殖、迁移高于对照组,推测IL-34可能通过其他信号通路调节SCAPs的增殖和迁移。

      CCK-8检测、Transwell实验中CSF-1R组的OD值、迁移细胞数目显著较IL-34组降低,这一发现进一步证明,抑制IL-34与CSF-1R受体结合,可以有效抑制NF-κB信号通路。由此证实,IL-34可以通过与CSF-1R受体结合激活NF-κB信号通路,继而调节SCAPs的增殖与迁移能力。

      综上所述,本实验证实IL-34可以通过与CSR-1R受体结合激活SCAPs中NF-κB信号通路,并且IL-34可能通过激活NF-κB信号通路,进而促进SCAPs增殖、迁移。

参考文献 (21)

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