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circBACH1靶向miR-4500调控口腔鳞状细胞癌HSC3细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制研究

胡洋 贾崴崴 柳星光 王立威 王晓亭

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circBACH1靶向miR-4500调控口腔鳞状细胞癌HSC3细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制研究

    作者简介: 胡洋(1989-), 女, 主治医师
  • 中图分类号: R739.8

Molecular mechanism of circBACH1 regulating the proliferation, migration and invasion of oral squamous cell carcinoma HSC3 cells by targeting miR-4500

  • CLC number: R739.8

  • 摘要: 目的探讨circBACH1对口腔鳞状细胞癌HSC3细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法体外培养HSC3细胞,分为si-NC组、si-circBACH1组、miR-NC组、miR-4500组、si-circBACH1+anti-miR-NC组、si-circBACH1+anti-miR-4500组,分别转染si-NC、si-circBACH1、miR-NC、miR-4500 mimics、si-circBACH1与anti-miR-NC、si-circBACH1与anti-miR-4500。qRT-PCR检测口腔鳞状细胞癌组织、癌旁组织及各组HSC3细胞中circBACH1、miR-4500的表达量;CCK-8、平板克隆形成实验分别检测细胞增殖及克隆形成能力;划痕实验与Transwell小室实验分别检测细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测circBACH1对miR-4500的靶向调控作用;Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin的蛋白表达量。结果与癌旁组织比较,口腔鳞状细胞癌组织中circBACH1的表达量明显升高(P < 0.01),miR-4500的表达量明显降低(P < 0.01)。与si-NC组比较,si-circBACH1组HSC3细胞活力明显降低(P < 0.01),细胞克隆形成数和侵袭细胞数均明显减少(P < 0.01),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平均明显降低(P < 0.01),E-cadherin蛋白水平明显升高(P < 0.01)。与miR-NC组比较,miR-4500组HSC3细胞活力明显降低(P < 0.01),细胞克隆形成数和侵袭细胞数均明显减少(P < 0.01),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平均明显降低(P < 0.01),E-cadherin蛋白水平明显升高(P < 0.01)。WT-circBACH1与miR-4500 mimics共转染组HSC3细胞的荧光素酶活性明显低于WT-circBACH1与miR-NC共转染组(P < 0.01)。qRT-PCR实验结果显示,与pcDNA组比较,pcDNA-circBACH1组miR-4500的表达量降低(P < 0.05);与si-NC组比较,si-circBACH1组miR-4500的表达量升高(P < 0.05)。与si-circBACH1+anti-miR-NC组比较,si-circBACH1+anti-miR-4500组HSC3细胞活力明显升高(P < 0.01),细胞克隆形成数和侵袭细胞数均明显增多(P < 0.01),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平均明显升高(P < 0.01),E-cadherin蛋白水平明显降低(P < 0.01)。结论干扰circBACH1表达可通过负向调控miR-4500的表达从而抑制口腔鳞状细胞癌HSC3细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。
  • 图 1  干扰circBACH1表达对HSC3细胞迁移与侵袭相关蛋白表达的影响

    图 2  miR-4500过表达对HSC3细胞迁移与侵袭相关蛋白表达的影响

    图 3  circBACH1的序列中含有与miR-4500互补的核苷酸序列

    图 4  下调miR-4500表达逆转了干扰circBACH1表达对HSC3细胞迁移与侵袭相关蛋白表达的作用

    表 1  circBACH1和miR-4500在口腔鳞状细胞癌组织中的表达(ni=39;x±s)

    分组 circBACH1 miR-4500
    癌旁组织 1.00±0.07 1.00±0.05
    口腔鳞状细胞癌组织 3.39±0.29 0.41±0.04
    t 50.40 57.54
    P < 0.01 < 0.01
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    表 2  干扰circBACH1表达对HSC3细胞增殖、侵袭、迁移及迁移与侵袭相关蛋白表达的影响(ni=9;x±s)

    分组 circBACH1 OD值 细胞克隆形成数/个 划痕愈合率/% 侵袭细胞数/个 E-cadherin蛋白 N-cadherin蛋白
    si-NC组 1.00±0.00 0.78±0.06 97.25±8.26 70.41±6.53 117.48±11.28 0.17±0.02 0.69±0.05
    si-circBACH1组 0.33±0.03 0.37±0.03 45.15±4.36 28.13±2.34 55.52±4.98 0.56±0.04 0.27±0.03
    t 67.0 18.34 16.73 18.29 15.08 26.16 21.61
    P < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01
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    表 3  miR-4500过表达对HSC3细胞增殖、侵袭、迁移及迁移与侵袭相关蛋白表达的影响(ni=9;x±s)

    分组 miR-4500 OD值 细胞克隆形成数/个 划痕愈合率/% 侵袭细胞数/个 E-cadherin蛋白 N-cadherin蛋白
    miR-NC组 1.00±0.00 0.79±0.05 99.85±7.56 75.34±6.39 113.71±12.22 0.18±0.02 0.68±0.05
    miR-4500组 3.26±0.29 0.41±0.04 53.81±4.61 33.34±3.41 61.38±5.15 0.49±0.04 0.33±0.03
    t 23.38 17.80 15.60 17.40 11.84 20.80 18.01
    P < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01
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    表 4  双荧光素酶报告实验结果(ni=9;x±s)

    分组 WT-circBACH1 MUT-circBACH1
    miR-NC组 1.01±0.08 1.04±0.08
    miR-4500组 0.43±0.04 1.02±0.07
    t 19.45 0.56
    P < 0.01 >0.05
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    表 5  circBACH1调控miR-4500的表达(ni=9;x±s)

    分组 miR-4500 F P MS组内
    pcDNA组 1.00±0.00 695.79
    pcDNA-circBACH1组 0.54±0.04* < 0.01 0.017
    si-NC组 1.02 ±0.07#
    si-circBACH1组 3.12±0.25*#▲
    q检验: 与pcDNA组*P < 0.05;与pcDNA-circBACH1组比较#P < 0.05;与si-NC组比较▲P < 0.05
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    表 6  下调miR-4500表达逆转了干扰circBACH1表达对HSC3细胞增殖、侵袭、迁移及迁移与侵袭相关蛋白表达的作用(ni=9;x±s)

    分组 miR-4500 OD值 细胞克隆形成数/个 划痕愈合率/% 侵袭细胞数/个 E-cadherin蛋白 N-cadherin蛋白
    si-circBACH1+anti-miR-NC 1.00±0.00 0.36±0.03 44.54±4.23 26.71±2.51 53.99±4.45 0.58±0.05 0.25±0.03
    si-circBACH1+anti-miR-4500 0.25±0.03 0.67±0.04 88.81±7.29 58.74±4.32 98.17±7.08 0.29±0.03 0.56±0.04
    t 75.00 18.60 15.76 19.23 15.85 14.92 18.60
    P < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01
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出版历程
  • 收稿日期:  2021-04-16
  • 录用日期:  2021-08-15
  • 刊出日期:  2023-11-15

circBACH1靶向miR-4500调控口腔鳞状细胞癌HSC3细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制研究

    作者简介: 胡洋(1989-), 女, 主治医师
  • 北部战区总医院和平分院 口腔科, 辽宁 沈阳 110000

摘要: 目的探讨circBACH1对口腔鳞状细胞癌HSC3细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法体外培养HSC3细胞,分为si-NC组、si-circBACH1组、miR-NC组、miR-4500组、si-circBACH1+anti-miR-NC组、si-circBACH1+anti-miR-4500组,分别转染si-NC、si-circBACH1、miR-NC、miR-4500 mimics、si-circBACH1与anti-miR-NC、si-circBACH1与anti-miR-4500。qRT-PCR检测口腔鳞状细胞癌组织、癌旁组织及各组HSC3细胞中circBACH1、miR-4500的表达量;CCK-8、平板克隆形成实验分别检测细胞增殖及克隆形成能力;划痕实验与Transwell小室实验分别检测细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测circBACH1对miR-4500的靶向调控作用;Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin的蛋白表达量。结果与癌旁组织比较,口腔鳞状细胞癌组织中circBACH1的表达量明显升高(P < 0.01),miR-4500的表达量明显降低(P < 0.01)。与si-NC组比较,si-circBACH1组HSC3细胞活力明显降低(P < 0.01),细胞克隆形成数和侵袭细胞数均明显减少(P < 0.01),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平均明显降低(P < 0.01),E-cadherin蛋白水平明显升高(P < 0.01)。与miR-NC组比较,miR-4500组HSC3细胞活力明显降低(P < 0.01),细胞克隆形成数和侵袭细胞数均明显减少(P < 0.01),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平均明显降低(P < 0.01),E-cadherin蛋白水平明显升高(P < 0.01)。WT-circBACH1与miR-4500 mimics共转染组HSC3细胞的荧光素酶活性明显低于WT-circBACH1与miR-NC共转染组(P < 0.01)。qRT-PCR实验结果显示,与pcDNA组比较,pcDNA-circBACH1组miR-4500的表达量降低(P < 0.05);与si-NC组比较,si-circBACH1组miR-4500的表达量升高(P < 0.05)。与si-circBACH1+anti-miR-NC组比较,si-circBACH1+anti-miR-4500组HSC3细胞活力明显升高(P < 0.01),细胞克隆形成数和侵袭细胞数均明显增多(P < 0.01),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平均明显升高(P < 0.01),E-cadherin蛋白水平明显降低(P < 0.01)。结论干扰circBACH1表达可通过负向调控miR-4500的表达从而抑制口腔鳞状细胞癌HSC3细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。

English Abstract

  • 口腔鳞状细胞癌是常见的一种口腔颌面部恶性肿瘤,其发病率呈逐年上升趋势,临床主要采用手术、放疗、化疗相结合等方式进行治疗,但口腔鳞状细胞癌病人5年生存率较低且病人预后较差,目前口腔鳞状细胞癌的致病机制尚未完全阐明,因而深入探究口腔鳞状细胞癌发生发展的分子机制对探讨新的治疗方式具有重要意义[1]。环状RNA(circular RNA,circRNA)与线性RNA分子不同,其不具有5′端帽子与3′尾巴结构,而是以共价键结合的方式形成的一种环状RNA分子,其具有高度稳定性、保守性与组织特异性,近年来,随着对circRNA的深入研究发现,circRNA可通过与微小RNA(miRNA)结合而调控靶基因的功能从而在转录后水平调控基因表达,进而参与口腔鳞状细胞癌等多种疾病发生发展过程[2-4]。circBACH1(ID: hsa_circ_0061395)在结直肠癌组织和细胞中上调表达,干扰其表达可抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭[5]。但circBACH1与口腔鳞状细胞癌相关研究尚未见报道。生物信息学预测分析显示, circBACH1与miR-4500存在结合位点,但二者是否存在靶向结合关系尚需进一步验证,已有研究[6]表明miR-4500在膀胱癌细胞中表达下调,上调其表达可抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移。但miR-4500在口腔鳞状细胞癌中的表达及其可能作用机制尚未可知。因此,本研究主要探讨circBACH1是否通过靶向调控miR-4500的表达影响口腔鳞癌细胞的生物学行为,为进一步阐释口腔鳞状细胞癌的发病机制提供实验基础。

    • 收集2019年3月至2020年1月于我院接受手术治疗切除的39例口腔鳞状细胞癌病人的癌组织及其对应的癌旁组织标本,所有研究对象术前均未接受放疗、化疗等治疗,且均未合并其他恶性肿瘤,其中男20例,女19例,年龄45~67岁。病人或其近亲属知情同意,本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。

      人口腔鳞状细胞癌HSC3细胞购自上海通派生物;DMEM培养基购自美国Hyclone;胎牛血清购自美国Gibco;LipofectamineTM3000购自美国Invitrogen;circBACH1小分子干扰RNA(si-circBACH1)及其阴性对照(si-NC)、miR-4500寡核苷酸模拟物(miR-4500 mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)、miR-4500特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-4500)及其阴性对照(anti-miR-NC)购自广州锐博生物;pcDNA、pcDNA-circBACH1购自上海吉满生物;Trizol试剂购自美国Thermo Fisher;反转录试剂盒与SYBR Green试剂购自北京天根生化;CCK-8试剂、Matrigel基质胶购自北京索莱宝;Transwell小室购自美国Corning;兔抗人E-cadherin、N-cadherin抗体与二抗购自美国Santan Cruz。

    • 用不含血清的DMEM培养基分别稀释si-NC、si-circBACH1、miR-NC、miR-4500 mimics、si-circBACH1与anti-miR-NC、si-circBACH1与anti-miR-4500后室温孵育5 min,用不含血清的DMEM培养基稀释LipofectamineTM 3000 Transfection Reagent后室温孵育5 min,将转染物与转染试剂稀释液充分混匀后室温孵育20 min,取对数生长期HSC3细胞按照每孔1×104个接种于6孔板,按照每孔200 μL将混合液加入6孔板的细胞中,6 h后将培养基更换为含有10%胎牛血清的DMEM培养基,继续培养48 h后收集细胞,分别记为si-NC组、si-circBACH1组、miR-NC组、miR-4500组、si-circBACH1+anti-miR-NC组、si-circBACH1+anti-miR-4500组。

    • 取口腔鳞状细胞癌组织、癌旁组织与各组HSC3细胞,加入1 mL Trizol试剂裂解细胞,提取组织或细胞总RNA,反转录合成cDNA,按反转录试剂盒说明书操作。PCR扩增反应体系: SYBR Green Master Mix 10 μL,正反向引物0.8 μL,cDNA 2 μL,ddH2O补足体系至20 μL;反应条件: 95 ℃预变性2 min,95 ℃变性15 s,60 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,共40次循环。circBACH1以GAPDH为内参基因,miR-4500以U6为内参基因,采用2-ΔΔCt法计算circBACH1、miR-4500相对表达量。

    • 将各组HSC3细胞按照每孔3 000个接种于96孔板中,于培养箱内孵育24 h后每孔加入10 μL CCK-8溶液,然后置于培养箱内培养2 h,用酶标仪检测各孔450 nm波长处的OD值。

    • 将各组HSC3细胞按照每孔200个接种于6孔板中,每隔48 h更换1次培养液,培养14 d,用PBS洗涤细胞,4%多聚甲醛固定15 min,然后加入0.1%结晶紫染色液染色20 min,流水洗涤染色液,空气干燥后于显微镜下观察细胞克隆形成数。

    • 取各组HSC3细胞按照每孔1×104个密度接种于6孔板中,当细胞生长汇合度达到80%时用200 μL移液枪枪头在细胞层上沿着培养孔的直径划线,PBS洗去划掉的细胞,于显微镜下拍照并记为0 h,然后将其置于培养箱内培养24 h,在显微镜下拍照,用ImageJ软件计算划痕宽度并计算划痕愈合率。划痕愈合率=(0 h划痕宽度-24 h划痕宽度)/0 h划痕宽度×100%。

    • Matrigel基质胶稀释液平铺于小室的上室,加入培养基后置于培养箱内孵育5 h,取各组HSC3细胞悬液(1×105个/mL)100 μL接种于小室的上室,下室加入600 μL含有10%胎牛血清的培养基,于培养箱内培养24 h后除去上室上膜面的非侵入细胞,用4%多聚甲醛固定20 min,用0.5%结晶紫染色液染色10 min,于显微镜下观察下室细胞数。

    • 用StarBase在线工具预测circBACH1与miR-4500存在结合位点,采用PCR与overlap PCR分别扩增包含与miR-4500结合位点野生型和突变型的circBACH1片段,构建野生型报道基因载体WT-circBACH1与突变型报告基因载体MUT-circBACH1,分别与miR-4500 mimics或miR-NC共转染至HSC3细胞,培养48 h后收集细胞并检测细胞的相对荧光素酶活性。利用脂质体转染技术分别将pcDNA、pcDNA-circBACH1、si-NC、si-circBACH1转染至HSC3细胞,培养48 h后收集细胞,采用qRT-PCR法检测细胞中miR-4500的表达量。

    • 用PBS分别洗涤各组HSC3细胞,分别在细胞内加入RIPA裂解液,将其置于冰上孵育20 min,然后转移至离心机内以12 000×g离心10 min,用移液枪吸取蛋白,BCA法检测蛋白浓度,按照每个泳道加入40 μg蛋白样品进行10%SDS-PAGE电泳凝胶,在上样前需要将蛋白样品与上样缓冲液按照等体积充分混匀,并在100 ℃沸水中孵育5 min,电泳结束后取出凝胶,然后90 V电压条件下凝胶上的蛋白转移至PVDF膜。加入5%脱脂奶粉封闭2 h,加入E-cadherin(1∶1 000)、N-cadherin(1∶1 000)、GAPDH(1∶2 000)一抗稀释液,4 ℃孵育过夜,TBST洗涤,加入二抗稀释液(1∶4 000),室温孵育1 h,滴加ECL化学发光试剂,暗室内曝光显影,用ImageJ软件分析各条带灰度值。

    • 采用t检验、方差分析和q检验。

    • 与癌旁组织比较,口腔鳞状细胞癌组织中circBACH1的表达量明显升高(P < 0.01),miR-4500的表达量明显降低(P < 0.01)(见表 1)。

      分组 circBACH1 miR-4500
      癌旁组织 1.00±0.07 1.00±0.05
      口腔鳞状细胞癌组织 3.39±0.29 0.41±0.04
      t 50.40 57.54
      P < 0.01 < 0.01

      表 1  circBACH1和miR-4500在口腔鳞状细胞癌组织中的表达(ni=39;x±s)

    • 与si-NC组比较,si-circBACH1组HSC3细胞活力明显降低(P < 0.01),细胞克隆形成数和侵袭细胞数均明显减少(P < 0.01),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平均明显降低(P < 0.01),E-cadherin蛋白水平明显升高(P < 0.01)(见表 2图 1)。

      分组 circBACH1 OD值 细胞克隆形成数/个 划痕愈合率/% 侵袭细胞数/个 E-cadherin蛋白 N-cadherin蛋白
      si-NC组 1.00±0.00 0.78±0.06 97.25±8.26 70.41±6.53 117.48±11.28 0.17±0.02 0.69±0.05
      si-circBACH1组 0.33±0.03 0.37±0.03 45.15±4.36 28.13±2.34 55.52±4.98 0.56±0.04 0.27±0.03
      t 67.0 18.34 16.73 18.29 15.08 26.16 21.61
      P < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01

      表 2  干扰circBACH1表达对HSC3细胞增殖、侵袭、迁移及迁移与侵袭相关蛋白表达的影响(ni=9;x±s)

      图  1  干扰circBACH1表达对HSC3细胞迁移与侵袭相关蛋白表达的影响

    • 与miR-NC组比较,miR-4500组HSC3细胞活力明显降低(P < 0.01),细胞克隆形成数和侵袭细胞数均明显减少(P < 0.01),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平均明显降低(P < 0.01),E-cadherin蛋白水平明显升高(P < 0.01)(见表 3图 2)。

      分组 miR-4500 OD值 细胞克隆形成数/个 划痕愈合率/% 侵袭细胞数/个 E-cadherin蛋白 N-cadherin蛋白
      miR-NC组 1.00±0.00 0.79±0.05 99.85±7.56 75.34±6.39 113.71±12.22 0.18±0.02 0.68±0.05
      miR-4500组 3.26±0.29 0.41±0.04 53.81±4.61 33.34±3.41 61.38±5.15 0.49±0.04 0.33±0.03
      t 23.38 17.80 15.60 17.40 11.84 20.80 18.01
      P < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01

      表 3  miR-4500过表达对HSC3细胞增殖、侵袭、迁移及迁移与侵袭相关蛋白表达的影响(ni=9;x±s)

      图  2  miR-4500过表达对HSC3细胞迁移与侵袭相关蛋白表达的影响

    • StarBase预测显示circBACH1与miR-4500存在结合位点(见图 3)。WT-circBACH1与miR-4500 mimics共转染组HSC3细胞的荧光素酶活性明显低于WT-circBACH1与miR-NC共转染组(P < 0.01)(见表 4)。qRT-PCR实验结果显示,与pcDNA组比较,pcDNA-circBACH1组miR-4500的表达量降低(P < 0.05);与si-NC组比较,si-circBACH1组miR-4500的表达量升高(P < 0.05)(见表 5)。WT-circBACH1与miR-4500 mimics共转染组HSC3细胞的荧光素酶活性明显低于WT-circBACH1与miR-NC共转染组(P < 0.01)。

      图  3  circBACH1的序列中含有与miR-4500互补的核苷酸序列

      分组 WT-circBACH1 MUT-circBACH1
      miR-NC组 1.01±0.08 1.04±0.08
      miR-4500组 0.43±0.04 1.02±0.07
      t 19.45 0.56
      P < 0.01 >0.05

      表 4  双荧光素酶报告实验结果(ni=9;x±s)

      分组 miR-4500 F P MS组内
      pcDNA组 1.00±0.00 695.79
      pcDNA-circBACH1组 0.54±0.04* < 0.01 0.017
      si-NC组 1.02 ±0.07#
      si-circBACH1组 3.12±0.25*#▲
      q检验: 与pcDNA组*P < 0.05;与pcDNA-circBACH1组比较#P < 0.05;与si-NC组比较▲P < 0.05

      表 5  circBACH1调控miR-4500的表达(ni=9;x±s)

    • 与si-circBACH1+anti-miR-NC组比较,si-circBACH1+anti-miR-4500组HSC3细胞活力明显升高(P < 0.01),细胞克隆形成数和侵袭细胞数均明显增多(P < 0.01),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平均明显升高(P < 0.01),E-cadherin蛋白水平明显降低(P < 0.01),(见图 4表 6)。

      图  4  下调miR-4500表达逆转了干扰circBACH1表达对HSC3细胞迁移与侵袭相关蛋白表达的作用

      分组 miR-4500 OD值 细胞克隆形成数/个 划痕愈合率/% 侵袭细胞数/个 E-cadherin蛋白 N-cadherin蛋白
      si-circBACH1+anti-miR-NC 1.00±0.00 0.36±0.03 44.54±4.23 26.71±2.51 53.99±4.45 0.58±0.05 0.25±0.03
      si-circBACH1+anti-miR-4500 0.25±0.03 0.67±0.04 88.81±7.29 58.74±4.32 98.17±7.08 0.29±0.03 0.56±0.04
      t 75.00 18.60 15.76 19.23 15.85 14.92 18.60
      P < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01

      表 6  下调miR-4500表达逆转了干扰circBACH1表达对HSC3细胞增殖、侵袭、迁移及迁移与侵袭相关蛋白表达的作用(ni=9;x±s)

    • 口腔鳞状细胞癌发病率占全身恶性肿瘤的3%左右,酒精、烟草等均可能是口腔鳞状细胞癌重要的致病诱因,随着生物信息技术的发展,分子靶向治疗、基因治疗等均已成为治疗肿瘤的新型治疗方式,因而寻找口腔鳞状细胞癌分子治疗的潜在靶点成为研究重点,越来越多的研究表明circRNA在口腔鳞状细胞癌中异常表达,并可能作为口腔鳞状细胞癌治疗的潜在靶点,circRNA是由外显子与内含子剪切形成的环化转录物序列,其与多种肿瘤发生发展关系密切,例如,circ_0011946通过上调PCNA促进口腔鳞状细胞癌细胞生长、迁移和侵袭[7]。circPHIP通过充当miR-142-5p的海绵分子而调节PHIP和ACTN4的表达从而促进口腔鳞状细胞癌的进展[8]。circMDM2通过调控miR-532-3p/HK2而促进口腔鳞状细胞癌细胞糖酵解及细胞转移[9]。circRNA ITCH通过调节miR-421/PDCD4轴抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖,而诱导细胞凋亡[10]。circ-PKD2通过调控miR-204-3p/APC2轴而抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖及转移[11]。circRNA_101036通过诱导内质网应激而抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖及促进细胞凋亡[12]。但circRNA在口腔鳞状细胞癌中的报道相对较少。

      circBACH1在肝癌组织和细胞中高表达,并可促进肝癌细胞增殖和克隆形成[13]。但circBACH1在口腔鳞状细胞癌中的表达尚未可知。本研究结果显示,口腔鳞状细胞癌组织中circBACH1的表达量明显高于癌旁组织,干扰circBACH1表达后口腔鳞状细胞癌细胞活力明显降低,细胞克隆形成数明显减少,提示干扰circBACH1表达可抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖及克隆形成。E-cadherin作为上皮细胞标志物,其表达失调可促进EMT转化从而促进肿瘤恶性进展,而间充质细胞标志物N-cadherin的作用与之相反[14-15]。本研究结果显示,干扰circBACH1表达后口腔鳞状细胞癌侵袭细胞数明显减少,划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平均明显降低,E-cadherin蛋白水平明显升高,提示干扰circBACH1表达可抑制口腔鳞状细胞癌细胞迁移及侵袭。

      为进一步探究circBACH1调控口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的分子机制,本研究证实circBACH1可靶向结合miR-4500,并可负向调控miR-4500的表达。提示circBACH1可能通过负向调控miR-4500的表达从而发挥癌基因作用。研究[16]表明,miR-4500在非小细胞肺癌组织和细胞中表达降低,抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。miR-4500在胶质瘤细胞中表达下调,上调其表达可抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭[17]。circPLK1通过调节miR-4500/IGF1轴而促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭[18]。本研究结果显示,口腔鳞状细胞癌组织中miR-4500的表达量明显低于癌旁组织,抑制miR-4500表达可拮抗干扰circBACH1表达对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭的抑制作用。

      综上所述,口腔鳞状细胞癌组织中circBACH1的表达量升高,而miR-4500的表达量降低,干扰circBACH1表达可通过上调miR-4500的表达从而抑制口腔鳞状细胞癌HSC3细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭,circBACH1可能成为口腔鳞状细胞癌潜在治疗靶点。目前circBACH1在口腔鳞状细胞癌的研究尚处于探索阶段,其是否可通过靶向结合其他miRNA而发挥作用尚需进一步探究。

参考文献 (18)

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