-
血管瘤是婴幼儿最常见的血管性良性肿瘤,其确切的发病机制尚未完全阐明[1],治疗方法繁多(如激光、皮质激素、干扰素、手术等),但缺乏靶向性,疗效远不尽人意。建立一种理想的血管瘤动物模型, 为血管瘤的研究建立平台成为临床上的迫切需求。本研究利用组织块法体外培养增生期血管瘤内皮细胞,植入裸鼠皮下,生长成瘤建立裸鼠血管瘤动物模型。现作报道。
HTML
-
接种48~72 h后内皮细胞从组织块边缘成团游出,贴壁生长,细胞呈圆形、椭圆形或多角形,饱满,边界清楚,折光性强,胞膜完整,细胞核呈圆或椭圆形,居中。2~3周后内皮细胞铺满培养瓶瓶底,呈单层分布,呈接触抑制生长特性,形成典型“铺路卵石状”排列。细胞质或膜中有明显的棕黄色颗粒沉着,细胞核无染色,表明第Ⅷ因子相关抗原、CD31和CD34染色均呈阳性表达(见图 1)。
-
根据细胞计数结果,绘制第3代、第7代血管瘤内皮细胞生长曲线。第3代血管瘤内皮细胞的生长曲线呈“S”形,细胞数量在接种后6~7 d进入快速增殖期,第10 d左右细胞数量达到高峰值,此后进入平台期,观察期间未见明显的衰退期。第7代血管瘤内皮细胞生长曲线与第3代细胞生长曲线有所区别,走势较陡直,接种第3~4天细胞快速增殖,第6~7天数量达到高峰值,此后细胞数量进入持续时间较长的稳定期即平台期;从血管瘤内皮细胞的生长曲线看出,第7代细胞和第3代细胞生长情况差别较大。笔者推测可能是由于经反复传代后细胞的性状发生了改变,有可能7代以后细胞已不具备内皮细胞的生长特性(见图 2)。
-
在模型建立8周时间,有1只裸鼠出现质量减轻、活动较少、精神萎靡,其余小鼠均存活良好,食欲旺盛、反应敏捷、活动有力。所形成的瘤体呈浅粉红色,质韧,切开表皮发现瘤体被包膜包绕,边界清楚,血供丰富,出血较多。所种40处瘤体存活率87.5%(35/40)。种植瘤体积生长情况见表 1、图 3。在第1周内,种植的内皮细胞所形成的包块体积进行性缩小至完全吸收。第2周以后,发现有瘤体渐进性增长,第2周到第4周时间内瘤体体积增长缓慢,4~8周瘤体体积增长较快。8周以后种植瘤体再次进入生长缓慢期,瘤体相继缓慢缩小,颜色变浅,第12周发现瘤体体积只有8周时的2/3,切开瘤体多是纤维和脂肪细胞,残存少量血管瘤内皮细胞和扩张的血管。这与临床观察到的血管瘤的发展过程极其相似:早期增殖极其迅速,常在出生后1个月内发病,6个月内廇体迅速增大,此后的6个月增长速度有所减慢,从1岁左右开始血管瘤大多开始趋向消退,50%在5岁以内完全消退不留任何痕迹。另有50%血管瘤消退后可残留瘢痕、纤维、脂肪组织和扩张血管等。
饲养时间/周 瘤体体积/cm3 1 0.022±0.001 2 0.295±0.027 4 0.357±0.032 8 0.918±0.043 12 0.692±0.103 -
切取的瘤体组织行切片HE染色,光镜下可见内皮细胞密集,呈团块样增生,形成条索或管状结构,另有纤维组织和少量脂肪细胞。内皮细胞质被染成红色,核被染成蓝紫色,偶见核分裂。正常的裸鼠肌肉组织作为对照,发现其细胞核分布均匀,无深染。未见明显细胞核聚集分布,细胞增殖正常(见图 4)。
-
在光学显微镜下观察发现棕黄色颗粒满视野弥漫性分布,呈阳性表达。第8周,CD31和CD34阳性指数分别为92.43± 5.56(4+)和92.53±5.01(4+);第12周,其阳性指数分别为72.23±10.74(3+)和65.89±18.69(3+)。肌肉组织阴性表达。表明瘤体来源于体外培养的血管瘤内皮细胞,而非裸鼠组织(见图 5)。