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急性冠状动脉综合征(ACS)是临床常见的危重疾病,是在冠状动脉粥样硬化斑块固定存在的基础上,继发斑块侵袭与破裂,形成完全或不完全闭塞性血栓导致的一组临床综合征[1]。其包括:不稳定型心绞痛(UAP)、非ST段抬高型心肌梗死和ST段抬高型心肌梗死。据报道,2015年我国农村急性心肌梗死(AMI)死亡率达到70.09/10万人,城市死亡率为56.38/10万,住院总费用高达152.40亿元[2],心血管疾病发病率及死亡率增长势头未减,已成为危害我国公民健康的主要因素,故掌握冠心病的发病机制、寻找更精准的病情评估指标具有十分重要的意义,而无创、易获取的血液学指标成为重点筛查对象。
程序性坏死是细胞受到精密的程序调控而发生的坏死性死亡,是非caspase依赖的细胞死亡通路,相关研究已证实其参与冠状动脉斑块形成、心肌缺血再灌注损伤、心肌细胞坏死及纤维化心室重塑等多个病理过程[3-5]。其中刺激受体相互作用蛋白1(RIP1)-RIP3-混合谱系激酶结构域样假激酶(MLKL)是研究较为透彻的经典的通路。KARUNAKARAN等[6]发现MLKL在动脉粥样硬化病人的斑块核内是高度活跃的,说明程序性坏死可能是导致冠状动脉易损性的始动因子之一,可作为诊断及治疗靶点。但目前仍缺乏大样本的临床试验证明MLKL及ACS之间的关系。本研究选取对照组、UAP及AMI组,对比观察RIP1、RIP3和MLKL的组间表达差异,探讨RIP1-RIP3-MLKL通路和ACS疾病进程之间的关系。现作报道。
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3组间年龄、高血压、糖尿病、白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)、三酰甘油、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、载脂蛋白A、丙氨酸氨基转移酶、总胆红素(TBil)、总蛋白差异均无统计学意义(P>0.05);而AMI组中血清总胆固醇(TC)、天冬氨酸氨基转移酶和血肌酐(Cr)水平明显高于UAP组和对照组(P < 0.05)(见表 1)。
分组 n 年龄/岁 高血压 糖尿病 WBC/
(×109/L)RBC/
(×1012/L)PLT/
(×109/L)TC/
(mmol/L)三酰甘油/
(mmol/L)对照组 19 59.74±7.56 18 3 6.35±2.78 4.28±0.76 235.37±116.24 3.93±1.30 1.52±1.23 UAP组 31 63.87±9.59 12 7 6.62±1.65 4.35±0.44 218.45±68.70 3.94±1.05 1.71±0.83 AMI组 20 64.75±7.78 9 3 7.62±2.97 4.18±0.69 266.55±78.50 5.04±2.12*# 1.76±0.74 F — 1.95 1.01△ 0.66△ 1.57 0.47 1.88 3.92 0.37 P — >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 < 0.05 >0.05 MS组内 — 73.699 — — 5.797 0.377 7 490.817 2.222 0.870 分组 n HDL/
(mmol/L)LDL/
(mmol/L)天冬氨酸氨基
转移酶/(IU/L)丙氨酸氨基
转移酶/(IU/L)TBil/
(μmol/L)总蛋白/
(g/L)Cr/
(mg/L)对照组 19 1.06±0.26 2.12±0.71 20.42±3.52 21.70±11.56 9.83±3.81 65.71±5.61 59.00±14.14 UAP组 31 0.93±0.17 2.21±0.69 20.97±6.90 19.16±10.60 10.32±4.39 65.87±4.97 65.52±10.72 AMI组 20 0.94±0.27 2.65±1.02 32.35±18.97*# 19.79±10.50 10.10±5.60 66.29±7.29 79.78±42.88* F — 2.14 2.57 7.59 0.33 0.07 0.05 3.59 P — >0.05 >0.05 < 0.01 >0.05 >0.05 >0.05 < 0.05 MS组内 — 0.052 0.644 126.697 117.477 21.426 34.586 626.592 △示χ2值: q检验:与对照组比较*P < 0.05;与UAP组比较#P < 0.05 -
3组受试者血浆IL-1、IL-18含量和MLKL含量差异均有统计学意义(P < 0.01)(见表 2)。
分组 n IL-1/(pg/mL) IL-18/(pg/mL) MLKL/(ng/mL) 对照组 19 99.49±21.44 121.35±29.02 517.65±163.97 UAP组 31 126.19±20.79* 136.89±41.42 646.06±166.33* AMI组 20 146.60±17.32*# 168.45±35.13*# 745.03±180.70*# F — 27.03 52.00 8.77 P — < 0.01 < 0.01 < 0.01 MS组内 — 402.097 1 344.412 28 870.42 q检验:与对照组比较*P < 0.05;与UAP组比较#P < 0.05 -
PBMCs经CD14-抗体结合磁珠提纯并经流式鉴定,得到的人PBMCs纯度>90%(见图 1)。
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qRT-PCR结果显示UAP组MLK mRNA表达量较对照组明显升高(P < 0.05),AMI组MLKL mRNA高于对照组和UAP组(P < 0.05)(见表 3)。
分组 n MLKLmRNA 对照组 19 1.00 UAP组 31 1.17±0.17* AMI组 20 1.56±0.34*# F — 36.726 P — < 0.01 MS组内 — 3.045 q检验:与对照组比较*P < 0.05;与UAP组比较#P < 0.05 -
与对照组比较,UAP组MLKL、RIP1和RIP3的蛋白表达升高(P < 0.05);与UAP组比较AMI组MLKL、RIP1和RIP3的蛋白表达进一步升高(P < 0.05)(见表 4)。
分组 MLKL RIP1 RIP3 对照组 0.84±0.12 0.95±.08 0.82±0.10 UAP组 0.97±0.07* 1.03±.08* 0.93±0.14* AMI组 1.18±0.08*# 1.32±0.10*# 1.22±0.18*# F 72.43 91.67 41.17 P < 0.01 < 0.01 < 0.01 MS组内 0.520 0.541 0.022 q检验:与对照组比较*P < 0.05;与UAP组比较#P < 0.05