目的：探讨长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)在乳腺癌组织和细胞中的表达情况及三氧化二砷(As2O3)对HOTAIR基因表达的影响。方法：实时定量PCR检测在乳腺癌癌旁组织与癌组织中长链非编码RNA HOTAIR mRNA的表达，筛选高表达HOTAIR的乳腺癌细胞株，检测As2O3对HOTAIR mRNA表达的作用。先观察比较乳腺癌与癌旁组织中HOTAIR的表达，再检测乳腺癌细胞株中HOTAIR的表达，以及As2O3作用后MCF-7细胞中HOTAIR的表达变化。结果：乳腺癌组织中HOTAIR mRNA表达量为0.011±0.005，癌旁组织未见表达；乳腺癌细胞株SKBR-3和MAD-MB-231细胞均未表达HOTAIR mRNA，MCF-7细胞株高表达HOTAIR mRNA(1±0.236)；在As2O3作用下，MCF-7细胞中HOTAIR mRNA表达较空白组明显下降(P＜0.01)。结论：HOTAIR与乳腺癌的发展可能相关，As2O3可以抑制其表达。

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)抑制HL-60细胞端粒酶hTERT表达的分子机制。方法:构建含有hTERT启动子不同片段的荧光素酶基因表达载体,转染HL-60细胞,分别在有无As2O3作用下检测各组荧光素酶活性变化,间接反映As2O3对hTERT启动子不同片段活性的影响。结果:在As2O3作用下,含有hTERT启动子不同片段的荧光素酶基因表达载体的荧光素酶活性均下降(P0.05～P0.01)。结论:As2O3对HL-60细胞端粒酶hTERT启动子活性具有抑制作用。

目的:比较破骨细胞对牛皮质骨片及牙本质片的吸收活性。方法:采用25 ng/ml 巨噬细胞集落刺激因子+30 ng/ml核因子κB受体活化因子配体诱导 RAW264.7细胞分化获取破骨细胞,并分别与牛皮质骨片及牙本质片共培养。通过检测抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性细胞数、骨吸收陷窝面积,比较破骨细胞在不同底物上的骨吸收活性。结果:与不同底物共培养形成的TRAP阳性细胞数差异无统计学意义(P>0.05),而牛皮质骨片吸收陷窝的面积显著大于牙本质片(P结论:破骨细胞对牛皮质骨片的吸收活性强于牙本质片。

目的:探讨99mTc标记拮抗趋化因子受体(CXCR4)来源于病毒巨噬细胞炎性蛋白ⅡN端肽(NT21MP)作为乳腺癌SPECT显像剂的应用价值。方法:预锡化法标记NT21MP,纸层析法测99mTc-NT21MP放化纯及其在血浆中的稳定性;制备荷乳腺癌小鼠模型,静脉注射99mTc-NT21MP行SPECT显像,并计算靶/非靶(T/NT)比值;免疫组织化学法检测肿瘤组织CXCR4的表达和肺组织SDF-1的表达。结果:预锡化法标记99mTc-NT21MP放化纯达95%;血浆中2 h内稳定,2 h放化纯90%;99mTc-NT21MP注射后能靶向肿瘤组织,2 h的T/NT比值达4.6;肿瘤组织高表达CXCR4,而肺组织高表达SDF-1。结论:99mTc-NT21MP易于制备,具有较高的靶向性,在CXCR4阳性肿瘤的早期诊断中具有较高的应用价值。

目的: 克隆编码Nogo-66氨基酸多肽基因,构建原核重组表达载体,并诱导其在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达。方法: 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增出编码Nogo蛋白环外-66氨基酸多肽基因,将其克隆于T载体PMD18-T,酶切鉴定后再亚克隆于原核表达载体pET-42a(+),酶切及测序证实序列正确后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白-Nogo-66。结果: 克隆了编码Nogo蛋白环外-66氨基酸多肽基因,构建了融合蛋白的重组表达质粒,融合蛋白的表达随着时间延长增加。结论: 获得了编码Nogo蛋白环外-66氨基酸多肽基因及其原核表达产物,对研究Nogo蛋白的生物学功能及其mAb的制备奠定基础。

目的探讨长链非编码RNA LINC00173对紫杉醇耐药乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响，并探讨其可能的作用机制。方法利用qRT-PCR方法检测LINC00173在乳腺癌细胞株（MCF-7、MDA-MB-231和SKBR-3）和正常乳腺癌上皮细胞系（MCF-10A）的表达水平；构建LINC00173过表达载体和干扰片段，各自转染到乳腺癌细胞株中，利用qRT-PCR方法检测转染后LINC00173的表达水平；采用CCK8实验检测乳腺癌细胞的增殖能力；Transwell侵袭和划痕实验，检测细胞的侵袭和迁移能力；Western blotting方法检测CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白的表达。结果与MCF-10A细胞相比，LINC00173在乳腺癌细胞株中低表达；MCF-7细胞转染干扰片段及MCF-7/PR耐药细胞株转染过表达LINC00173载体后，与阴性对照（si-NC）组相比，si-LINC00173的表达降低；而与LV-NC组相比，过表达LV-LINC00173后的表达增加，且差异有统计学意义（P < 0.01）；干扰LINC00173的表达后，MCF-7细胞的增殖及迁移能力增强（P < 0.01）；过表达LINC00173后，MCF-7/PR细胞的增殖、侵袭及迁移能力减弱（P < 0.01）；干扰LINC00173后，MCF-7细胞CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白的表达水平明显增加（P < 0.01）；过表达LINC00173后，MCF-7/PR的CyclinD1、β-catenin、P-gp蛋白表达水平明显下降（P < 0.01）。结论LINC00173在乳腺癌细胞中表达降低并可能通过调控β-catenin表达参与紫杉醇耐药过程且与其发生、发展及侵袭有关，是涉及到乳腺癌发展的一种新的分子，可为临床诊断、治疗乳腺癌提供新的理论依据。

目的探讨紫杉醇长循环纳米载药胶束联合病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ（vMIP-Ⅱ）N端肽（NT21MP）对乳腺癌紫杉醇耐药细胞株（MCF-7/PR）耐药性的影响。方法采用磺酰罗丹明B（SRB）染色法检测乳腺癌耐药细胞株MCF-7/PR的存活率；细胞划痕及Transwell实验检测紫杉醇纳米载药胶束联合NT21MP对乳腺癌耐药细胞迁移、侵袭能力的影响；流式细胞术分析细胞凋亡、周期；Western blotting实验检测细胞凋亡、耐药及上皮间充质转化相关蛋白水平表达。结果相对于紫杉醇组，紫杉醇纳米胶束更有效地抑制细胞增殖、迁移和侵袭，凋亡蛋白Bax、caspase3的蛋白表达水平上调，抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平下调，且耐药相关蛋白MRP、P-gp和EMT相关蛋白Vimentin、Slug表达水平下调，E-cadherin表达上调（P < 0.01）；相对于紫杉醇纳米胶束组，紫杉醇纳米胶束与NT21MP联合组对细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期的抑制，以及抗凋亡和逆转耐药作用更明显（P < 0.01）。结论紫杉醇纳米胶束可有效发挥逆转乳腺癌细胞耐药性的作用，且以紫杉醇纳米胶束联合多肽药物NT21MP作用更明显。

目的研究紫杉醇耐药乳腺癌细胞外泌体来源的miR-5585-5p对乳腺癌细胞迁移、凋亡和耐药性的影响。方法超速离心法获取外泌体，使用qRT-PCR方法分别检测乳腺癌细胞（SKBR-3）和紫杉醇耐药乳腺癌细胞（SKBR-3/PR）细胞株和外泌体中miR-5585-5p的表达量；通过外泌体共培养技术以及在乳腺癌耐药细胞中转染miR-5585-5p的抑制剂，用Transwell检测其迁移能力，流式细胞术检测其凋亡情况；qRT-PCR和Western blotting检测其耐药指标。结果与SKBR-3相比，miR-5585-5p在耐药细胞SKBR-3/PR细胞株和外泌体中表达均上调（P < 0.01和P < 0.05）；在耐药细胞株中转染miR-5585-5p的抑制剂，Transwell、流式分析等结果显示，与对照相比，抑制剂组的耐药性下降，生物学活性降低（P < 0.01）；耐药细胞源性的外泌体与亲本细胞共培养可使SKBR-3细胞产生耐药表型，增强其迁移能力，抑制其凋亡率（P < 0.01），而转染抑制剂的耐药细胞分泌的外泌体可减弱这一作用。结论紫杉醇耐药乳腺癌细胞通过外泌体递送高表达的miR-5585-5p至亲本细胞并诱导亲本细胞产生耐药表型，外泌体miR-5585-5p可为乳腺癌耐药治疗提供新的分子靶点，为乳腺癌预后评估提供新的生物标志物。

目的研究长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因15(LncRNA SNHG15)与miRNA-451a对乳腺癌细胞的生物学活性的影响。方法qRT-PCR法检测SNHG15、miRNA-451a及趋化因子受体4(CXCR4)在乳腺癌耐药细胞SKBR3-PR中的表达情况；细胞划痕实验检测干扰SNHG15及miRNA-451a抑制剂对SKBR3-PR的细胞迁移能力的影响；流式细胞术检测对细胞凋亡情况的影响；Western blotting实验检测CXCR4、上皮间质转化(EMT)相关蛋白Vimentin、Snail水平表达。结果相比于亲本细胞，乳腺癌耐药细胞株中SNHG15表达量上调，但差异无统计学意义(P>0.05), miRNA-451a表达量下降(P<0.05)，CXCR4表达量上调(P<0.01)；划痕实验结果显示SNHG15促进细胞的迁移(P<0.01), miRNA-451a可抑制细胞迁移(P<0.01)；细胞凋亡实验结果表明SNHG15抑制细胞凋亡(P<0.01)，miRNA-451a促进细胞凋亡(P<0.01)；Western blotting表明干扰SNHG15后，EMT相关蛋白Snail和CXCR4表达水平下降，miRNA-451a抑制剂组Snail和CXCR4表达水平上升(P<0.01)，Vimentin表达水平无统计学意义(P>0.05)。结论LncRNA SNHG15可能通过调控miRNA-451a促进乳腺癌细胞的迁移、凋亡，并且潜在调控CXCR4诱导乳腺癌细胞的EMT。

目的:观察TrKA对乳腺癌细胞生长的影响,并初步探讨其分子机制,为乳腺癌治疗提供新的药物靶点。方法:荧光定量PCR和Western-blot检测干扰前后乳腺癌细胞株中TrKA的表达水平;MTT法检测干扰后对神经生长因子的促细胞生长作用的影响;Western-blot检测干扰后caspase-3的蛋白活性变化。结果:干扰后TrKAmRNA和蛋白表达分别下降73.8%和80.5%(P<0.05);NGF能促进乳腺癌细胞株MCF-7增殖(P<0.01);MCF-7+NGF组在OD_490nm值,各时间点高于MCF-7组(P<0.01);干扰后抑制了NGF的促细胞增殖作用,TrKA-SiRNA和TrKA-SiRNA+NGF组在490nm处,各时间点均低于MCF-7(P<0.01);Western-blot结果显示,与MCF-7组相比TrKA-SiRNA和TrKA-SiRNA+NGF组caspase-3蛋白明显活化,cleavedcaspase-3增加(P<0.05)。结论:TrKA的SiRNA干扰有效抑制乳腺癌细胞的生长,并有助于细胞趋向凋亡,提示NGF-TrKA生物学轴对乳腺癌的生长起重要作用,阻断此生物学轴可能是乳腺癌治疗新的靶点。