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分布在福建省的兰科石仙桃属植物仅有2种,即石仙桃(Pholidota chinensis Lindl.)和细叶石仙桃(Pholidota cantonensis Rolfe.)。细叶石仙桃生于林中或荫蔽处的岩石上,主要分布于浙江、江西、福建、台湾、湖南、广东和广西等省[1]。以全草入药,具有清热润燥、化痰止咳、滋阴解毒、凉血止痛等功效[2]。现代研究表明细叶石仙桃含有黄酮类[3]、萜类[4-5]、酚类[6]、多糖[3, 7]、脂肪族类、氨基酸类[3-5]等多种化学成分,具有镇痛、麻醉、抗疲劳、耐缺氧、抗氧化等药理活性,且不良反应小[3]。民间常用来治疗高血压、头晕和各种原因引起的头痛,闽南地区常将其作为药食两用的植物资源[2, 8]。
氨基酸是人体必需活性物质,与药效存在着密切关系。如铁皮石斛的临床与保健功效的重要成分有谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸等,这些氨基酸对人体有良好的保健作用[8];金线莲含有多种氨基酸,具有抗炎、抗氧化、免疫调节和降血糖等功效[9];黄精的补益强壮作用和增强免疫功能的有效物质之一是氨基酸,在维持生命活动中发挥着非常重要的作用[10-11]。目前兰科植物氨基酸含量测定的研究主要集中在石斛[9, 12-13]、金线莲[10]、芳香石豆兰、岩生石仙桃[14]等植物上,石仙桃属植物的相关研究较少[3, 15]。植物中总氨基酸的提取一般采用醇提取法[16],为明确兰科石仙桃属植物氨基酸类成分的提取率,考察并优化细叶石仙桃的提取工艺。为此,本研究采用溶剂回流提取-茚三酮比色法测定福建省不同产地的细叶石仙桃中总氨基酸的含量,以总氨基酸含量为评价指标,通过正交优化其提取工艺,以期为细叶石仙桃总氨基酸含量的测定和质量评价提供试验依据。
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通过实地考察,在福建省永泰、上杭、屏南和永春县等地方收集8批次细叶石仙桃样品(以全草鲜品为采收标准)(见表 1),经福建中医药大学药学院杨成梓教授鉴定为细叶石仙桃Pholidota cantoniensis Rolfe的全草,标本存放于福建中医药大学中药资源标本馆。
编号 产地 经度N 纬度E 海拔/m 年降水量/mm 日照时长/h 平均气温/℃ SH1 上杭 116°29′13″ 25°04′36′′ 711 1 800 1 600.0 17.5 SH2 上杭 116°29′56″ 25°05′41′′ 443 1 600 1 700.0 20.0 PN1 屏南 118°48′51″ 26°47′03′′ 480 1 842 1 533.3 18.0 PN2 屏南 119°06′54″ 27°03′14′′ 485 1 600 1 402.0 17.7 YC1 永春 117°55′58″ 25°25′10′′ 800 1 800 1 907.6 19.3 YC2 永春 117°53′33″ 25°27′24′′ 668 1 600 1 800.0 20.0 YT1 永泰 118°45′05″ 25°47′ 25′′ 452 1 450 1 550.0 18.6 YT2 永泰 118°45′39″ 25°54′31′′ 668 1 650 1 456.0 16.5 表 1 样品信息表
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恒温水浴锅(3016020,苏州珀西瓦试验设备有限公司),紫外可见分光光度计(上海元析仪器有限公司),循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司),数显恒温鼓风干燥箱(DHG-9240A,上海精宏实验设备有限公司),生物显微镜[OLYMPUS CX31,奥林巴斯(中国)有限公司],高速粉碎机(浙江省屹立工贸有限公司),电子天平[BS224S,赛多利斯科学仪器(北京)有限公司],pH计(PB-10标准型,德国赛多利斯集团);甘氨酸(中国食品药品检定研究院,批号:140624201506),无水乙醇、茚三酮、醋酸钠、冰醋酸(分析纯,国药集团化学试剂有限公司),水合氯醛(分析纯,汕头市西陇化工厂)。
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茚三酮显色剂的配制:准确称取2.0 g茚三酮,以蒸馏水为溶剂定容于100 mL容量瓶中,摇匀,得2%的茚三酮显色剂,避光低温保存,现配现用。
醋酸钠-醋酸缓冲液:取一定量醋酸钠加蒸馏水溶解,用冰醋酸溶液缓慢调节pH,并用精密pH计调pH值为3.0,加蒸馏水稀释定容至100 mL容量瓶,摇匀,标记备用;重复上述步骤配制pH值为5、6、7、8、9的缓冲液,分别转移定容至100 mL容量瓶,摇匀,标记备用。
对照品溶液的配制:精密称取甘氨酸对照品(干燥至恒重)0.011 0 g,加入蒸馏水至其完全溶解后,定容至100 mL(C对照品=0.110 mg/mL),得甘氨酸对照品溶液,标记备用。
供试品溶液的配制:鲜品用开水烫后,烘干至恒重,粉碎,过60目筛,置于干燥器中储存备用。精确称取样品约1.50 g,置于圆底烧瓶中,加入85%的乙醇35 mL,于90 ℃水浴锅中加热回流60 min,将提取液抽滤,滤渣重复1次,合并滤液,将滤液移至100 mL容量瓶,用85%乙醇定容至刻度,摇匀,即得。
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分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2.0 mL,置于10 mL容量瓶中,分别加入茚三酮显色剂0.4 mL,混匀,置于90 ℃水浴中加热15 min,待冷却至室温,用蒸馏水定容,备用;同法制试剂空白溶液,用于作参比。参照2020年版《中国药典》中紫外-可见分光光度计法,于190~900 nm区间扫描。
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精确移取供试品溶液1.0 mL于25 mL棕色容量瓶中,加入pH值为6的缓冲溶液2.0 mL后,分别加入2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL茚三酮显色剂,70 ℃水浴加热30 min后迅速冷却至室温,蒸馏水定容至25 mL,摇匀,移取适量至比色皿中,在568 nm处测定其吸光度,重复3次。
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移取供试品溶液1.0 mL于25 mL棕色容量瓶中,加入3.0 mL茚三酮显色剂后,分别加入2.0 mL pH值为5、6、7、8和9的醋酸钠-醋酸缓冲溶液,按“1.3.2.2”项下方法处理并测定其吸光度。
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移取供试品溶液1.0 mL于25 mL棕色容量瓶中,加入3.0 mL茚三酮显色剂后,分别加入pH为6的醋酸钠-醋酸缓冲溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0 mL,按“1.3.2.2”项下方法处理并测定其吸光度。
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移取供试品溶液0.5 mL于25 mL棕色容量瓶中,加入2.0 mL pH值为6的醋酸钠-醋酸缓冲溶液和3.0 mL茚三酮显色剂,分别在60、70、80、90 ℃的水浴中加热30 min后,按“1.3.2.2”项下方法处理并测定其吸光度。
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移取样品溶液0.5 mL于25 mL棕色容量瓶中,加入2.0 mL pH值为6的缓冲溶液和3.0 mL茚三酮显色剂,80 ℃水浴分别加热15、20、30、40和50 min,按“1.3.2.2”项下方法处理并测定其吸光度。
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精密吸取对照品溶液0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20 mL,分别置于10 mL容量瓶中,加蒸馏水补足至2.0 mL,按试验确定的最佳检测条件(加入2.0 mL pH值为6的缓冲溶液和3.0 mL茚三酮显色剂后,80 ℃水浴加热40 min)进行操作后迅速冷却至室温,蒸馏水定容,摇匀。同法制相应溶剂空白溶液,作参比,在568 nm处测定其吸光度。
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准确称取编号PN2的样品5份,每份约1.5 g。置于圆底烧瓶中,分别加入55%、65%、75%、85%、95%的乙醇35.0 mL,90 ℃加热回流提取60 min,滤过,用相应质量分数的乙醇溶液洗涤药渣和容器,将滤液与洗涤液合并定容至100 mL。分别精密移取2 mL的待测溶液于容量瓶中,按“1.3.3”项下方法操作并测定吸光度。
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精密称取同一批次样品5份,各1.5 g,置于圆底烧瓶中,分别向粉末中加入75%乙醇25、30、35、40、45 mL,加热回流提取60 min,将提取液抽滤,再用75%乙醇将滤液定容至100 mL。分别精密移取适量的待测溶液,于10 mL容量瓶中,按“1.3.3”项下方法,自“加蒸馏水补足至2.0 mL”起操作并测定吸光度。
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精密称取同一批次样品5份,各1.5 g,置于圆底烧瓶中,各加入75%的乙醇35 mL,加热回流提取30、60、90、120、150 min,滤过,再用75%的乙醇将滤液定容至100 mL。分别精密吸取2 mL待测溶液于10 mL容量瓶中,按“1.3.3”项下方法,自“加蒸馏水补足至2.0 mL”起操作并测定吸光度。
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精密称取同一批次样品3份,每份1.5 g,置于圆底烧瓶中,分别加入75%的乙醇35 mL,加热回流提取1、2、3次,每次60 min,滤过,合并滤液,浓缩定容至100 mL。精密移取2 mL待测溶液于10 mL容量瓶中,按“1.3.3”项下方法,自“加蒸馏水补足至2.0 mL”起操作并测定吸光度。
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在单因素实验基础上,对乙醇浓度、乙醇用量、提取时间和提取次数4个考察因素进行设定,设计四因素三水平正交试验(见表 2)。
水平 因素 A乙醇浓度/% B乙醇用量/mL C提取时间/min D提取次数 1 65 30 30 1 2 75 35 60 2 3 85 40 90 3 表 2 细叶石仙桃中总氨基酸提取工艺优选正交试验因素水平
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按照文献[14-15]方法,分别进行精密度、稳定性、重复性及加样回收率试验,在试验确定的最佳提取工艺条件下制备样品溶液,验证总氨基酸的提取率。
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按照试验筛选出的最佳提取工艺,制备不同产地细叶石仙桃样品溶液,平行3次,按“1.3.3项”下最佳检测条件操作并测定吸光度。
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全波长扫描得到供试品和对照品溶液均在568 nm处有最大吸收,故确定568 nm为最大吸收波长,即测定波长。
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随着显色试剂的用量不断增加,样品溶液的吸光度值呈现先上升后下降的趋势,在显色剂用量为3.0 mL时,吸光度达到最大值。
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当缓冲溶液pH为8时,吸光度达到最大值,随着缓冲溶液pH值继续增加,吸光度无明显变化。
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当缓冲溶液用量为2.0 mL时,吸光度达到最大,之后随着缓冲溶液用量的继续增加,吸光度有变小的趋势。
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当水浴加热到80 ℃时,吸光度最大,随着水浴温度的上升,吸光度变小。
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水浴加热到40 min时,吸光度达到最大值,随着加热时间的增加,吸光度变小。
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以甘氨酸对照品溶液的浓度C(μg/mL)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,得线性回归方程吸光度=0.063 5C+0.081 4(r=0.998)。
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随着乙醇浓度的增加,样品中总氨基酸的提取率先增加后逐渐降低,在乙醇浓度75%时,总氨基酸的提取率最高(4.121 5 mg/g), 故选75%乙醇。
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随着乙醇用量的增加,样品中总氨基酸的提取率先增加后逐渐降低,乙醇用量在35.0 mL时,提取率最高(4.167 8 mg/g), 故选35.0 mL。
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随着提取时间的增加,样品中总氨基酸的提取率逐渐降低,提取时间在60 min时,提取率最高(4.110 7 mg/g)。可能是因为提取时间过长会使部分氨基酸发生氧化,使检测结果偏低。故选择提取时间为60 min。
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随着提取次数的增加,样品中总氨基酸的提取率先提高后降低,提取2次时,提取率最高(4.086 0 mg/g)。提取3次的提取率反而大幅度下降可能是因为氨基酸溶解度变小所致。故选择提取次数为2次。
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以甘氨酸标示细叶石仙桃中总氨基酸的浸出量为指标,从而确定最佳的溶剂回流提取工艺。精确称取同一批次细叶石仙桃药材粉末9份,每份1.5 g,选择L9(34)正交表进行试验,按试验确定的最佳检测条件进行操作,试验安排及结果见表 3,方差分析见表 4。
试验号 因素 吸光度 总氨基酸含量/(mg/g) A乙醇浓度/% B乙醇用量/mL C提取时间/min D提取次数 1 1 1 1 1 0.378 2.496 1 2 1 2 2 2 0.582 4.201 0 3 1 3 3 3 0.259 1.489 2 4 2 1 2 3 0.501 3.527 2 5 2 2 3 1 0.565 4.068 4 6 2 3 1 2 0.615 4.484 6 7 3 1 3 2 0.606 4.398 9 8 3 2 1 3 0.594 4.304 3 9 3 3 2 1 0.611 4.429 1 K1 2.729 3.474 3.764 3.665 K2 4.027 4.191 4.052 4.362 K3 4.377 3.468 3.319 3.107 R 1.649 0.717 0.734 1.255 表 3 L9(34)正交试验设计及结果
方差来源 偏差平方和(SS) 自由度(df) 均方(MS) F P A 4.526 2 2.263 3.212 < 0.05 B 1.038 2 0.519 0.404 >0.05 C 2.371 2 1.185 1.114 >0.05 D 0.819 2 0.409 0.310 < 0.05 表 4 正交试验方差分析
由表 3可知,A2B3C1D2的提取条件下总氨基酸提取率最多,达4.484 6 mg/g。由极差值R可知各因素对石仙桃总氨基酸提取率的影响从大到小依次为A乙醇浓度>D提取次数>C提取时间>B乙醇用量。由表 4统计分析可知,A和D因素对细叶石仙桃总氨基酸提取率的影响较为显著,其他因素则无明显影响。结合均值K的大小和实际确定细叶石仙桃总氨基酸含量的最佳提取工艺条件为A3B2C2D2,即乙醇浓度为85%,乙醇用量为35.0 mL,提取时间60 min,提取次数为2次。
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精密称取同一批次的样品6份,各1.5 g,置于圆底烧瓶中,在试验确定的最佳提取工艺条件下制备样品溶液,精密移取适量的待测样品溶液,于10 mL容量瓶中,按“1.3.3”项下方法,自“加蒸馏水补足至2.0 mL”起操作并测定吸光度。计算总氨基酸的提取率为4.762 5 mg/g,RSD值为1.76%,说明该提取工艺可行。
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精确移取供试品溶液,于10 mL容量瓶中,按“1.3.3”项下方法操作并测定吸光度,连续测定6次。结果RSD值为0.81%(见表 5),表明该试验精密度良好。
试验号 精密度 稳定性 吸光度 RSD/% 吸光度 RSD/% 1 0.647 0.81 0.651 1.52 2 0.655 0.646 3 0.662 0.641 4 0.654 0.638 5 0.649 0.630 6 0.656 0.625 表 5 精密度、稳定性试验结果
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精确移取供试品溶液,于10 mL容量瓶中,按“1.3.3”项下方法操作并测定其在0.25、0.5、1、2、4、6 h的吸光度。结果RSD值为1.52%(见表 5),表明该供试品溶液显色后在6 h内稳定。
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按“1.3.1”项下方法平行制备(同一批次)样品溶液6份,按“1.3.3”项下方法操作并测定吸光度,结果RSD值为1.76%(见表 6),表明该试验重复性良好。
试验号 吸光度 总氨基酸含量/(mg/g) 平均总氨基酸含量/(mg/g) RSD/% 1 0.647 4.753 8 4.762 5 1.76 2 0.655 4.807 9 3 0.639 4.686 6 4 0.664 4.885 3 5 0.639 4.678 8 6 0.659 4.841 4 表 6 重复性试验结果(n=6)
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精密称取同一批次样品9份,每份约0.75 g,按照试验的最佳提取工艺条件下制备供试品溶液,设置低、中、高3个浓度,按“1.3.3”项下方法显色后,分别添加已知浓度的对照品溶液,测定吸光度并计算加样回收率(见表 7),平均回收率为98.58%,RSD值为1.80%。
试验号 称样量/g 样品中总氨基酸含量/mg 加入量/mg 测得总氨基酸含量/mg 回收率/% 平均值/% RSD/% 1 0.750 5 3.574 3 2.80 6.325 1 98.24 98.58 1.80 2 0.751 3 3.578 1 2.80 6.289 6 96.84 3 0.751 0 3.576 6 2.80 6.410 5 101.21 4 0.749 8 3.570 9 3.57 7.002 3 96.12 5 0.751 2 3.577 6 3.57 7.158 9 100.32 6 0.749 9 3.571 4 3.57 7.089 7 98.55 7 0.750 8 3.575 7 4.30 7.752 6 97.14 8 0.750 2 3.572 8 4.30 7.896 3 100.55 9 0.749 7 3.570 4 4.30 7.796 5 98.28 表 7 加样回收率试验结果(n=9)
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对不同产地细叶石仙桃的总氨基酸含量结果进行方差分析(见表 8)。产地对于总氨基酸含量呈现出0.01水平显著性(F=70.21,P < 0.01),即不同产地细叶石仙桃总氨基酸含量均呈现出显著性差异(P < 0.05),总氨基酸含量从高到低依次为:永泰>上杭>屏南>永春。同时将经纬度、海拔、年降水量、日照时长、平均气温等与总氨基酸含量进行相关性分析,可知他们之间均不会呈现出显著性。
产地 n 总氨基酸含量/(mg/g) F P MS组内 上杭 6 5.24±0.08 213.69 P < 0.01 0.017 屏南 6 4.70±0.06* 永春 6 4.40±0.15*# 永泰 6 6.18±0.19*#▲ q检验:与上杭比较*P < 0.05;与屏南比较#P < 0.05;与永春比较▲P < 0.05 表 8 不同产地细叶石仙桃总氨基酸含量的方差分析结果
基于茚三酮比色法测定闽产细叶石仙桃总氨基酸含量
Detection of total amino acids of Pholidota cantonensis Rolfe. from Fujian province by ninhydrin colorimetric method
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摘要:
目的优化溶剂回流提取-茚三酮比色法测定福建省不同产地细叶石仙桃中总氨基酸含量。 方法以甘氨酸为对照品,采用茚三酮比色法测定细叶石仙桃中总氨基酸含量;考察不同影响因素对茚三酮法测定细叶石仙桃总氨基酸含量的影响,确定最佳检测条件;在单因素实验基础上,采用L9(34)正交试验考察溶剂用量、溶剂浓度、提取时间及提取次数对细叶石仙桃中总氨基酸提取工艺的影响,并以其为考察指标,优化筛选最佳提取工艺。 结果最佳检测条件为测定波长568 nm、2%茚三酮溶液用量3.0 mL、缓冲液pH值6、缓冲液用量2.0 mL、水浴加热温度80 ℃、水浴加热时间40 min;最佳提取条件为乙醇浓度85%,乙醇用量35.0 mL,提取时间60 min,提取2次。在所收集到的福建省4个产地的细叶石仙桃中总氨基酸含量由高到低依次为永泰县、上杭县、屏南县、永春县。 结论优选的提取工艺稳定可行,建立含量测定方法简便、准确、重复性好,为细叶石仙桃的质量评价和进一步开发利用提供依据。样品中以永泰县所产的细叶石仙桃质量最佳。 Abstract:ObjectiveTo optimize the detection condition of amino acids in Pholidota cantonensis Rolfe.from different producing areas of Fujian province by solvent reflux extraction and ninhydrin colorimetric method. MethodsThe content of total amino acids was determined by ninhydrin colorimetric method with glycine as reference; the effect of different influence factors on detection were studied to determine the optimal detection conditions; on the basis of single factor experiment, L9 (34) orthogonal test was used to investigate the effects of solvent dosage, solvent concentration, extraction time and extraction times on the extraction process of total amino acids from Pholidota cantonensis.The optimal extraction process was optimized based on these indexes. ResultsThe optimum detection conditions were: wavelength 568 nm, ninhydrin (2%) volume 3 mL, pH 6, buffer solution 2 mL, water bath heating temperature 80 ℃ and heating time 40 min.The optimal ultrasonic extraction conditions were as follows: alcohol concentration 85%, alcohol amount 35 mL, extraction time 60 min, and twice extraction.The contents of total amino acids in four different producing areas in Fujian province were as follows: Yongtai county, Shanghang county, Pingnan county and Yongchun county. ConclusionsThe ninhydrin colorimetric method is simple, accurate, reliable and reproducible.The optional extraction is stable and feasible, which can provide a basis for quality evaluation control, the determination and further development of Pholidota cantonensis.In the collected samples, the best quality of Pholidota cantonensis from Yongtai county is obtained. -
表 1 样品信息表
编号 产地 经度N 纬度E 海拔/m 年降水量/mm 日照时长/h 平均气温/℃ SH1 上杭 116°29′13″ 25°04′36′′ 711 1 800 1 600.0 17.5 SH2 上杭 116°29′56″ 25°05′41′′ 443 1 600 1 700.0 20.0 PN1 屏南 118°48′51″ 26°47′03′′ 480 1 842 1 533.3 18.0 PN2 屏南 119°06′54″ 27°03′14′′ 485 1 600 1 402.0 17.7 YC1 永春 117°55′58″ 25°25′10′′ 800 1 800 1 907.6 19.3 YC2 永春 117°53′33″ 25°27′24′′ 668 1 600 1 800.0 20.0 YT1 永泰 118°45′05″ 25°47′ 25′′ 452 1 450 1 550.0 18.6 YT2 永泰 118°45′39″ 25°54′31′′ 668 1 650 1 456.0 16.5 表 2 细叶石仙桃中总氨基酸提取工艺优选正交试验因素水平
水平 因素 A乙醇浓度/% B乙醇用量/mL C提取时间/min D提取次数 1 65 30 30 1 2 75 35 60 2 3 85 40 90 3 表 3 L9(34)正交试验设计及结果
试验号 因素 吸光度 总氨基酸含量/(mg/g) A乙醇浓度/% B乙醇用量/mL C提取时间/min D提取次数 1 1 1 1 1 0.378 2.496 1 2 1 2 2 2 0.582 4.201 0 3 1 3 3 3 0.259 1.489 2 4 2 1 2 3 0.501 3.527 2 5 2 2 3 1 0.565 4.068 4 6 2 3 1 2 0.615 4.484 6 7 3 1 3 2 0.606 4.398 9 8 3 2 1 3 0.594 4.304 3 9 3 3 2 1 0.611 4.429 1 K1 2.729 3.474 3.764 3.665 K2 4.027 4.191 4.052 4.362 K3 4.377 3.468 3.319 3.107 R 1.649 0.717 0.734 1.255 表 4 正交试验方差分析
方差来源 偏差平方和(SS) 自由度(df) 均方(MS) F P A 4.526 2 2.263 3.212 < 0.05 B 1.038 2 0.519 0.404 >0.05 C 2.371 2 1.185 1.114 >0.05 D 0.819 2 0.409 0.310 < 0.05 表 5 精密度、稳定性试验结果
试验号 精密度 稳定性 吸光度 RSD/% 吸光度 RSD/% 1 0.647 0.81 0.651 1.52 2 0.655 0.646 3 0.662 0.641 4 0.654 0.638 5 0.649 0.630 6 0.656 0.625 表 6 重复性试验结果(n=6)
试验号 吸光度 总氨基酸含量/(mg/g) 平均总氨基酸含量/(mg/g) RSD/% 1 0.647 4.753 8 4.762 5 1.76 2 0.655 4.807 9 3 0.639 4.686 6 4 0.664 4.885 3 5 0.639 4.678 8 6 0.659 4.841 4 表 7 加样回收率试验结果(n=9)
试验号 称样量/g 样品中总氨基酸含量/mg 加入量/mg 测得总氨基酸含量/mg 回收率/% 平均值/% RSD/% 1 0.750 5 3.574 3 2.80 6.325 1 98.24 98.58 1.80 2 0.751 3 3.578 1 2.80 6.289 6 96.84 3 0.751 0 3.576 6 2.80 6.410 5 101.21 4 0.749 8 3.570 9 3.57 7.002 3 96.12 5 0.751 2 3.577 6 3.57 7.158 9 100.32 6 0.749 9 3.571 4 3.57 7.089 7 98.55 7 0.750 8 3.575 7 4.30 7.752 6 97.14 8 0.750 2 3.572 8 4.30 7.896 3 100.55 9 0.749 7 3.570 4 4.30 7.796 5 98.28 表 8 不同产地细叶石仙桃总氨基酸含量的方差分析结果
产地 n 总氨基酸含量/(mg/g) F P MS组内 上杭 6 5.24±0.08 213.69 P < 0.01 0.017 屏南 6 4.70±0.06* 永春 6 4.40±0.15*# 永泰 6 6.18±0.19*#▲ q检验:与上杭比较*P < 0.05;与屏南比较#P < 0.05;与永春比较▲P < 0.05 -
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