荧光示踪法在检测神经元细胞间缝隙连接功能中的应用

于丽; 童旭辉; 纪洁; 李利; 樊宗兵; 董淑英

doi:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2015.05.003

留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

荧光示踪法在检测神经元细胞间缝隙连接功能中的应用

于丽 , 童旭辉 , 纪洁 , 李利 , 樊宗兵 , 董淑英

文章导航 > 蚌埠医学院学报 > 2015, 40 > 5: (569-571)

引用本文:

Citation:

荧光示踪法在检测神经元细胞间缝隙连接功能中的应用

蚌埠医学院药学系药理学教研室, 安徽蚌埠 233030

作者简介: 于丽(1990-),女,硕士研究生.

通讯作者: 董淑英, 教授.bbmcdsy@126.com

基金项目:
安徽省自然科学基金资助项目(1408085MH176)

国家自然科学基金资助项目(81402930)
中图分类号: R322.85

Applications of fluorescent tracer method in the detection of neuronal gap junctions

Department of Pharmacology, Bengbu Medical College, Bengbu Anhui 233030, China

Corresponding author: DONG Shu-ying, 教授.bbmcdsy@126.com

CLC number: R322.85

摘要: 目的:建立细胞荧光示踪法定量检测神经元细胞间缝隙连接功能。方法:原代培养神经元细胞,免疫荧光法鉴定神经元细胞的纯度。2种不同分子量的荧光染料Calcein和Dil与神经元细胞共同孵育30 min制成供体神经元细胞,与受体神经元细胞共同孵育2.5 h后,在倒置荧光显微镜下观察供体神经元细胞周围的受体神经元细胞数目。结果:原代培养的神经元细胞纯度达90%,可用于检测神经元细胞缝隙连接功能的实验。所建立的方法可以清晰观察到供体神经元细胞周围受体神经元细胞,并可以计数。结论:本实验所建立的荧光示踪法能够定量检测神经元细胞间缝隙连接功能。
- 神经元 /
- 缝隙连接 /
- 功能检测
Abstract: Objective: To establisha method used for quantitative detecting the neuronal gap junction function.Methods: The primary neurons were cultured,the purity of neurons was identified by immunofluorescence.Two kinds of different molecular weight of fluorescent dyes Calcein and Dil were incubated with neurons for 30 min to make donor neurons,and then incubated with received neurons for 2.5 h.The number of received neurons around the donor neurons was observed with inverted fluorescence microscope.Results: The purity of cultured primary neurons reached 90%,which could be used to defect neurons gap junction function.The received neurons around the donor neurons could be clearly observed and counted.Conclusions: The fluorescent tracer method established in this experiment can be used for quantitative detecting the neuronal gap junction function.
- neuron /
- gap junction /
- functional detecting

[1]	Abrams CK,Scherer SS.Gap junctions in inherited human disorders of the central nervous system[J].Biochim Biophys Acta,2012,1818(8):2030-2047.
[2]	Vinken M,Vanhaecke T,Papeleu P,et al.Connexins and their channels in cell growth and cell death[J].Cell Signal,2006,18(5):592-600.
[3]	闫华,只达石,刘锐.荧光显微镜划痕标记染料示踪技术的改进[J].中国现代神经疾病杂志,2006,6(2):123.
[4]	Söhl G,Maxeiner S,Willecke K.Expression and functions neuronal gap junctions[J].Nat Rev Neurosci,2005,6(3):191-200.
[5]	俞韩啸,虞燕琴.缝隙连接与脑功能研究进展[J].浙江大学学报:医学版,2012,41(6):696-702.
[6]	Park WM,Wang Y,Park S,et al.Interplay of chemical neurotransmitters regulates developmental increase in electrical synapses[J].J Neurosci,2011,31(16):5909-5920.
[7]	Belousov AB.The regulation and role of neuronal gap junctions during neuronal injury[J].Channels(Austin),2012,6(5):390-392.
[8]	Wang Y,Song JH,Denisova JV,et al.Neuronal gap junction coupling is regulated by glutamate and plays critical role in cell death during neuronal injury[J].J Neurosci,2012,32(2):713-725.
[9]	Garrett FG,Durham PL.Differential expression of connexins in trigeminal ganglion neurons and satellite glial cells in response to chronic or acute joint inflammation[J].Neuron Glia Biol,2008,4(4):295-306.
[10]	Wang YF,Song JH,Belousov JV,et al.Neuronal gap junction coupling is regulated by glutamate and plays critical role in cell death during neuronal injury[J].J Neurosci,2012,32(2):713-725.
[11]	姚伯昕.缝隙连接与癫痫[J].海南医学,2009,20(6):132-135.
[12]	曾玉杰,冯义柏,于世龙,等.缺血再灌注后心肌细胞缝隙连接通讯改变与其凋亡及坏死的关系[J].中国组织工程研究与临床康复,2007,11(16):3074-3077.

[1]	范高福 , 童旭辉 , 董淑英 , 蒋国君 , 陶亮 . 鞣花酸对转染并稳定表达Cx32的HeLa细胞缝隙连接功能的影响. 蚌埠医学院学报, 2014, 38(5): 564-567.
[2]	蒋国君 , 童旭辉 , 祝晓光 . 缝隙连接作为乳腺癌治疗新靶点的研究进展. 蚌埠医学院学报, 2013, 37(3): 368-371.
[3]	范高福 , 童旭辉 , 陶亮 . 缝隙连接:一个潜在的肿瘤治疗新靶点. 蚌埠医学院学报, 2012, 36(2): 234-237.
[4]	赵晶晶 , 杨振坤 , 孙洁 , 王伟 , 董文艳 , 陈静瑜 . AMPK激动剂AICAR抑制糖氧剥夺损伤后星形胶质细胞的炎性反应及对神经元损伤的保护作用. 蚌埠医学院学报, 2018, 43(4): 450-453. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2018.04.008
[5]	孙美群 , 陈前芬 , 汪洪涛 . 新生大鼠大脑皮层神经元原代培养与鉴定. 蚌埠医学院学报, 2008, 33(1): 19-21.
[6]	周礼华 , 徐淑秀 , 江城梅 . 新生大鼠小脑颗粒神经元原代培养与鉴定. 蚌埠医学院学报, 2011, 36(2): 121-123.
[7]	齐晓艳 , 张波 , 余美玲 , 陶亮 , 张翠玲 . 三七皂苷R1通过细胞缝隙连接对顺铂细胞毒性作用的影响. 蚌埠医学院学报, 2012, 36(2): 134-137.
[8]	陈玉芳 , 苏建华 , 唐金荣 , 肖杭 . 盐酸丁咯地尔对SD大鼠坐骨神经损害后神经元的保护作用. 蚌埠医学院学报, 2006, 31(6): 582-583.
[9]	孙彦君 . 奥拉西坦联合醒脑静治疗脑外伤的效果及对神经元损伤的影响. 蚌埠医学院学报, 2022, 47(6): 764-768. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2022.06.015
[10]	周艺 , 李珍 , 王烈成 , 祝延 , 方芳 , 黄大可 . 白藜芦醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用. 蚌埠医学院学报, 2011, 36(9): 921-924,930.
[11]	陈银玲 , 童旭辉 , 唐媛媛 , 齐佳佳 , 杜家如 , 董淑英 . P2X7受体拮抗剂BBG抗大鼠星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的作用. 蚌埠医学院学报, 2017, 42(6): 701-705. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2017.06.001
[12]	韦道祥 , 陈俊抛 , 杨卫红 . 腹腔注射卡因酸对大鼠海马细胞凋亡的影响. 蚌埠医学院学报, 2004, 29(1): 9-11.
[13]	朱成 , 王淮 . 神经元特异性烯醇化酶检测对颅脑损伤诊断分型及判断预后的临床意义. 蚌埠医学院学报, 2014, 38(1): 50-52.
[14]	齐晓艳 , 张翠玲 . 缝隙连接细胞间通讯对顺铂疗效的影响研究进展. 蚌埠医学院学报, 2012, 36(3): 370-372.
[15]	黄家琴 , 杨杰 . 血清前白蛋白和神经元特异性烯醇化酶检测在新生儿缺氧缺血性脑病诊断中的临床意义. 蚌埠医学院学报, 2019, 44(2): 219-221. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2019.02.024
[16]	刘秀平 , 祝延 . 电压门控钠通道与神经元动作电位编码研究进展. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(3): 275-277.
[17]	刘圆圆 , 刘娟 , 杨燕 , 张金莲 , 巩幼洁 , 欧玉荣 . 缝隙连接蛋白26和核转录因子κB在三阴性乳腺癌原发灶及淋巴结转移灶中的表达及临床意义. 蚌埠医学院学报, 2019, 44(11): 1453-1457. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2019.11.005
[18]	江城梅 , 赵文红 , 赵红 , 申玲 , 王丹妮 . 三羟异黄酮对丙烯酰胺致小脑神经元凋亡的影响. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(1): 1-4.
[19]	谢军 , 张侠 , 李红林 . 不同血液标本及存放时间对神经元特异性烯醇化酶测定的影响. 蚌埠医学院学报, 2013, 37(12): 1654-1655.
[20]	聂荔 , LI Xiang , 慕丽娟 , 王浩 . 抑制MAPK通路对大鼠癫痫持续状态引起海马神经元损伤的保护作用. 蚌埠医学院学报, 2018, 43(11): 1405-1407,1410. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2018.11.002

点击查看大图

计量

文章访问数: 4205
HTML全文浏览量: 698
PDF下载量: 168
被引次数: 0

荧光示踪法在检测神经元细胞间缝隙连接功能中的应用

通讯作者: 董淑英, 教授.bbmcdsy@126.com

作者简介: 于丽(1990-),女,硕士研究生.

蚌埠医学院药学系药理学教研室, 安徽蚌埠 233030

收稿日期: 2014-11-10

基金项目: 安徽省自然科学基金资助项目(1408085MH176)国家自然科学基金资助项目(81402930)

关键词:

摘要: 目的:建立细胞荧光示踪法定量检测神经元细胞间缝隙连接功能。方法:原代培养神经元细胞,免疫荧光法鉴定神经元细胞的纯度。2种不同分子量的荧光染料Calcein和Dil与神经元细胞共同孵育30 min制成供体神经元细胞,与受体神经元细胞共同孵育2.5 h后,在倒置荧光显微镜下观察供体神经元细胞周围的受体神经元细胞数目。结果:原代培养的神经元细胞纯度达90%,可用于检测神经元细胞缝隙连接功能的实验。所建立的方法可以清晰观察到供体神经元细胞周围受体神经元细胞,并可以计数。结论:本实验所建立的荧光示踪法能够定量检测神经元细胞间缝隙连接功能。