DNMT1、DNMT3b siRNA重组质粒的构建及鉴定

刘毅; 张旋; 魏涧; 李虎宜; 梁志恒; 张栩亮; 张有顺

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DNMT1、DNMT3b siRNA重组质粒的构建及鉴定

刘毅 , 张旋 , 魏涧 , 李虎宜 , 梁志恒 , 张栩亮 , 张有顺

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DNMT1、DNMT3b siRNA重组质粒的构建及鉴定

1.
1. 湖北医药学院附属东风总医院泌尿科, 湖北十堰442008;
2.
2. 湖北医药学院附属东风总医院妇产科, 湖北十堰442008;
3.
3. 湖北医药学院分子生物学实验室, 湖北十堰442008

作者简介: 刘毅（1981 -），男，主治医师。

基金项目:
湖北省卫生厅科研基金资助项目(JX3B27)

Construction and identification of siRNA recombinant plasmid of DNMTl and DNMT3b genes

1.
1. Department of Urology, Affiliated to Dongfen General Hospital of Hubei University of Medicine, Shiyan Hubei 442008;
2.
2. Department of Obstetrics and Gynecology, Affiliated to Dongfen General Hospital of Hubei University of Medicine, Shiyan Hubei 442008;
3.
3. Laboratory of Molecular Biology, Hubei University of Medicine, Shiyan Hubei 442008, China

摘要: 目的：构建DNA甲基转移酶（DNMT1）、DNMT3b微干扰RNA（siRNA）重组质粒，并鉴定其正确性。方法：构建DNMT1siRNA重组质粒和DNMT3b siRNA重组质粒各4种，分别用BamHⅠ和PstⅠ酶切、测序、鉴定。结果：用BamHⅠ和PstⅠ进行双酶切后所有质粒均为阳性重组载体，每一种载体选择两个克隆进行测序鉴定，测序结果与插入的寡核苷酸的序列完全相符。结论：DNMT1 siRNA重组质粒和DNMT3b siRNA重组质粒正确，可用于后续实验。
- 重组,基因 /
- DNA甲基转移酶 /
- 微干扰RNA /
- 酶切鉴定
Abstract: Objective:To construct and identificate the siRNA recombinant plasmid of DNMT1 and DNMT3b genes.Methods:Four types of siRNA recombinant plasmid of DNMT1 or DNMT3b gene were constructed,and identificated.Results:After digested withBamH Ⅰ and pstⅠ enzymes,all plasmids showed positive for recombinant vector plasmids.Two clones of each type of vector plasimid were selected for,sequencing identification.The results of sequencing identification were consistent with the inserted oligonucleotides.Conclusions:The siRNA recombinant plasmids of DNMT1 and DNMT3b genes were constructed corectly and could be used for further study.
- restructuring, gen /
- DNA methylferase /
- small interfering RNA /
- enzyme digestion

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DNMT1、DNMT3b siRNA重组质粒的构建及鉴定

作者简介: 刘毅（1981 -），男，主治医师。

1. 1. 湖北医药学院附属东风总医院泌尿科, 湖北十堰442008;
2. 2. 湖北医药学院附属东风总医院妇产科, 湖北十堰442008;
3. 3. 湖北医药学院分子生物学实验室, 湖北十堰442008

收稿日期: 2011-01-03
网络出版日期: 2012-01-15

基金项目: 湖北省卫生厅科研基金资助项目(JX3B27)

关键词:

摘要: 目的：构建DNA甲基转移酶（DNMT1）、DNMT3b微干扰RNA（siRNA）重组质粒，并鉴定其正确性。方法：构建DNMT1siRNA重组质粒和DNMT3b siRNA重组质粒各4种，分别用BamHⅠ和PstⅠ酶切、测序、鉴定。结果：用BamHⅠ和PstⅠ进行双酶切后所有质粒均为阳性重组载体，每一种载体选择两个克隆进行测序鉴定，测序结果与插入的寡核苷酸的序列完全相符。结论：DNMT1 siRNA重组质粒和DNMT3b siRNA重组质粒正确，可用于后续实验。