人端粒酶逆转录酶基因启动子调控表达载体的构建和鉴定

马黎丽; 陈昌杰; 杨清玲; 章尧

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人端粒酶逆转录酶基因启动子调控表达载体的构建和鉴定

马黎丽 , 陈昌杰 , 杨清玲 , 章尧

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Citation:

人端粒酶逆转录酶基因启动子调控表达载体的构建和鉴定

1. 蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心, 安徽蚌埠 233030;
2. 蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室, 安徽蚌埠 233030

作者简介: 马黎丽(1981-),女,硕士研究生.

基金项目:
安徽省教育厅自然科学研究资助项目(KJ2008A052)
中图分类号: R733.71;Q343.1

Construction and identification of a expression vector driven by human telomerase reverse transcriptase gene promotor

1. Research Center of Clinical Laboratory, Bengbu Medical College, Bengbu Anhui 233030, China;
2. Department of Biochemistry and Molecular Biology, Bengbu Medical College, Bengbu Anhui 233030, China
CLC number: R733.71;Q343.1

摘要: 目的:构建并鉴定人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transeriptase,hTERT)基因启动子调控的荧光素酶基因表达载体。方法:用巢式PCR方法克隆hTERT序列长约1100bp的启动子片段,经测序无误后将其插入荧光素酶基因报告载体中,构建pGL3-hTERTp重组质粒,转化JM190细菌得到大量含有hTERT启动子的荧光素酶重组质粒。用双酶切和PCR法鉴定重组质粒,并送测序鉴定。结果:经过酶切和PCR法鉴定成功地构建了携带hTERT启动子的重组荧光素酶基因报告载体。结论:成功获得由hTERT启动子调控的荧光素酶基因表达载体,为研究As₂O₃对HL-60细胞端粒酶作用的分子机制打下基础。
- 白血病,髓母细胞性 /
- 基因表达 /
- 人端粒酶逆转录酶 /
- 启动子 /
- 荧光素酶基因表达载体
Abstract: Objective: To construc and identify the expression vector which contains a luciferase gene driven by human telomerase reverse transcriptase(hTERT) gene promotor.Methods: The fragment of hTERT promoter about 1 100 bp was acquired by nested PCR amplification,the correct sequence was inserted into the luciferase gene expression vector.In order to get a lot of containing hTERT promoter luciferase recombinant,the construction of pGL3-hTERTp recombinant was transformed into JM190 bacteria.Restriction endonuclease and PCR were used to identify the recombinant and sequencing.Results: After identifying which used restriction endonuclease and PCR method,we successfully constructed the recombinant of hTERT promoter luciferase gene expression vector.Conclusions: A novel recombinant luciferase gene expression vector driven by hTERT promoter is made successfully,and the newly constructed recombinant is useful for study the molecular mechanism that As₂O₃ inhibits the expression of telomerase of HL-60 cells.
- leukemia,mycloblastic /
- gene expression /
- human telomerase reverse transcriptase /
- promoter /
- luciferase gene expression vector

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人端粒酶逆转录酶基因启动子调控表达载体的构建和鉴定

作者简介: 马黎丽(1981-),女,硕士研究生.

1. 蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心, 安徽蚌埠 233030;
2. 蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室, 安徽蚌埠 233030

收稿日期: 2008-06-26

基金项目: 安徽省教育厅自然科学研究资助项目(KJ2008A052)

关键词:

摘要: 目的:构建并鉴定人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transeriptase,hTERT)基因启动子调控的荧光素酶基因表达载体。方法:用巢式PCR方法克隆hTERT序列长约1100bp的启动子片段,经测序无误后将其插入荧光素酶基因报告载体中,构建pGL3-hTERTp重组质粒,转化JM190细菌得到大量含有hTERT启动子的荧光素酶重组质粒。用双酶切和PCR法鉴定重组质粒,并送测序鉴定。结果:经过酶切和PCR法鉴定成功地构建了携带hTERT启动子的重组荧光素酶基因报告载体。结论:成功获得由hTERT启动子调控的荧光素酶基因表达载体,为研究As₂O₃对HL-60细胞端粒酶作用的分子机制打下基础。