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间日疟原虫醛缩酶的克隆、表达与初步鉴定

高迎 陶志勇 夏惠 陈勇 王雪梅 方强

引用本文:
Citation:

间日疟原虫醛缩酶的克隆、表达与初步鉴定

    作者简介: 高迎(1985-),女,硕士,检验师.
    通讯作者: 夏惠, xiahui912@163.com
  • 基金项目:

    卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室开放课题(WK009-001)

    安徽省教育厅自然科学研究重点资助项目(KJ2012-A-200)

Cloning,expression and identification of Plasmodium vivax aldolase

    Corresponding author: XIA Hui, xiahui912@163.com ;
  • 摘要: 目的:克隆间日疟原虫醛缩酶(Plasmodium vivax aldolase,PvALD)基因,体外表达和鉴定重组PvALD蛋白。方法:PCR法从间日疟患者血液DNA样品中扩增PvALD基因,构建pET32c-PvALD重组表达质粒,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3+),诱导表达带有His标签的重组蛋白,并对PvALD在E.coli中表达进行优化,观察诱导时间、诱导剂浓度、培养基种类对该蛋白原核表达的影响。采用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,相应表达物分别采用SDS-PAGE电泳和Western blot进行分析鉴定。结果:PvALD的PCR产物分子量为1.1 kb,重组质粒pET32c-PvALD经测序验证,其插入片段序列与GenBank参考序列相似性为100%,转化E.coli所表达的重组蛋白分子量约为60 kD。PvALD在LB中1 mmol/L IPTG诱导6 h条件下获得最佳的表达效果。亲和层析纯化后的PvALD经SDS-PAGE电泳检测,呈现单一条带,Western blot分析结果显示,该重组蛋白只能被间日疟患者血清特异性识别,而不能被恶性疟患者血清识别。结论:成功克隆了PvALD基因,表达了重组PvALD蛋白,为以PvALD作为靶标的间日疟快速诊断方法提供了基础。
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出版历程
  • 收稿日期:  2012-10-29
  • 刊出日期:  2013-07-15

间日疟原虫醛缩酶的克隆、表达与初步鉴定

    通讯作者: 夏惠, xiahui912@163.com
    作者简介: 高迎(1985-),女,硕士,检验师.
  • 1. 1. 蚌埠医学院病原生物学教研室;
  • 2.  2. 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室;
  • 3.  3. 河南省南阳市中心医院检验科
基金项目:  卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室开放课题(WK009-001)安徽省教育厅自然科学研究重点资助项目(KJ2012-A-200)

摘要: 目的:克隆间日疟原虫醛缩酶(Plasmodium vivax aldolase,PvALD)基因,体外表达和鉴定重组PvALD蛋白。方法:PCR法从间日疟患者血液DNA样品中扩增PvALD基因,构建pET32c-PvALD重组表达质粒,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3+),诱导表达带有His标签的重组蛋白,并对PvALD在E.coli中表达进行优化,观察诱导时间、诱导剂浓度、培养基种类对该蛋白原核表达的影响。采用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,相应表达物分别采用SDS-PAGE电泳和Western blot进行分析鉴定。结果:PvALD的PCR产物分子量为1.1 kb,重组质粒pET32c-PvALD经测序验证,其插入片段序列与GenBank参考序列相似性为100%,转化E.coli所表达的重组蛋白分子量约为60 kD。PvALD在LB中1 mmol/L IPTG诱导6 h条件下获得最佳的表达效果。亲和层析纯化后的PvALD经SDS-PAGE电泳检测,呈现单一条带,Western blot分析结果显示,该重组蛋白只能被间日疟患者血清特异性识别,而不能被恶性疟患者血清识别。结论:成功克隆了PvALD基因,表达了重组PvALD蛋白,为以PvALD作为靶标的间日疟快速诊断方法提供了基础。

English Abstract

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