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Max作用蛋白1-0缺失突变体的构建、表达及细胞内定位的研究

蒋秀琴 胡圳圳 花荣 郭文文 郑大同

引用本文:
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Max作用蛋白1-0缺失突变体的构建、表达及细胞内定位的研究

    作者简介: 蒋秀琴(1971-),女,副主任技师.
  • 基金项目:

    国家自然科学基金项目(81301822)

    南京医科大学科技发展基金重点项目(2012NJMU088)

  • 中图分类号: R786

Construction,expression and intracellular localization of truncation mutants of Max interacting protein 1-0

  • CLC number: R786

  • 摘要: 目的:构建Max作用蛋白1-0(Max interacting protein1-0,Mxi1-0)缺失突变体的真核表达载体并观察这些突变体在细胞内的定位情况,为研究Mxi1-0细胞内定位与其功能的关系奠定基础。方法:以野生型Mxi1-0真核表达质粒为模板,聚合酶链式反应扩增出5种类型Mxi1-0缺失突变体的基因片段,克隆至增强绿色荧光蛋白真核表达载体,经酶切和测序鉴定后,利用脂质体将重组质粒转染小鼠胚胎成纤维细胞株(NIH3T3)。Western blot检测融合蛋白的表达,荧光显微镜下观察融合蛋白细胞内定位情况。结果:各种Mxi1-0缺失突变体经测序鉴定正确后,在NIH3T3中得到表达。免疫荧光结果表明,脯氨酸富集结构域(PRD)突变体在细胞质和细胞核中均有分布,与Sin3结合域高度同源结构域(tSID)突变体主要分布于细胞质,在细胞核中有少量分布;PRD-tSID突变体及△PRD突变体分布于细胞质,而△PRD-tSID突变体主要分布于细胞核。结论:成功构建了5种人Mxi1-0缺失突变体的真核表达载体,并初步观察这些突变体在细胞内的定位情况,为探寻Mxi1-0在细胞内定位机制及功能奠定了基础。
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出版历程
  • 收稿日期:  2014-10-09

Max作用蛋白1-0缺失突变体的构建、表达及细胞内定位的研究

    作者简介: 蒋秀琴(1971-),女,副主任技师.
  • 1. 南京医科大学第二附属医院临床分子基因检测中心, 江苏南京 210011;
  • 2. 南京医科大学生殖医学国家重点实验室, 江苏南京 210029
基金项目:  国家自然科学基金项目(81301822)南京医科大学科技发展基金重点项目(2012NJMU088)

摘要: 目的:构建Max作用蛋白1-0(Max interacting protein1-0,Mxi1-0)缺失突变体的真核表达载体并观察这些突变体在细胞内的定位情况,为研究Mxi1-0细胞内定位与其功能的关系奠定基础。方法:以野生型Mxi1-0真核表达质粒为模板,聚合酶链式反应扩增出5种类型Mxi1-0缺失突变体的基因片段,克隆至增强绿色荧光蛋白真核表达载体,经酶切和测序鉴定后,利用脂质体将重组质粒转染小鼠胚胎成纤维细胞株(NIH3T3)。Western blot检测融合蛋白的表达,荧光显微镜下观察融合蛋白细胞内定位情况。结果:各种Mxi1-0缺失突变体经测序鉴定正确后,在NIH3T3中得到表达。免疫荧光结果表明,脯氨酸富集结构域(PRD)突变体在细胞质和细胞核中均有分布,与Sin3结合域高度同源结构域(tSID)突变体主要分布于细胞质,在细胞核中有少量分布;PRD-tSID突变体及△PRD突变体分布于细胞质,而△PRD-tSID突变体主要分布于细胞核。结论:成功构建了5种人Mxi1-0缺失突变体的真核表达载体,并初步观察这些突变体在细胞内的定位情况,为探寻Mxi1-0在细胞内定位机制及功能奠定了基础。

English Abstract

参考文献 (11)

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