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结直肠癌(colorectal cancer,CRC)具有高发病率及死亡率的特点[1]。目前,结直肠癌的治疗以手术治疗为主,结合化疗、放疗等综合治疗。但对于广泛肝转移的结直肠癌治疗效果仍然有限,并成为病人的主要死亡原因[2]。因此,亟需找到结直肠癌新的治疗方法,提高结直肠癌病人的早期诊断率和生存率。通过人类基因组的大规模测序及高通量转录分析发现,人体内蛋白编码基因仅占约20 000种,其余绝大部分的基因对应的产物为非编码RNA[3]。这些非编码RNA根据分子量大小又可以分为短链非编码RNA及长链非编码RNA(long non-coding RNA, LncRNA),LncRNA是指一类转录本长度>200个核苷酸且不能翻译成蛋白质的RNA分子,曾一度被认为是无意义的转录而未受到重视[4]。LncRNA具有高度保守的序列元件,亚细胞定位于细胞核内或细胞质中,近期研究[5]显示,LncRNA通过与蛋白质、DNA、RNA相互作用,在转录、转录后、表观遗传等多个水平调控基因的表达。LOEWER等[6]在2010年报道了一种能调节已经分化的细胞转换为多能诱导干细胞重编程过程的LncRNA,并将这该RNA命名为LncRNA-ROR(LncRNA regulator of reprogramming,ROR)。后期研究[7-8]发现,ROR不仅能调控细胞的重编程过程,其在多种肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡中发挥重要作用并与病人预后密切相关。目前,ROR在结直肠癌中的研究甚少,其在结直肠癌中的表达情况及所发挥的作用尚鲜见报道。本研究拟采用qRT-PCR检测ROR在结直肠癌组织中的表达情况,并通过增殖功能实验初步探索ROR在结直肠癌细胞增殖中的作用。
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通过qRT-PCR检测40例结直肠癌病人的肿瘤组织及其配对正常组织标本中ROR的表达水平显示,结直肠癌组织中ROR的表达水平明显低于配对的正常组织水平(P<0.01)(见表 1)。
分组 n ROR的RNA相对表达量 t P 正常组织 40 1.12±0.41 9.01 <0.01 癌组织 40 0.47±0.20 表 1 ROR在结直肠癌与在正常组织中的表达情况比较($\overline x \pm s$)
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研究显示,ROR的表达水平与结直肠癌的TNM分期具有相关性(P<0.05),而与病人性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移无明显相关(P>0.05)(见表 2)。
变量 n ROR表达情况 χ2 P 高 低 性别 男 31 10 21 0.46 >0.05 女 9 4 5 年龄/岁 ≥65 28 11 17 0.75 >0.05 < 65 12 3 9 肿瘤大小/cm ≥5 21 5 16 2.43 >0.05 < 5 19 9 10 淋巴结转移 阴性 23 6 17 1.89 >0.05 阳性 17 8 9 TNM分期 Ⅰ+Ⅱ 21 11 10 5.87 <0.05 Ⅲ+Ⅳ 19 3 16 表 2 ROR表达情况与病人临床病理因素的关系
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利用基因过表达技术,在结直肠癌细胞系SW620中转染构建好的LV5-ROR及空载的LV5-NC慢病毒,qRT-PCR技术检测转染后细胞中ROR的表达量。与对照组比较,转染SW620细胞系中的ROR表达量明显增高,过表达效果满意,2组之间差异有统计学意义(P<0.01)(见表 3)。
分组 n ROR的表达量 t P SW620-Vector 3 1.34±0.23 -7.19 <0.01 SW620-ROR 3 12.5±2.68 表 3 经转染筛选后ROR在结直肠癌细胞SW620中的表达情况($\overline x \pm s$)
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CCK-8实验显示:SW620-ROR细胞在第2天增殖能力降低,随着时间的推移,差距进一步明显,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)(见表 4)。平板克隆实验结果表明:过表达ROR后,结直肠癌细胞的增殖能力减弱,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)(见表 5、见图 1)。
分组 n 第0天 第1天 第2天 第3天 第4天 SW620-Vector 3 0.38±0.03 0.43±0.05 0.53±0.08 0.81±0.09 1.20±0.11 SW620-ROR 3 0.39±0.04 0.41±0.07 0.46±0.08 0.61±0.07 0.82±0.08 t — -0.35 0.40 1.07 3.04 4.84 P — >0.05 >0.05 >0.05 <0.05 <0.01 表 4 CCK-8实验显示SW620-Vector与SW620-ROR的细胞增殖能力(OD450)的比较($\overline x \pm s$)
分组 n 克隆数 t P SW620-Vector 3 266.00±29.33 10.39 <0.01 SW620-ROR 3 63.67±16.67 表 5 平板克隆实验显示SW620-Vector与SW620-ROR细胞形成的克隆数比较
长链非编码RNA-ROR对结直肠癌SW620细胞增殖的影响
Effect of LncRNA-ROR on the proliferation of colorectal cancer SW620 cells
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摘要:
目的了解长链非编码RNA-ROR(LncRNA-ROR)在结直肠癌SW620细胞增殖中的作用。 方法选择40例结直肠癌组织及相应正常组织(距肿瘤切缘5cm以外),首先采用qRT-PCR技术检测LncRNA-ROR在结直肠癌组织中的表达情况,并分析其表达与病人临床病理因素的相关性。构建慢病毒载体LV5-ROR、LV5-Vector转染到结直肠癌细胞SW620中,验证LncRNA-ROR的表达,分析LncRNA-ROR过表达对结直肠癌细胞CCK-8功能及SW620平板克隆形成的影响。 结果与正常组织比较,LncRNA-ROR在结直肠癌组织中低表达(P < 0.01),其表达水平与TNM分期具有相关性(P < 0.05)。经转染筛选后,qRT-PCR检测证实SW620中的LncRNA-ROR表达增加,其高表达导致SW620增殖能力的下降(P < 0.01)。 结论LncRNA-ROR的过表达抑制了结直肠癌细胞SW620的增殖。 -
关键词:
- 结直肠肿瘤 /
- LncRNA-ROR /
- SW620细胞 /
- 增殖
Abstract:ObjectiveTo investigate the effects of long non-coding RNA-ROR(LncRNA-ROR) on the proliferation of colorectal cancer SW620 cells. MethodsThe expression level of LncRNA-ROR in colorectal cancer tissue was detected using qRT-PCR, and the relationship between the expression level of LncRNA-ROR and clinicopathological data was analyzed.The lentiviral vector LV5-ROR was constructed, and transfected into the colorectal cancer SW620 cells and verified.The effects of LncRNA-ROR overexpression on the function and colony formation of SW620 cells were analyzed. ResultsCompared with the normal tissue, the expression level of LncRNA-ROR was low in colorectal cancer tissue(P < 0.01), and its expression level was closely related to TNM stage(P < 0.05).After transfection, the expression level of LncRNA-ROR increasing in SW620 cells was identified by qRT-PCR, and its high expression led to the decreasing of proliferation function of SW620 cells(P < 0.01). ConclusionsThe overexpression of LncRNA-ROR can inhibit the proliferation of SW620 cells. -
Key words:
- colorectal neoplasms /
- long non-coding RNA-ROR /
- SW620 cells /
- proliferation
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表 1 ROR在结直肠癌与在正常组织中的表达情况比较(
)$\overline x \pm s$ 分组 n ROR的RNA相对表达量 t P 正常组织 40 1.12±0.41 9.01 <0.01 癌组织 40 0.47±0.20 表 2 ROR表达情况与病人临床病理因素的关系
变量 n ROR表达情况 χ2 P 高 低 性别 男 31 10 21 0.46 >0.05 女 9 4 5 年龄/岁 ≥65 28 11 17 0.75 >0.05 < 65 12 3 9 肿瘤大小/cm ≥5 21 5 16 2.43 >0.05 < 5 19 9 10 淋巴结转移 阴性 23 6 17 1.89 >0.05 阳性 17 8 9 TNM分期 Ⅰ+Ⅱ 21 11 10 5.87 <0.05 Ⅲ+Ⅳ 19 3 16 表 3 经转染筛选后ROR在结直肠癌细胞SW620中的表达情况(
)$\overline x \pm s$ 分组 n ROR的表达量 t P SW620-Vector 3 1.34±0.23 -7.19 <0.01 SW620-ROR 3 12.5±2.68 表 4 CCK-8实验显示SW620-Vector与SW620-ROR的细胞增殖能力(OD450)的比较(
)$\overline x \pm s$ 分组 n 第0天 第1天 第2天 第3天 第4天 SW620-Vector 3 0.38±0.03 0.43±0.05 0.53±0.08 0.81±0.09 1.20±0.11 SW620-ROR 3 0.39±0.04 0.41±0.07 0.46±0.08 0.61±0.07 0.82±0.08 t — -0.35 0.40 1.07 3.04 4.84 P — >0.05 >0.05 >0.05 <0.05 <0.01 表 5 平板克隆实验显示SW620-Vector与SW620-ROR细胞形成的克隆数比较
分组 n 克隆数 t P SW620-Vector 3 266.00±29.33 10.39 <0.01 SW620-ROR 3 63.67±16.67 -
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