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复发性流产(recurrent spontaneous abortion, RSA)指的是连续发生2次或2次以上的自然流产, 其也是临床最常见的病理妊娠疾病，可对病人身心和生育健康造成巨大的危害[1]。关于该疾病的发病机制临床尚无明确定论，但有研究[2-4]表明，RSA中能够识别病人病因的仅占1/2，主要包含母体生殖道异常、免疫功能异常、内分泌异常、染色体异常、生殖道感染及子宫解剖因素等。但仍有1/2病人发病原因不明。因此，本研究分析8-异构前列腺素(8-isoprostane)、超氧化物歧化酶(SOD)、血浆总抗氧化能力(AOA)、转录因子-κB(NF-κB)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在RSA中表达及影响，以探究不明原因RSA发病的相关机制, 以期能为该疾病预防和治疗提供有效的参考。现作报道。
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选择我院2018年6月至2019年10月收治的119例不明原因RSA病人作为研究对象，分为不明原因RSA病人60例作为研究对象(病例组)，进行正常妊娠分娩妇女59例作为参照对象(对照组)，病例组纳入标准：(1)连续发生早期自然流产3~10次者；(2)女方生殖道未出现器质性改变者；(3)生殖道内分泌正常者；(4)无生殖道感染者；(5)抗子宫内膜抗体、抗心磷脂抗体等呈阴性者；(6)夫妻双方染色体正常者；(7)病人及家属对该项研究均知情同意，且签署知情同意书。排除标准：(1)合并存在心、肝、肾功能障碍者；(2)合并存在其他可能影响本研究结果的疾病者。对照组纳入标准：(1)正常早孕孕妇；(2)病人及家属对该项研究均知情同意，且签署知情同意书。排除标准：(1)合并存在心、肝、肾功能障碍者；(2)合并存在其他可能影响本研究结果的疾病者。2组病人的年龄与体质量指数差异均无统计学意义(P>0.05)(见表 1)，具有可比性。
分组 n 年龄/岁 体质量指数/(kg/m2) 对照组 59 28.6±2.1 29.6±2.7 病例组 60 28.4±2.3 29.8±2.4 t — 0.50 0.43 P — ＞0.05 ＞0.05 表 1 2组病人一般资料比较(x±s)
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血液指标检测：对照组在分娩20 min内，病例组在流产后20 min内抽取病人10mL静脉血，采用3 000 r/min离心10 min后，留取血清保存于-60 ℃冰箱中待检，采用双抗体夹心法检测8-isoprostane水平，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测SOD、AOA水平和NF-κB、iNOS含量。
绒毛蜕膜组织相关指标检测：收集对照组分娩后和病例组流产后的蜕膜组织，采用0.9%氯化钠溶液反复冲洗，漂洗干净后，在4 ℃环境中采用10%甲醛将绒毛蜕膜组织固定24 h，使其使其脱水干净，再采用石蜡将其制成包块，并制备厚度为4μm左右的石蜡切片，然后对切片标本采用免疫组织化学SP法进行染色，最后，采用ELISA法对各组绒毛蜕膜组织中的8-isoprostane、SOD、AOA水平和NF-κB、iNOS含量进行检测[5]。
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比较2组病人血液和绒毛蜕膜组织中的8-isoprostane、SOD、AOA等氧化应激指标及NF-κB、iNOS水平。
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采用t(或t′)检验。
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2组病人血液中AOA水平差异无统计学意义(P>0.05)，不明原因RSA病人血液中8-isoprostane、NF-κB和iNOS水平均高于正常妊娠妇女(P < 0.01)，血液中SOD水平低于正常妊娠妇女(P < 0.01)(见表 2)。
分组 n 8-isoprostane/(ng/L) SOD/(μU/L) AOA/mmHg NF-κB/(μU/L) iNOS/(U/mL) 对照组 59 62.4±6.2 24.6±3.5 21.4±3.3 5.6±1.2 6.2±1.0 病例组 60 83.2±8.1 18.5±3.3 20.9±3.4 8.8±1.6 9.5±1.3 t — 15.75* 9.78 0.81 12.36* 15.54* P — < 0.01 < 0.01 ＞0.05 < 0.01 < 0.01 *示t′值 表 2 2组血液中8-isoprostane、SOD、AOA、NF-kB和iNOS水平比较(x±s)
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2组病人绒毛蜕膜组织中AOA水平差异无统计学意义(P>0.05)，不明原因RSA病人绒毛蜕膜组织中8-isoprostane、NF-κB和iNOS水平均明显高于正常妊娠妇女(P < 0.01)，SOD水平明显低于正常妊娠妇女(P < 0.01)(见表 3)。
分组 n 8-isoprostane/(ng/L) SOD/(μU/L) AOA/mmHg NF-κB/(μU/L) iNOS/(U/mL) 对照组 59 60.6±6.1 23.5±3.6 20.8±3.3 5.7±1.3 6.2±1.1 病例组 60 82.7±8.2 19.0±3.2 21.0±3.2 8.9±1.4 9.6±1.2 t — 16.70* 7.21 0.34 12.92 16.10 P — ＜0.01 < 0.01 ＞0.05 ＜0.01 ＜0.01 *示t′值 表 3 2组绒毛蜕膜组织中8-isoprostane、SOD、AOA、NF-κB和iNOS水平比较(x±s)
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近年来，我国RSA发病率呈明显的上升趋势，该疾病不仅会引发孕妇病人出现连续自然流产现象，同时还会引发其停经后出现阴道出血、腹痛等症状，从而对病人身心和生育健康造成严重的影响[6]。要预防RSA的发生和采取有效的方案对病人进行治疗，就需对其致病原因进行明确[7]。然而，临床研究表明，导致RSA的致病因素十分复杂，RSA中能够识别病人病因的仅占1/2，主要包含母体生殖道异常(如母体子宫畸形、子宫肌瘤、宫颈机能不全或存在Asherman综合征等)、免疫功能异常(主要包含自身免疫和同种免疫)、内分泌异常(包含黄体功能不全、高泌乳素血症、多囊卵巢综合征、糖尿病、甲状腺疾病等)、染色体异常(包含胚胎染色体异常和罗伯逊易位、平衡易位等夫妻染色体异常)、生殖道感染(多指由解脲支原体、沙眼衣原体感染引起的宫颈炎或子宫内膜炎)等，但仍有1/2病人发病原因不明[8-9]。
文献研究[10]表明，不明原因自然流产发生和孕妇机体内的氧化应激反应密切相关。氧化应激指的是体内氧化和抗氧化作用失衡，倾向于氧化作用，并产生大量氧化中间物[11]。并且，我国已有不少研究[12-13]证实，氧化应激参与了血管内皮损伤，而血管形成是决定胚胎着床与否、良好供血与否以及孕妇病人妊娠成功与否的关键。若孕妇病人早期发生了氧化应激，可引发其血管内皮细胞受损和引发其机体出现炎性反应，这样便会增加其机体炎性反应介质释放和激活中性粒细胞，产生大量氧化自由基，从而易导致氧自由基聚集和细胞壁浸润，最终促进动脉粥样硬化斑块的形成，而大量中性粒细胞被激活又可导致氧化自由基剧增，从而进一步加重孕妇病人机体的氧化应激反应，进而会降低孕妇妊娠过程中抗氧化系统功能，使其发生自然流产[14-15]。人体氧化应激反应包含8-isoprostane、SOD、AOA等多项氧化应激指标。本研究中，分别对60例不明原因RSA病人及59例正常妊娠妇女行血液和绒毛蜕膜组织中8-isoprostane、SOD、AOA等氧化应激指标及NF-κB、iNOS水平检测，结果显示，2组病人血液和绒毛蜕膜组织中AOA水平对比无显著差异，不明原因RSA病人血液中8-isoprostane、NF-κB和iNOS水平显著高于正常妊娠妇女，不明原因RSA病人血液中SOD水平显著低于正常妊娠妇女，不明原因RSA病人绒毛蜕膜组织中8-isoprostane、NF-κB和iNOS水平显著高于正常妊娠妇女，不明原因RSA病人血液中SOD水平显著低于正常妊娠妇女，说明不明原因RSA病人与正常妊娠妇女血液和绒毛蜕膜组织中的8-isoprostane、SOD、NF-κB和iNOS表达存在显著差异，提示这些指标可能是引发不明原因RSA发生的危险因素。
在上述影响指标中，8-isoprostane过度表达可抑制Th2细胞分泌和促进T淋巴细胞增殖，并促使Th细胞转化为Th1细胞，从而会导致母胎界面细胞因子网络失衡，引发胚胎植入失败，进而会引发孕妇病人出现非正常流产[16-18]。另外，临床研究[19-20]表明，孕妇妊娠时，其机体SOD水平升高能维持氧化和抗氧化平衡，若SOD水平降低则会导致氧化和抗氧化失衡，从而易导致孕妇难以维持正常妊娠而发生自然流产。NF-κB可参与胚胎早期发育和调节胚胎着床过程，若母胎界面NF-κB表达过度，则易诱发其下游的IFN-γ及TNF-α过度表达，从而易诱发病人发生自然流产。iNOS与孕妇病人机体免疫调节具有直接影响关系，一般情况下，iNOS基因不表达，只在多种细胞因子和内毒素刺激下，才可发生翻译、转录和表达。若其正常表达可发挥有效的免疫功能调节作用，而在妊娠免疫耐受中免疫调节作用能促进孕妇机体Th1/Th动态平衡得到有效维持，从而能维持其正常妊娠，若iNOS基因表达不正常，则会导致Th1/Th失衡，从而难以维持母胎微环境稳定，进而易引发其发生自然流产。
综上所述，不明原因RSA病人血液和绒毛蜕膜组织中的8-isoprostane、SOD、NF-κB和iNOS表达与正常妊娠妇女具有明显差异，因此，其可作为预测不明原因RSA发生的重要因子。
8-isoprostane、SOD、AOA、NF-κB及iNOS在复发性流产病人中的表达研究
Study on the expression levels of 8-isoprostane, SOD, AOA, NF-κB and iNOS in patients with recurrent spontaneous abortion
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摘要:
目的分析8-异构前列腺素（8-isoprostane）、超氧化物歧化酶（SOD）、血浆总抗氧化能力（AOA）、转录因子-κB（NF-κB）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在复发性流产病人中的表达及影响，以探讨不明原因复发性流产发病机制。 方法选取2018年1月至2019年10月119例产妇作为研究对象，分为不明原因复发性流产病人60例作为研究对象（病例组），进行正常妊娠分娩妇女作为参照对象59例（对照组），比较2组病人血液和绒毛蜕膜组织中的8-isoprostane、SOD、AOA等氧化应激指标及NF-κB、iNOS水平。 结果2组病人血液中AOA水平差异无统计学意义（P>0.05），病例组病人血液中8-isoprostane、NF-κB和iNOS水平均高于对照组（P < 0.01），SOD水平明显低于对照组（P < 0.01）；2组病人绒毛蜕膜组织中AOA水平差异无统计学意义（P>0.05），病例组绒毛蜕膜组织中8-isoprostane、NF-κB和iNOS水平均高于对照组（P < 0.01），SOD水平明显低于对照组（P < 0.01）。 结论不明原因复发性流产病人血液和绒毛蜕膜组织中的8-isoprostane、SOD、NF-κB和iNOS表达与正常妊娠妇女具有明显差异，因此，其可作为预测不明原因复发性流产发生的重要因子。 Abstract:ObjectiveTo investigate the expression levels of 8-isoprostane, SOD, AOA, NF-kB and iNOS in patients with recurrent spontaneous abortion and their effects, and explore the pathogenesis of unexplained recurrent spontaneous abortion. MethodsFrom January 2018 to October 2019, 119 maternal patients were selected, and divided into the case group(60 cases with unexplained recurrent abortion) and control group(59 cases with normal pregnancy delivery).The levels of 8-isoprostane, SOD, AOA and other oxidative stress indicators(NF-κB and iNOS) in the blood and villous decidua tissue were compared between two groups. ResultsThere was no statistical significance in the AOA level in blood between two groups(P>0.05), the levels of 8-isoprostane, NF-κB and iNOS in case group were significantly higher than those in control group(P < 0.01), and the SOD level in case group was significantly lower than that in control group(P < 0.01).The difference of the AOA level in chorion decidua tissue between two groups was not statistically significant(P>0.05), the levels of 8-isoprostane and NF-κ in chorion decidua tissue in case group were higher than those in control group(P < 0.01), and the level of SOD in case group was lower than that in control group(P < 0.01). ConclusionsThere are significant differences in the expression levels of 8-isoprostane, SOD, NF-κB and iNOS in blood and chorion decidua tissue between patients with unexplained recurrent abortion and normal pregnant women, and they can be used as an important factor to predict the occurrence of unexplained recurrent spontaneous abortion. -
Key words:
- recurrent spontaneous spabortion /
- villous decidua tissue /
- 8-isoprostane /
- SOD /
- AOA /
- NF-κB /
- iNOS
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表 1 2组病人一般资料比较(x±s)
分组 n 年龄/岁 体质量指数/(kg/m2) 对照组 59 28.6±2.1 29.6±2.7 病例组 60 28.4±2.3 29.8±2.4 t — 0.50 0.43 P — ＞0.05 ＞0.05 
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表 2 2组血液中8-isoprostane、SOD、AOA、NF-kB和iNOS水平比较(x±s)
分组 n 8-isoprostane/(ng/L) SOD/(μU/L) AOA/mmHg NF-κB/(μU/L) iNOS/(U/mL) 对照组 59 62.4±6.2 24.6±3.5 21.4±3.3 5.6±1.2 6.2±1.0 病例组 60 83.2±8.1 18.5±3.3 20.9±3.4 8.8±1.6 9.5±1.3 t — 15.75* 9.78 0.81 12.36* 15.54* P — < 0.01 < 0.01 ＞0.05 < 0.01 < 0.01 *示t′值
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表 3 2组绒毛蜕膜组织中8-isoprostane、SOD、AOA、NF-κB和iNOS水平比较(x±s)
分组 n 8-isoprostane/(ng/L) SOD/(μU/L) AOA/mmHg NF-κB/(μU/L) iNOS/(U/mL) 对照组 59 60.6±6.1 23.5±3.6 20.8±3.3 5.7±1.3 6.2±1.1 病例组 60 82.7±8.2 19.0±3.2 21.0±3.2 8.9±1.4 9.6±1.2 t — 16.70* 7.21 0.34 12.92 16.10 P — ＜0.01 < 0.01 ＞0.05 ＜0.01 ＜0.01 *示t′值
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