用于双分子荧光互补技术的Olig1/Id2基因真核表达载体的构建和鉴定

郭术俊; 赵保明; 吕合作; 胡建国

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用于双分子荧光互补技术的Olig1/Id2基因真核表达载体的构建和鉴定

郭术俊 , 赵保明 , 吕合作 , 胡建国

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用于双分子荧光互补技术的Olig1/Id2基因真核表达载体的构建和鉴定

1. 蚌埠医学院组织移植安徽省重点实验室, 安徽蚌埠 233030;
2. 蚌埠医学院免疫学教研室, 感染与免疫安徽省重点实验室, 安徽蚌埠 233030

作者简介: 郭术俊(1977-),女,实验师.

基金项目:
安徽省第五批(2010年度)优秀青年科技基金资助项目(10040606Y13)

国家自然科学基金资助项目(30700439,81071268)

安徽省教育厅自然科学研究项目(KJ2010B109)

教育部科学技术研究重点资助项目(210103)
中图分类号: Q343.1

Construction and identification of eukaryotic expression vectors of Olig1 and Id2 genes for bimolecular fluorescence complementation assay

1. Anhui Key Laboratory of Tissue Transplantation;
2. Department of Immunology, Key Laboratory of Infection and Immunity in Anhui, Bengbu Medical College, Bengbu Anhui 233030, China
CLC number: Q343.1

摘要: 目的:构建pBiFC-VN173-Olig1和pBiFC-VC155-Id2真核表达质粒,并进行鉴定。方法:以pEGFP-N3-Olig1真核表达质粒为模板扩增出Olig1基因,与pBiFC-VN173载体连接,构建pBiFC-VN173-Olig1真核表达质粒;利用RT-PCR方法从新生大鼠脊髓中提取Id2基因片段,与pBiFC-VC155载体连接,构建pBiFC-VC155-Id2真核表达质粒。对此2种质粒进行酶切鉴定、测序。结果:通过酶切鉴定、测序,证明pBiFC-VN173-Olig1和pBiFC-VC155-Id2重组质粒序列和编码框均正确构建成功。结论:成功构建了pBiFC-VN173-Olig1和pBiFC-VC155-Id2真核表达质粒,为进一步在活细胞内研究Olig1和Id2的相互作用提供了实验基础。
- 基因 /
- Olig1 /
- Id2 /
- 克隆 /
- 酶切
Abstract: Objective:To construct and identify pBiFC-VN173-Olig1 and pBiFC-VC155-Id2 eukaryotic expression plasmid for bimolecular fluorescence complementation (BiFC) assay.Methods:Rat olig1 gene from pGFP-N3-Olig1 eukaryotic expression plasmid was amplified by PCR.And rat Id2 gene from RNA of neonatal rat spinal cord was amplified by RT-PCR.The Olig1 gene was inserted into BiFC eukaryotic expression vector pBiFC-VN173 and Id2 gene was inserted into pBiFC-VC155,which were used to construct recombinant expression vector pBiFC-VN173-Olig1 and pBiFC-VC155-Id2,respectively.The recombinant vectors were identified by restriction enzyme digestion and DNA sequencing.Results:The restriction enzyme digestion and DNA sequencing results showed that the sequences and open read frames of the two vectors were completely concordant with experiment design.Conclusions:The pBiFC-VN173-Olig1 and pBiFC-VC155-Id2 were successfully constructed.These provide an experimental base for further research on interaction between Olig1 and Id2 in vivo.
- gene /
- Olig1 /
- Id2 /
- cloning /
- restriction enzyme digestion

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用于双分子荧光互补技术的Olig1/Id2基因真核表达载体的构建和鉴定

作者简介: 郭术俊(1977-),女,实验师.

1. 蚌埠医学院组织移植安徽省重点实验室, 安徽蚌埠 233030;
2. 蚌埠医学院免疫学教研室, 感染与免疫安徽省重点实验室, 安徽蚌埠 233030

收稿日期: 2010-07-23

基金项目: 安徽省第五批(2010年度)优秀青年科技基金资助项目(10040606Y13)国家自然科学基金资助项目(30700439,81071268)安徽省教育厅自然科学研究项目(KJ2010B109)教育部科学技术研究重点资助项目(210103)

关键词:

基因 /
Olig1 /
Id2 /
克隆 /
酶切

摘要: 目的:构建pBiFC-VN173-Olig1和pBiFC-VC155-Id2真核表达质粒,并进行鉴定。方法:以pEGFP-N3-Olig1真核表达质粒为模板扩增出Olig1基因,与pBiFC-VN173载体连接,构建pBiFC-VN173-Olig1真核表达质粒;利用RT-PCR方法从新生大鼠脊髓中提取Id2基因片段,与pBiFC-VC155载体连接,构建pBiFC-VC155-Id2真核表达质粒。对此2种质粒进行酶切鉴定、测序。结果:通过酶切鉴定、测序,证明pBiFC-VN173-Olig1和pBiFC-VC155-Id2重组质粒序列和编码框均正确构建成功。结论:成功构建了pBiFC-VN173-Olig1和pBiFC-VC155-Id2真核表达质粒,为进一步在活细胞内研究Olig1和Id2的相互作用提供了实验基础。