DNMT3A R882突变在急性髓系白血病中的临床意义

王蕾; 杨艳丽; 张凤; 李佳佳; 耿英华; 李骏

doi:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2020.03.011

留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名

邮箱

手机号码

标题

留言内容

验证码

DNMT3A R882突变在急性髓系白血病中的临床意义

蚌埠医学院第一附院医院血液科, 安徽蚌埠 233004

作者简介: 王蕾(1989-), 女, 硕士, 住院医师(现工作于苏州大学附属张家港医院)

通讯作者: 杨艳丽, yangyanli0702@126.com ;

中图分类号: R733.7

Clinical significance of DNMT3A R882 mutation in acute myeloid leukemia

Department of Hematology, The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, Bengbu Anhui 233004, China

Corresponding author: YANG Yan-li, yangyanli0702@126.com ;

CLC number: R733.7

摘要: 目的研究初发急性髓系白血病（AML）病人中DNA甲基化转移酶3A（DNMT3A）R882位点突变情况，并分析其相关临床资料特征。方法运用DNA基因测序法检测116例AML病人与30例缺铁性贫血病人骨髓样本中DNMT3A R882突变情况。结果116例初发AML病人中，DNMT3A R882突变共16例，包括R882H突变9例，R882C突变7例，且均为杂合突变，而良性对照组中无突变；DNMT3A R882突变型AML（Mut-DNMT3A）组病人核型正常的AML（NK-AML）人数及M4、M5人数多于DNMT3A野生型AML组（Wild-DNMT3A组）（P < 0.05）。Mut-DNMT3A组病人年龄、外周血白细胞数及血小板数高于Wild-DNMT3A组（P < 0.05）。Mut-DNMT3A组病人总生存率、无病生存率均低于Wild-DNMT3A组（P < 0.05）。结论DNMT3A R882突变易发生于AML病人，特别是NK-AML及M4、M5病人，且常合并高龄、高白细胞危险因素；DNMT3A R882突变是AML病人预后不良的生物学标志。

Abstract: ObjectiveTo investigate the mutation of DNA methyltransferase 3A(DNMT3A) R882 in patients with acute myeloid leukemia(AML), and analyze the characteristics of related clinical data.MethodsThe mutations of DNMT3A R882 in 116 patients with AML and 30 patients with iron deficiency anemia were detected using DNA gene sequencing.ResultsAmong 116 patients with AML, 16 cases with DNMT3A R882 mutation were identified, which included 9 cases with R882H mutation and 7 cases with R882C mutation, all mutations were heterozygous mutations, while there was not mutation in benign control group.The number of patients with normal karyotype AML(NK-AML), and M4 and M5 in DNMT3A R882 mutation AML(Mut-DNMT3A) group were significantly higher than that in DNMT3A wild type AML(Wild-DNMT3A) group(P < 0.05).The patient age, and white blood cell amount and platelet amount in peripheral blood in Mut-DNMT3A group were significantly higher than those in Wild-DNMT3A group(P < 0.05).The overall survival rate and disease-free survival rate in Mut-DNMT3A group were significantly lower than those in Wild-DNMT3A group(P < 0.05).ConclusionsDNMT3A R882 mutation is easy to occur in AML patients, especially NK-AML, M4 and M5 patients, and complicated with risk factors of old age and high white blood cell amonut.DNMT3A R882 mutation is a biological marker of poor prognosis in AML patients.

Key words:

变量

DNMT3A R882突变

(+)

(-)

性别

男
女

11
5

60
40

0.45^*

>0.05

年龄/岁

59.5±13.5

45.0±15.2

2.32

< 0.05

骨髓原始细胞数/%

69.2±21.6

62.1±18.3

0.87

>0.05

白细胞数/(×10⁹/L)

43.2±21.9

26.4±23.4

2.08

< 0.05

血红蛋白/(g/L)

83.9±26.9

75.2±21.1

0.57

>0.05

血小板/(×10⁹/L)

74.3±40.1

37.8±39.7

3.02

< 0.01

NK-AML组
非NK-AML组

14
2

58
42

5.91^*

< 0.05

M4、M5分型组
M1、M2分型组

12
4

30
70

12.09^*

< 0.01

*示χ²值

融合基因

DNMT3A R882突变

校正χ²

(+)

(-)

CBFβ-MYH

阳性
阴性

2
14

8
92

0.01

>0.05

AML1-ET0

阳性
阴性

0
16

18
82

2.17

>0.05

CD抗原

DNMT3A R882突变

χ²

(+)

(-)

CD117

阳性
阴性

8
8

56
44

0.20

>0.05

HLA-DR

阳性
阴性

15
1

85
15

0.89

>0.05

CD13

阳性
阴性

12
4

78
22

0.07

>0.05

CD33

阳性
阴性

11
5

75
25

0.28

>0.05

CD15

阳性
阴性

11
5

53
47

1.38

>0.05

MPO

阳性
阴性

13
3

72
28

0.60

>0.05

CD56

阳性
阴性

3
13

22
78

0.09

>0.05

CD36

阳性
阴性

4
12

13
87

1.59

>0.05

CD64

阳性
阴性

3
13

9
91

1.41

>0.05

CD14

阳性
阴性

8
8

38
62

0.83

>0.05

DNMT3A R882突变在急性髓系白血病中的临床意义

通讯作者: 杨艳丽, yangyanli0702@126.com;

作者简介: 王蕾(1989-), 女, 硕士, 住院医师(现工作于苏州大学附属张家港医院)

蚌埠医学院第一附院医院血液科, 安徽蚌埠 233004

收稿日期: 2017-05-17

录用日期: 2019-01-20

网络出版日期: 2020-03-15

关键词:

全文HTML

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)是一类严重危害人类健康的异质性血液系统恶性肿瘤，发病率占我国成人白血病首位。DNA甲基化转移酶3A(DNA methyltransferase 3A, DNMT3A)位于人类2号染色体短臂2区3带(2p23)，是重要的甲基化转移酶之一，主要负责基因组DNA从头甲基化，在多种恶性肿瘤的发病机制中发挥重要作用^[1-3]。研究^[4-13]发现，在成人AML病人中DNMT3A R882位点高频突变，且常合并某些高危因素，是病人预后不良的重要分子生物学标志。本研究旨在通过收集临床骨髓标本及检测DNMT3A R882位点突变情况，探讨DNMT3A R882突变与AML发生、发展的相关性。

1. 资料与方法

1.1. 研究对象

收集2012年12月至2015年12月在蚌埠医学院第一附属医院被诊断为初发AML病人的骨髓标本116例及被诊断为缺铁性贫血病人的骨髓标本30例作为良性对照组。AML组男71例，女45例，年龄18~89岁。临床分型：M1型15例，M2型36例，M4型30例，M5型35例。所有病人均经细胞形态学、流式免疫学、细胞遗传学及分子生物学检查，并按照FAB国际分型标准明确诊断。良性对照组样本30例，男12例，女18例，年龄23~75岁。所有骨髓标本均经病人或家属签署知情同意书。

治疗方案：AML病人住院后均接受诱导缓解治疗，方案为蒽环类药物+阿糖胞苷(3 d+7 d)，如IA(去甲氧柔红霉素3 d+阿糖胞苷7 d)、DA(柔红霉素3 d+阿糖胞苷7 d)等，剂量参照《血液科临床处方手册》，并根据病人身高、体质量及体表面积而定。

疗效及随访：对116例AML病人通过查询住院病历、门诊病历及打电话方式进行随访，随访截止日期为2016年12月31日。完全缓解(complete remission, CR)定义为病人经初次或2次诱导缓解治疗后满足以下条件：(1)白血病症状及体征消失；(2)外周血中性粒细胞绝对数≥1.5×10⁹/L，血小板≥100×10⁹/L，白细胞分类中无白血病细胞；(3)骨髓原始细胞总数≤5%。总体生存时间(overall survival time，OS)定义为AML被确诊之日至死亡或末次随访的时间。无病生存时间(disease-free survival time, DFS)定义为经治疗获得CR后至复发或死亡的时间。

1.2. 主要试剂和仪器

超低温冰箱(-80 ℃)、低温高速离心机(Thermo科技公司)；核酸蛋白检测仪(Eppendorf科技公司)；梯度PCR扩增仪(东胜国际贸易有限公司)；水平式凝胶电泳槽及电泳仪、全自动凝胶成像系统(Tanon科技公司)；DNA上样缓冲液(6×)、TIANamp Genomic DNA Kit(天根生化科技有限公司)；Marker、5×TBE缓冲液、溴化乙锭(上海生物工程股份有限公司)。

1.3. DNA提取及突变检测

将收集到的骨髓标本提取单个核细胞后，根据DNA提取试剂盒说明提取基因组DNA，置于分光光度计中检测DNA浓度及纯度，并通过聚合酶链式反应及琼脂糖凝胶电泳，将高纯度的DNA送于上海生物工程股份有限公司进行DNMT3A R882突变检测。

1.4. 统计学方法

采用秩和检验、χ²检验和Log-rank检验。

3. 讨论

本实验检测到DNMT3A R882在AML组中突变率为13.8%，在良性对照组中无突变，由于对照组中病例数偏少，2组间差异无统计学意义。DNMT3A R882在NK-AML中突变率为19.4%，与以往发现的DNMT3A R882在AML中突变率为9.3%~19.7%、在NK-AML中达18.1~27%^[4-11]相符。

细胞表面相关免疫表型的表达可以判断骨髓细胞来源及发育程度，章梁君等^[9]研究指出DNMT3A R882突变的AML病人中细胞表面CD14与CD56分子表达显著增高，而本研究虽然显示M4、M5分型的病人人数在Mut-DNMT3A组中所占比例高于Wild-DNMT3A组，不过在分析2组间细胞免疫表型表达时，发现2组间与单核细胞表面标志相关的CD14、CD64、CD36、CD56分子表达差异并无统计学意义，这可能是因为细胞表面CD分子分化程度，或是成熟程度不一所造成的结果。

我们在分析Mut-DNMT3A组与Wild-DNMT3A组间AML1-ETO及CBFβ-MYH融合基因时，发现2组间人数差异均无统计学意义，但我们的研究发现Mut-DNMT3A更易发生于NK-AML病人，且EL GHANNAM等^[8]研究发现Mut-DNMT3A常伴有NMP1、FLT3-ITD突变，特别是NMP1突变常与DNMT3A R882突变关系密切^[6-10]。这可能是由于我们分析的融合基因种类少的原因，且提示当病人染色体核型正常，合并NMP1、FLT3-ITD突变时，可进一步检测DNMT3A R882突变。

我们虽然发现Mut-DNMT3A组病人年龄、外周血白细胞数及血小板数高于Wild-DNMT3A组，与HOU等^[7]发现的其中一部分相符，但其亦指出Mut-DNMT3A组病人中骨髓原始细胞数显著增加，而我们的研究显示Mut-DNMT3A组病人骨髓原始细胞数虽然较Wild-DNMT3A组病人增加，但差异无统计学意义。也有研究^[12]指出AML病人骨髓原始细胞数、外周血白细胞数、血小板数及年龄与DNMT3A R882是否突变无关。造成各研究中出现差异的原因可能有人种的不同、病例收集数量不同、实验研究方法不同及误差等。

大量研究^[10-13]显示DNMT3A R882突变病人复发率极高、生存率下降，预示着病人预后不良。本实验中发现Mut-DNMT3A组与Wild-DNMT3A组间病人CR率差异虽无统计学意义，但Mut-DNMT3A组病人OS率、DFS率较Wild-DNMT3A组病人均下降，提示DNMT3A R882突变可能是AML病人预后不良的生物学标志。

通过本实验研究可以得出DNMT3A R882突变易发生于AML病人，特别是NK-AML或M4、M5病人，且常合并高龄、高白细胞危险因素，DNMT3A R882突变使OS率及DFS率显著下降，是病人预后不良的生物分子学标志，也提示DNMT3A R882突变在AML的发病机制中发挥重要作用，仍需大量研究进一步阐明细胞分子生物学机制在其中的作用。

参考文献 (13)

[1]	MAYLE A, YANG L, RODRIGUEZ B, et al.Dnmt3a loss predisposes murine hematopoietic stem cells to malignant transformation[J].Blood, 2015, 125(4):629.
[2]	YANG L, RAU R, GOODELL MA.DNMT3A in haematological malignancies[J].Nat Rev Cancer, 2015, 15(3):152.
[3]	RUSSLER-GERMAIN DA, SPENCER DH, YOUNG MA, et al.The R882H DNMT3A mutation associated with AML dominantly inhibits wild-type DNMT3A by blocking its ability to form active tetramers[J].Cancer Cell, 2014, 25(4):442.
[4]	JOST E, LIN Q, WEIDNER CI, et al.Epimutations mimic genomic mutations of DNMT3A in acute myeloid leukemia[J].Leukemia, 2014, 28(6):1227.
[5]	THAKRAL G, VIERKOETTER K, NAMIKI S, et al.AML multi-gene panel testing:A review and comparison of two gene panels[J].Pathol Res Pract, 2016, 212(5):372.
[6]	ZARE-ABDOLLAHI D, SAFARI S, MOVAFAGH A, et al.A mutational and expressional analysis of DNMT3A in acute myeloid leukemia cytogenetic subgroups[J].Hematology, 2015, 20(7):397.
[7]	HOU HA, KUO YY, LIU CY, et al.DNMT3A mutations in acute myeloid leukemia:stability during disease evolution and clinical implications[J].Blood, 2012, 119(2):559.
[8]	EL GHANNAM D, TAALAB MM, GHAZY HF, et al.DNMT3A R882 mutations in patients with cytogenetically normal acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome[J].Blood Cells Mol Dis, 2014, 53(1/2):61.
[9]	章梁君, 蒋能刚, 周娟, 等.急性髓细胞白血病DNMT3A突变的免疫表型特征分型[J].临床检验杂志, 2014, 32(8):572.
[10]	AHN JS, KIM HJ, KIM YK, et al.DNMT3A R882 mutation with FLT3-ITD positivity is an extremely poor prognostic factor in patients with normal-karyotype acute myeloid leukemia after allogeneic hematopoietic cell transplantation[J].Biol Blood Marrow Transplant, 2016, 22(1):61.
[11]	XU Y, SUN Y, SHEN H, et al.Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation could improve survival of cytogenetically normal adult acute myeloid leukemia patients with DNMT3A mutations[J].Am J Hematol, 2015, 90(11):992.
[12]	IBRAHEM L, MAHFOUZ R, ELHELW L, et al.Prognostic significance of DNMT3A mutations in patients with acute myeloid leukemia[J].Blood Cells Mol Dis, 2015, 54(1):84.
[13]	IM AP, SEHGAL AR, CARROLL MP, et al.DNMT3A and IDH mutations in acute myeloid leukemia and other myeloid malignancies:associations with prognosis and potential treatment strategies[J].Leukemia, 2014, 28(9):1774.

[1]	袁媛 , 张凤 . 急性髓系白血病病人CDH13基因甲基化状态检测及其临床意义. 蚌埠医学院学报, 2017, 42(10): 1340-1343. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2017.10.014
[2]	李娟 , 马丽 , 张小晴 , 童也 , 李玉云 . 急性髓系白血病中RUNX1突变基因相关预后模型的构建. 蚌埠医学院学报, 2021, 46(6): 713-717. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2021.06.003
[3]	宋辉 , 于艺冰 , 郭媛媛 . N-乙酰基转移酶10基因与急性髓系白血病病人预后的关系分析. 蚌埠医学院学报, 2023, 48(2): 165-169. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2023.02.006
[4]	阮敏 , 黄震琪 , 吴炜 , 梁莉 , 曾庆曙 . 急性髓系白血病并感染病人血清CD64、IL-6、PDW水平与病原菌分布特征、感染预后的关联性. 蚌埠医学院学报, 2022, 47(3): 340-345. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2022.03.017
[5]	吴冬会 , 杨艳丽 , 周黎黎 , 马丽 , 汪晶 , 程阳 , 徐旺旺 , 李玉云 . FBXO22在急性髓系白血病中的表达分析. 蚌埠医学院学报, 2022, 47(11): 1573-1575. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2022.11.023
[6]	周黎黎 , 耿英华 , 朱俊锋 . JAKs家族基因在急性髓系白血病中的表达与预后的相关性分析. 蚌埠医学院学报, 2015, 40(10): 1305-1308.
[7]	吴计划 , 杨广娥 , 何远知 , 叶小飞 , 江亮亮 , 杨斌 . SCN1A基因突变特点及相关癫痫的临床特征. 蚌埠医学院学报, 2020, 45(1): 51-56. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2020.01.013
[8]	郑翠侠 , 韩兵 , 周翔 , 张荣新 , 万欢英 , 臧旺福 , 陈中元 . 非小细胞肺癌表皮生长因子受体P848L突变及其功能研究. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(8): 788-790,793.
[9]	吴勇 , 刘学刚 , 赵武 , 徐家丽 , 郭嘉诚 , 李慧敏 , 丁周志 , 王亚明 , 宋伟 . 野生型及c.454C>T突变型人血管内皮生长因子A基因重组真核表达载体的体外表达. 蚌埠医学院学报, 2015, 40(2): 148-151. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2015.02.003
[10]	施青青 , 吴蔚 , 孙幸 , 方悦之 , 朱淼 , 顾健 , 倪军 . 定量检测WT-1基因在急性白血病病人中的表达及临床意义. 蚌埠医学院学报, 2020, 45(1): 14-17. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2020.01.004
[11]	朱太岗 , 董毅 , 张飞虎 , 汤继春 , 李月红 , 夏瑞祥 . 老年急性髓细胞白血病临床特点及个体化治疗疗效观察. 蚌埠医学院学报, 2014, 39(8): 1026-1027,1030.
[12]	唐洁 , 申林 , 李柏青 , 赵皓 , 余晾 , 郑洪波 . SYBR Green实时定量PCR检测急性髓系白血病患者BAALC基因表达. 蚌埠医学院学报, 2010, 35(7): 656-659.
[13]	田万林 , 宫继勇 , 邓蓉 . 免疫细胞化学在急性白血病免疫分型及骨髓转移癌鉴定中的应用. 蚌埠医学院学报, 2005, 30(6): 555-557.
[14]	杨艳丽 , 耿英华 , 李佳佳 , 李骏 , 张凤 . 急性髓细胞白血病免疫分型特点及临床意义. 蚌埠医学院学报, 2011, 36(6): 561-563.
[15]	叶隽 , 李静 . 去甲氧柔红霉素治疗急性髓细胞性白血病临床观察. 蚌埠医学院学报, 2012, 36(9): 1051-1052.
[16]	段明霞 . 血凝酶防治小儿白血病PICC穿刺点出血的效果观察. 蚌埠医学院学报, 2016, 41(9): 1250-1251. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.09.043
[17]	杨艳丽 , 李骏 , 耿英华 , 纪淑仪 . 小剂量高三尖杉酯碱、阿糖胞苷联合G-CSF治疗急性髓细胞白血病28例临床分析. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(4): 307-308.
[18]	王玮 , 陈立军 , 初殿伟 , 呼文亮 . 人源肝癌细胞系中甲胎蛋白基因表达及甲基化的研究. 蚌埠医学院学报, 2009, 34(2): 106-109.
[19]	王安潮 , 王炯 , 陈余清 . 肺癌患者痰液脱落细胞端粒酶活性和p53基因突变的检测. 蚌埠医学院学报, 2005, 30(3): 215-218.
[20]	韩宗兰 , 王兰英 , 王海楠 . 苯丙氨酸羟化酶基因突变检测对苯丙酮尿症的诊断意义. 蚌埠医学院学报, 2021, 46(10): 1415-1419. doi: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2021.10.023

留言板